沙葱萤叶甲保幼激素结合蛋白基因GdJHBP的克隆及表达分析

发布时间：2021-02-03 18:03

　　【目的】克隆沙葱萤叶甲Galerucadaurica保幼激素结合蛋白基因（Juvenilehormonebinding protein,JHBP）cDNA全长序列,分析其分子特征和表达特性,为进一步明确其在沙葱萤叶甲生长发育及滞育中的作用奠定基础。【方法】基于本实验室组装的沙葱萤叶甲转录组数据库,采用RACE技术,克隆沙葱萤叶甲GdJHBP基因cDNA全长序列;运用ORF Finder、SignaIP、DNAMAN和TMHMM等软件分析其分子特征;利用MEGA6.0软件中的邻接法（Neighbor-joining,NJ）构建系统发育树;应用荧光实时定量PCR（RT-qPCR）技术分析GdJHBP在沙葱萤叶甲不同发育时期、成虫不同组织及高温胁迫下的表达模式。【结果】克隆获得了沙葱萤叶甲保幼激素结合蛋白基因GdJHBP cDNA全长序列（GenBank登录号:MG460309）,cDNA全长为826 bp,开放阅读框（ORF）为714 bp,编码237个氨基酸;蛋白质预测分子量为26.58ku,等电点为4.37;包含1条信号肽,无跨膜区,且在第27-189位氨基酸之间存在一个保幼激素结合蛋... 

【文章来源】：应用昆虫学报. 2020,57(03)北大核心

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

沙葱萤叶甲GdJHBP中间片段（A）、5?RACE目的片段（B）和3?RACE目的片段（C)PCR扩增电泳图

RT-qPCR分析表明，GdJHBP在沙葱萤叶甲不同发育阶段均有表达，且存在显著差异（P<0.05）（图4）。其中，在1龄和2龄幼虫中表达量最高，其次为3龄幼虫，在卵和蛹中的表达量最低；在成虫期，GdJHBP表达量在滞育前（羽化3 d）较高，进入滞育（羽化7 d）以后，表达量显著下降并维持在较低的水平，羽化40 d以后随着成虫发育，表达量又逐渐升高，滞育解除（羽化后100 d）后，表达量显著上升，但远低于幼虫期的表达量。GdJHBP在沙葱萤叶甲成虫头、胸和腹部均有表达，但在胸和腹部的表达量远高于头部（图5）。图3 沙葱萤叶甲GdJHBP与其它昆虫JHBP基因的氨基酸序列比对

图2 沙葱萤叶甲GdJHBP基因的核苷酸及推导的编码氨基酸序列（A）及序列包含的保守功能域（B)图4 沙葱萤叶甲与其它昆虫保幼激素结合蛋白氨基酸序列构建的系统进化树

【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕保幼激素结合蛋白Bmtol基因的克隆及功能分析[J]. 何石宝,殷娅茹,郑茜,郭东东,辛佳,朱勇.  生物工程学报. 2018(01)
[2]家蚕保幼激素结合蛋白Bmtol基因的克隆及表达分析[J]. 何石宝,杨成飞,尚杉,王凌燕,唐文超,朱勇.  中国生物工程杂志. 2017(10)
[3]沙葱萤叶甲的形态特征和生物学特性研究[J]. 昊翔,周晓榕,庞保平,张卓然,包祥.  草地学报. 2015(05)
[4]灰飞虱保幼激素结合蛋白基因的克隆及表达动态[J]. 贺秀婷,张亚楠,李飞,李国清,董双林.  南京农业大学学报. 2012(02)



本文编号：3016936