林麝源铜绿假单胞菌的分离鉴定及毒力研究

发布时间：2021-02-04 17:06

　　本试验结合传统细菌学鉴定方法和分子生物学方法,从发病死亡的林麝肺组织和肝组织中分离鉴定出了三株铜绿假单胞菌,提取分离株的粗毒素并作用于家兔外周血淋巴细胞,观察粗毒素对淋巴细胞的增殖影响。根据文献合成保守性通用引物,对PAsp-1、PAsp-2、PAsp-3的16SrDNA进行扩增和目标片段测序,将测序结果在NCBI上进行相似性比较,运用生物学软件DNA star7.1进行发育树的构建,并结合常规的细菌学鉴定结果,最终确定PAsp-1、PAsp-2、PAsp-3为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。采用单因素试验对各菌株的培养条件进行了优化,确定了PAsp-1、PAsp-2和PAsp-3的最佳液体培养条件均为：温度40℃,pH值6.5。在上述最佳条件下培养铜绿假单胞菌,三株菌的增殖速度均在6-14h最快,在14h时达到峰值。药物敏感性试验结果显示,PAsp-1、PAsp-2和PAsp-3均对庆大霉素、丁胺卡那霉素、哌拉西林、头孢他啶、头孢哌酮、环丙沙星敏感；对羧苄青霉素、四环素和头孢曲松中度敏感；对青霉素、头孢唑啉、氨苄西林、红霉素、复方新诺明和美满霉素具有耐药... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1. 前言
    1.1 铜绿假单胞菌
    1.2 铜绿假单胞菌的分离鉴定
    1.3 我国养殖业中铜绿假单胞菌的感染现状
    1.4 铜绿假单胞菌主要毒力因子的致病作用
        1.4.1 蛋白酶
        1.4.2 外毒素A
        1.4.3 绿脓菌素
        1.4.4 鼠李糖脂
        1.4.5 内毒素
        1.4.6 菌毛与鞭毛
        1.4.7 其它致病因子
    1.5 我国人工养殖林麝的现状
    1.6 本研究的目的和意义
2. 试验材料
    2.1 试验病料和试验动物
    2.2 主要培养基
    2.3 主要试剂和药品
    2.4 试验仪器
3. 试验方法
    3.1 菌株的分离鉴定
        3.1.1 样品采集
        3.1.2 分离与纯化
        3.1.3 形态及培养特性
        3.1.4 理化特性
        3.1.5 菌种保存
        3.1.6 16SrDNA基因序列测定与系统发育学分析
    3.2 林麝源铜绿假单胞菌的优化培养、耐药性和致病性试验
        3.2.1 菌株培养的最适温度和最适pH值
        3.2.2 平板计数法测定活菌数
        3.2.3 药物敏感性测定
        3.2.4 致病性试验
    3.3 林麝源铜绿假单胞菌的毒素研究
        3.3.1 毒素的粗提
        3.3.2 兔外周血淋巴细胞的分离和培养
        3.3.3 体外淋巴细胞增殖试验
4. 试验结果
    4.1 林麝源铜绿假单胞菌的分离鉴定
        4.1.1 菌株分离与纯化
        4.1.2 分离菌株形态及染色特性
        4.1.3 菌株16SrDNA分子鉴定
    4.2 林麝源铜绿假单胞菌的优化培养、耐药性和致病性试验
        4.2.1 菌株培养的最适温度和最适pH值
        4.2.2 平板计数法测定活菌数
        4.2.3 药物敏感性试验
        4.2.4 致病性试验
    4.3 铜绿假单胞菌的毒素研究
        4.3.1 毒素浓度的测定
        4.3.2 兔外周血淋巴细胞的分离
        4.3.3 铜绿假单胞菌毒素对家兔外周血淋巴细胞增殖的影响
5. 讨论
    5.1 菌株的分离鉴定
    5.2 菌株的优化培养、耐药性和致病力试验
    5.3 粗毒素研究
        5.3.1 粗毒素的提取和淋巴细胞的分离培养
        5.3.2 淋巴细胞增殖试验
6. 结论
7. 本论文的创新性
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]2011年中国CHINET呼吸道病原菌分布和耐药性监测[J]. 杨青,俞云松,孙自镛,陈中举,徐英春,张小江,汪复,朱德妹,胡付品,卓超,苏丹虹,张泓,孔菁,张朝霞,季萍,王传清,王爱敏,倪语星,孙景勇,单斌,杜艳,胡云建,艾效曼,徐元宏,沈继录,黄文祥,贾蓓,魏莲花,吴玲.  中国感染与化疗杂志. 2013(05)
[2]竹鼠绿脓杆菌的分离和鉴定[J]. 冯世文,李军,曾芸,杨威,陈泽祥.  中国动物保健. 2013(05)
[3]铜绿假单胞菌感染现状及耐药分析[J]. 张栩,盛传伦.  中国实验诊断学. 2013(01)
[4]死亡番鸭胚中绿脓杆菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 陈红梅,程龙飞,万春和,施少华,傅光华,黄瑜.  中国兽医杂志. 2012(12)
[5]绿脓杆菌外毒素A的最新研究进展[J]. 夏海华,于冲,曲晓军,孙建华,王金英.  生物技术. 2012(02)
[6]绿脓杆菌研究进展[J]. 韩青松,简永利,涂宜强,高永安,宋显章,涂国众,段龙川.  畜牧与饲料科学. 2012(01)
[7]雏鸡绿脓杆菌病病原的分离与鉴定[J]. 王勇.  现代农业科技. 2011(15)
[8]圈养林麝脓肿病病原菌分离鉴定及药敏分析[J]. 赵克雷,李旭鑫,帕哈尔定·帕拉哈提,曾博,张修月,岳碧松.  四川动物. 2011(04)
[9]雏鸡绿脓杆菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 靳双星,陈理盾,段继永.  中国畜牧兽医. 2011(07)
[10]水貂绿脓杆菌分离株的生物学特性和血清型分析[J]. 白雪,柴秀丽,闫喜军,高晗,张海玲,赵建军,张蕾,邵西群,罗国良,王长凤.  畜牧与兽医. 2011(07)

硕士论文
[1]铜绿假单胞菌PA2800在耐药性和致病性中的作用研究[D]. 魏金花.西北大学 2010



本文编号：3018648