两株猪源日本脑炎病毒的分离鉴定与编码区序列克隆分析

发布时间：2021-02-07 17:28

　　日本脑炎（Japanese encephalitis）,又称流行性乙型脑炎,简称乙脑,是由日本脑炎病毒（Japanses encephalitis virus, JEV）引起的一种人畜共患性传染病。JEV主要的传播媒介是库蚊,对多宿主具有致病作用,人是其终末宿主。JEV不仅引起严重的公共卫生问题,且可引起其扩大宿主猪的繁殖障碍,对畜牧业造成很大损失。中国是乙脑高发的国家。近年来,我国的畜牧业,特别是养猪业高速发展,增加了乙脑监测的难度和发生的风险。本试验从猪流产胎儿脑组织样中分离到两株乙脑病毒,对其生物学特性进行系统的研究；克隆了二者编码区序列,与GenBank中其他毒株比较,进行了分子生物学的分析,为乙脑在中国特别是四川省的预防和控制提供分子流行病学依据,丰富了乙脑研究的素材。1两株猪源日本脑炎病毒的分离鉴定采用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）对从四川各地采集蚊样及猪流产死胎样本进行JEV的病原检测,检测阳性的样品脑内接种5日龄乳鼠,2批采自大兴的流产胎儿样品均在接种第3代后4天明显表现出沉郁、拒乳、抽搐并消瘦,第5天衰竭麻痹,最终致死。发病乳鼠的脑组织取出,研磨离心处理后接种B... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一部分 文献综述
    1 流行现状
        1.1 流行范围
        1.2 流行模式
    2 分型及分布
    3 JEV的培养特性
    4 JEV的分子生物学特征
        4.1 JEV病毒基因组的结构特征
        4.2 JEV的蛋白质组相关研究
    5 JE疫苗研究概况
        5.1 灭活苗
        5.2 减毒活疫苗
        5.3 基因工程苗
        5.4 减毒活疫苗SA14-14-2面临的挑战
    6 研究目的与意义
第二部分 试验研究
    第一章 日本脑炎病毒SCYA201201和SCYA201202株的分离鉴定
        1 材料
            1.1 试验材料
            1.2 主要试剂
            1.3 主要试剂的配制
            1.4 主要仪器设备
        2 方法
            2.1 样品的采集
            2.2 样品的处理
            2.3 样品的RT-PCR检测
            2.4 病毒的分离培养
            2.5 病毒的鉴定
        3 结果
            3.1 病毒分离结果
            3.2 病毒鉴定结果
        4 讨论
        5 小结
    第二章 JEV SCYA201201和SCYA201202株编码区序列分析
        1. 材料
            1.1 主要毒株、菌株和质粒
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 参考毒株
        2 方法
            2.1 病毒增殖
            2.2 引物设计
            2.3 RNA提取
            2.4 RT-PCR反应
            2.5 目的片段的回收
            2.6 平末端片段加A
            2.7 目的片段的克隆
            2.8 测序结果分析
        3 结果
            3.1 SCYA201201、5CYA201202株cDNA的8段PCR扩增结果
            3.2 编码区核苷酸序列和编码氨基酸序列分析
            3.3 SCYA201201、SCYA201202株的进化分析
            3.4 氨基酸变异点
        4 讨论
        5 小结
    第三章 JEV分离株生物学特性初步研究
        1 材料
            1.1 试验材料
            1.2 主要试剂
            1.3 主要试剂的配制
            1.4 主要仪器设备
        2 方法
            2.1 血凝试验
50测定">            2.2 SCYA201201、SCYA201202株的LD₅₀测定
            2.3 病毒组织嗜性的研究
        3 结果
            3.1 血凝试验结果
50的测定结果">            3.2 LD₅₀的测定结果
            3.3 SCYA201201株组织嗜性研究结果
        4 讨论
        5 小结
结论
参考文献
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]中国首次分离的二株基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒全基因组序列分析（英文）[J]. 冯云,李灿委,章域震,杨卫红,张海林.  中国人兽共患病学报. 2013(09)
[2]JEV入侵BHK-21细胞内吞途径的初步研究[J]. 曹三杰,黄恒,刘凯,石双艳,黄小波,文心田.  中国人兽共患病学报. 2013(08)
[3]2004-2010年我国流行性乙型脑炎发病及死亡的季节性分析[J]. 郭海强,曲波,丁海龙,孙高.  中国媒介生物学及控制杂志. 2011(03)
[4]2008年甘肃省新分离乙脑病毒的分子生物学特征[J]. 李铭华,付士红,冯云,高晓艳,翟友刚,于德山,李国太,贾玉新,梁国栋.  中华实验和临床病毒学杂志. 2009 (04)
[5]山东省新分离乙脑病毒（SD08-10株）全基因组序列特征[J]. 高晓艳,王海岩,王环宇,付士红,刘桂芳,李岩,李铭华,徐爱强,梁国栋.  中华实验和临床病毒学杂志. 2009 (04)
[6]浙江省基因Ⅰ型乙脑病毒全基因序列的测定及分析[J]. 谢荣辉,朱函坪,付士红,程胤凯,徐芳,姚苹苹,杨章女,周小龙,朱智勇.  中华实验和临床病毒学杂志. 2009 (04)
[7]2008年辽宁省乙脑病毒分离株全基因组特征分析[J]. 曹玉玺,付士红,王环宇,潘晓玲,张稷博,梁国栋.  中华实验和临床病毒学杂志. 2009 (04)
[8]猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定及其E基因分析[J]. 郑浩,张建武,袁世山.  中国兽医科学. 2009(06)
[9]乙型脑炎病毒SXBJ07株的分离鉴定及序列分析[J]. 王韦华,张旭,张彦明,邢福珊,徐彦召.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2009(04)
[10]广东省乙型脑炎流行特征及其防制策略[J]. 张吉凯,赵占杰,邵晓萍,梁剑,邹远闻.  中国人兽共患病学报. 2008(10)



本文编号：3022566