Sec62/Sec63复合物对流行性乙型脑炎病毒复制影响的研究
发布时间：2021-02-08 04:54
流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）是由流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的一种蚊媒性人兽共患病。JEV可感染人与多种动物,主要的传播媒介为三带喙库蚊,通过蚊虫的叮咬在宿主之间传播,水鸟和猪为主要的扩大宿主,人为终末宿主。目前流行性乙型脑炎仍没有有效的治疗方法,以预防为主,主要是通过接种疫苗进行预防。虽然流行性乙型脑炎目前已得到有效的控制,但对于流行性乙型脑炎病毒的复制周期的研究仍有许多空白,对于宿主因子在病毒复制周期中的不同阶段发挥的作用仍不清楚。Sec62/Sec63复合体由Sec62蛋白和Sec63蛋白组成,为内质网上的跨膜蛋白,主要功能是与参与某些蛋白的新生前体多肽向内质网的Sec61通道中的转运过程。Sec62可以与核糖体相互作用,参与蛋白质的翻译,影响内质网中蛋白质的易位过程,可以引起内质网应激。Sec63蛋白由3个跨膜结构域组成,内质网内J结构域与分子伴侣（Binding Protein,Bip）相互作用,促进前体蛋白通过Sec61通道进行易位。为研究Sec62/Sec63复合物对JEV复...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 流行性乙型脑炎流行病学及传播特征
1.2 流行性乙型脑炎病毒的基因型
1.3 流行性乙型脑炎的发病机理
1.4 流行性乙型脑炎的防控
1.5 分子生物学
1.5.1 病毒及基因组结构
1.5.2 蛋白质功能
1.5.3 JEV入侵及复制过程
1.6 宿主蛋白对黄病毒复制影响的研究进展
1.7 研究宿主蛋白对病毒复制影响的方法
1.7.1 RNA干扰技术研究
1.7.2 基因编辑技术研究
1.7.3 双分子荧光互补技术（bimolecular fluorescence complementation,Bi FC）
1.8 Sec62/Sec63 复合物
1.9 研究目的与意义
第二章 SEC62与SEC63 基因敲除细胞系的构建
2.1 实验材料
2.2 实验方法
2.2.1 sgRNA的设计与合成
2.2.2 sgRNA表达质粒的构建
2.2.3 重组质粒的培养与提取
2.2.4 SEC62、SEC63 基因敲除细胞的克隆筛选
2.2.5 基因敲除细胞系的测序鉴定
2.2.6 基因敲除细胞系的western blot鉴定
2.3 实验结果
2.3.1 重组质粒p Sec62-sg RNA与 p Sec63-sg RNA的构建与鉴定
2.3.2 基因敲除细胞系靶基因序列测定结果
2.3.3 SEC62 KO HEK-293 细胞的western blot鉴定
2.4 讨论
第三章 Sec62与Sec63对JEV复制影响的研究
3.1 实验材料
3.2 实验方法
3.2.1 si RNA干扰SEC62与SEC63对JEV感染率影响
3.2.2 SEC62、SEC63基因敲除对JEV复制影响
3.2.3 SEC62、SEC63基因敲除对JEV基因组复制的影响
3.2.4 SEC62、SEC63基因敲除对JEV E蛋白表达影响的检测
3.2.5 SEC62、SEC63基因敲除对JEV子代病毒影响
3.2.6 双分子荧光互补检测Sec62、Sec63与JEV蛋白的相互作用
3.3 结果
3.3.1 si RNA干扰SEC62与SEC63 后降低JEV感染率
3.3.2 SEC62、SEC63基因敲除影响JEV的复制
3.3.3 SEC62、SEC63基因敲除对JEV基因组复制的影响
3.3.4 SEC62、SEC63基因敲除影响JEV E蛋白的表达
3.3.5 SEC62、SEC63基因敲除对JEV滴度的影响
3.3.6 Bi FC检测Sec62与Sec63与JEV蛋白的相互作用
3.4 讨论
第四章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]Genome engineering using the CRISPR/Cas system[J]. Takuro Horii,Izuho Hatada. World Journal of Medical Genetics. 2014(03)
[2]N-糖基化对乙型脑炎病毒prME和NS1基因免疫效果影响的研究[J]. 张子重,汪雪,宰俊杰,孙乐强,宋云峰,陈焕春. 病毒学报. 2012(03)
硕士论文
[1]流行性乙型脑炎病毒prM蛋白furin蛋白酶剪切位点突变分析及稳定表达细胞系的构建[D]. 李业南.中国农业科学院 2013
本文编号：3023399
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
1.1 流行性乙型脑炎流行病学及传播特征
1.2 流行性乙型脑炎病毒的基因型
1.3 流行性乙型脑炎的发病机理
1.4 流行性乙型脑炎的防控
1.5 分子生物学
1.5.1 病毒及基因组结构
1.5.2 蛋白质功能
1.5.3 JEV入侵及复制过程
1.6 宿主蛋白对黄病毒复制影响的研究进展
1.7 研究宿主蛋白对病毒复制影响的方法
1.7.1 RNA干扰技术研究
1.7.2 基因编辑技术研究
1.7.3 双分子荧光互补技术（bimolecular fluorescence complementation,Bi FC）
1.8 Sec62/Sec63 复合物
1.9 研究目的与意义
第二章 SEC62与SEC63 基因敲除细胞系的构建
2.1 实验材料
2.2 实验方法
2.2.1 sgRNA的设计与合成
2.2.2 sgRNA表达质粒的构建
2.2.3 重组质粒的培养与提取
2.2.4 SEC62、SEC63 基因敲除细胞的克隆筛选
2.2.5 基因敲除细胞系的测序鉴定
2.2.6 基因敲除细胞系的western blot鉴定
2.3 实验结果
2.3.1 重组质粒p Sec62-sg RNA与 p Sec63-sg RNA的构建与鉴定
2.3.2 基因敲除细胞系靶基因序列测定结果
2.3.3 SEC62 KO HEK-293 细胞的western blot鉴定
2.4 讨论
第三章 Sec62与Sec63对JEV复制影响的研究
3.1 实验材料
3.2 实验方法
3.2.1 si RNA干扰SEC62与SEC63对JEV感染率影响
3.2.2 SEC62、SEC63基因敲除对JEV复制影响
3.2.3 SEC62、SEC63基因敲除对JEV基因组复制的影响
3.2.4 SEC62、SEC63基因敲除对JEV E蛋白表达影响的检测
3.2.5 SEC62、SEC63基因敲除对JEV子代病毒影响
3.2.6 双分子荧光互补检测Sec62、Sec63与JEV蛋白的相互作用
3.3 结果
3.3.1 si RNA干扰SEC62与SEC63 后降低JEV感染率
3.3.2 SEC62、SEC63基因敲除影响JEV的复制
3.3.3 SEC62、SEC63基因敲除对JEV基因组复制的影响
3.3.4 SEC62、SEC63基因敲除影响JEV E蛋白的表达
3.3.5 SEC62、SEC63基因敲除对JEV滴度的影响
3.3.6 Bi FC检测Sec62与Sec63与JEV蛋白的相互作用
3.4 讨论
第四章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]Genome engineering using the CRISPR/Cas system[J]. Takuro Horii,Izuho Hatada. World Journal of Medical Genetics. 2014(03)
[2]N-糖基化对乙型脑炎病毒prME和NS1基因免疫效果影响的研究[J]. 张子重,汪雪,宰俊杰,孙乐强,宋云峰,陈焕春. 病毒学报. 2012(03)
硕士论文
[1]流行性乙型脑炎病毒prM蛋白furin蛋白酶剪切位点突变分析及稳定表达细胞系的构建[D]. 李业南.中国农业科学院 2013
本文编号：3023399
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3023399.html
