维氏气单胞菌TH0426株ndk与ilvI基因缺失株的构建及生物学特性分析
发布时间：2021-02-08 18:15
维氏气单胞菌（Aeromonas veronii,A.veronii）是一种能够感染人-兽-水生动物的革兰氏阴性病原菌。分布广泛,具有较强的致病性,给水产养殖业带来了巨大的经济损失。关于A.veronii的研究呈上升趋势,且致病性增强的报道也逐年增多。核苷二磷酸激酶（nucleoside diphosphate kinase,ndk）是由ndk基因编码的一种高保守性多功能蛋白,主要功能是通过磷酸基转移反应维持细胞内ATP和NTP浓度的平衡,参与UTP和GTP生物合成过程。研究表明ndk基因能够调节细胞增殖、发育和凋亡,还能够调节细菌的毒力。ilvI基因编码的蛋白为乙酰乳酸合酶（ALS）,它是植物、真菌和细菌细胞内支链氨基酸Val、Leu、Ile生物合成过程中关键酶,其活性的发挥需要TPP、FAD和二价金属离子。目前对该酶的研究主要集中于植物,尤其是除草剂类。除草剂类化合物通过阻断ALS酶的活性,从而阻断了支链氨基酸的合成,导致蛋白质的合成受到破坏,进而影响生物的生长甚至死亡。而A.veronii中关于ndk和ilvI的研究尚属空白。因此,研究ndk与ilvI基因对A.veronii毒力...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pRE112-N1N2重组自杀性质粒的构建
和氯霉素（Cm）的 LB 固体培养基上。温箱 37 ℃培养后挑取菌落培养，目的引物扩增得到 1925 bp 的条带（图 1.3A）。经接合转移发生一次同上的菌落培养，以 ndk-up-F/ndk-down-R 引物进行菌液 PCR 筛选，从中阳性克隆子（图 1.3B）。经发生二次同源重组后通过抗性板筛选，挑取单 DNA，再次进行 PCR 验证，所得结果与预期结果一致（图 1.3C），表因缺失成功。似缺失突变株进行 RNA 水平的验证，首先进行 RNA 的提取，然后将 cDNA，并以其为模板，ndk 基因使用 ndk-Pr1/ndk-Pr2 和 ndk-Pr3/ndk-P 16s 通用引物对阳性菌株进行 PCR 验证（图 1.4A、B、C），并以野生株 对照，所得条带大小证明基因缺失成功。
图 1.4：ndk 缺失株 RNA 水平的验证1-5:缺失株，6:野生株；B：ndk-Pr1/ndk-Pr2 引物验证，1C：ndk-Pr3/ndk-Pr4 引物验证，1-5:缺失株，6:野生株；Fig.1.4 Functional of ndk deletion in RNA level primer, 1-5:mutant, 6:wild strain; B: functional of ndk-Pr1/nd strain;C: functional of ndk-Pr3/ndk-Pr4 primer, 1-5:mutant, 6:株的构建段和启动子片段的扩增0426 基因组为模板，ndk 基因以 ndk-Po1/ndk-Po得大小约为 696 bp 的 No 片段（图 1.5A），纯化后，提取质粒 PCR 验证（图 1.5B），所得结果与
【参考文献】：
期刊论文
[1]2017年肠道门诊分离气单胞菌MLPA分型及临床特征分析[J]. 周妍妍,南征,耿子昕,李静,闫东辉,苏建荣. 中华医院感染学杂志. 2018(24)
[2]肠炎沙门菌luxS缺失株的构建及其生物学特性研究[J]. 于艳超,王莉莉,潘巧,辛九庆,王秀梅. 畜牧兽医学报. 2018(06)
[3]细菌鞭毛在生理活动中的作用[J]. 李交昆,南美花,吴学玲,余润兰,曾伟民. 生命科学. 2018(06)
[4]一例怀头鲶维氏气单胞菌肠炎病例报告[J]. 徐金铖,胡秀彩,吕爱军,孙敬锋,宋亚娇,刘小雪,王晓梅,石洪玥. 黑龙江畜牧兽医. 2018(04)
[5]鲍曼不动杆菌生物被膜对抗菌药物耐药性的影响[J]. 蔺飞,杜冰洁,高灿,凌保东. 中国感染控制杂志. 2018(01)
[6]鼠伤寒沙门菌SL1344株分泌性蛋白K1缺失株的构建及其生物学特性的初步研究[J]. 杨亚东,张春杰,程相朝,丁轲,李银聚,郁川,廖成水,陈松彪,王二鑫,张晓洁. 中国兽医科学. 2017(09)
[7]植物核苷二磷酸激酶研究进展[J]. 朱馨妮,汪珊珊,周佳琴,朱世华. 生物技术通报. 2017(11)
[8]岩原鲤致病性维氏气单胞菌的分离与鉴定[J]. 朱成科,刘桂嘉,张争世,蒲德成,朱龙,周朝伟,雷骆,郑宗林. 中国人兽共患病学报. 2017(06)
[9]利用玉米乙酰乳酸合成酶基因ALS点突变处理培育抗除草剂高粱[J]. 朱振兴,李丹,王春语. 分子植物育种. 2017(11)
[10]细菌生物被膜检测方法及评估[J]. 刘鑫,陈枫,黄璨,余玥,王晓燕,黄永茂,程锦楠. 中华医院感染学杂志. 2016(21)
博士论文
[1]核苷二磷酸激酶调节铜绿假单胞菌毒力及致病性的机制研究[D]. 余华.第三军医大学 2016
[2]乙酰羟酸合成酶亚基间相互作用的研究[D]. 赵跃芳.南开大学 2013
硕士论文
[1]靶向AHAS酶抑制剂的筛选及抗结核分支杆菌活性的研究[D]. 丁修冬.吉林大学 2017
[2]植物病原真菌乙酰乳酸合成酶（ALS）及其抑制剂的研究[D]. 叶朝燕.浙江大学 2014
[3]禾谷镰刀菌支链氨基酸合成基因FgILV5的生物学功能研究[D]. 王健.南京农业大学 2014
[4]四川地区斑点叉尾鮰源维氏气单胞菌的耐药性以及耐药基因检测分析[D]. 赵敏.四川农业大学 2013
[5]NDPK-A及其Cys突变体对A549细胞增殖、周期及凋亡的影响[D]. 高雪.暨南大学 2011
[6]核苷二磷酸激酶在响应菲胁迫中的功能分析[D]. 谭龙.福建农林大学 2011
本文编号：3024334
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pRE112-N1N2重组自杀性质粒的构建
和氯霉素（Cm）的 LB 固体培养基上。温箱 37 ℃培养后挑取菌落培养，目的引物扩增得到 1925 bp 的条带（图 1.3A）。经接合转移发生一次同上的菌落培养，以 ndk-up-F/ndk-down-R 引物进行菌液 PCR 筛选，从中阳性克隆子（图 1.3B）。经发生二次同源重组后通过抗性板筛选，挑取单 DNA，再次进行 PCR 验证，所得结果与预期结果一致（图 1.3C），表因缺失成功。似缺失突变株进行 RNA 水平的验证，首先进行 RNA 的提取，然后将 cDNA，并以其为模板，ndk 基因使用 ndk-Pr1/ndk-Pr2 和 ndk-Pr3/ndk-P 16s 通用引物对阳性菌株进行 PCR 验证（图 1.4A、B、C），并以野生株 对照，所得条带大小证明基因缺失成功。
图 1.4：ndk 缺失株 RNA 水平的验证1-5:缺失株，6:野生株；B：ndk-Pr1/ndk-Pr2 引物验证，1C：ndk-Pr3/ndk-Pr4 引物验证，1-5:缺失株，6:野生株；Fig.1.4 Functional of ndk deletion in RNA level primer, 1-5:mutant, 6:wild strain; B: functional of ndk-Pr1/nd strain;C: functional of ndk-Pr3/ndk-Pr4 primer, 1-5:mutant, 6:株的构建段和启动子片段的扩增0426 基因组为模板，ndk 基因以 ndk-Po1/ndk-Po得大小约为 696 bp 的 No 片段（图 1.5A），纯化后，提取质粒 PCR 验证（图 1.5B），所得结果与
【参考文献】：
期刊论文
[1]2017年肠道门诊分离气单胞菌MLPA分型及临床特征分析[J]. 周妍妍,南征,耿子昕,李静,闫东辉,苏建荣. 中华医院感染学杂志. 2018(24)
[2]肠炎沙门菌luxS缺失株的构建及其生物学特性研究[J]. 于艳超,王莉莉,潘巧,辛九庆,王秀梅. 畜牧兽医学报. 2018(06)
[3]细菌鞭毛在生理活动中的作用[J]. 李交昆,南美花,吴学玲,余润兰,曾伟民. 生命科学. 2018(06)
[4]一例怀头鲶维氏气单胞菌肠炎病例报告[J]. 徐金铖,胡秀彩,吕爱军,孙敬锋,宋亚娇,刘小雪,王晓梅,石洪玥. 黑龙江畜牧兽医. 2018(04)
[5]鲍曼不动杆菌生物被膜对抗菌药物耐药性的影响[J]. 蔺飞,杜冰洁,高灿,凌保东. 中国感染控制杂志. 2018(01)
[6]鼠伤寒沙门菌SL1344株分泌性蛋白K1缺失株的构建及其生物学特性的初步研究[J]. 杨亚东,张春杰,程相朝,丁轲,李银聚,郁川,廖成水,陈松彪,王二鑫,张晓洁. 中国兽医科学. 2017(09)
[7]植物核苷二磷酸激酶研究进展[J]. 朱馨妮,汪珊珊,周佳琴,朱世华. 生物技术通报. 2017(11)
[8]岩原鲤致病性维氏气单胞菌的分离与鉴定[J]. 朱成科,刘桂嘉,张争世,蒲德成,朱龙,周朝伟,雷骆,郑宗林. 中国人兽共患病学报. 2017(06)
[9]利用玉米乙酰乳酸合成酶基因ALS点突变处理培育抗除草剂高粱[J]. 朱振兴,李丹,王春语. 分子植物育种. 2017(11)
[10]细菌生物被膜检测方法及评估[J]. 刘鑫,陈枫,黄璨,余玥,王晓燕,黄永茂,程锦楠. 中华医院感染学杂志. 2016(21)
博士论文
[1]核苷二磷酸激酶调节铜绿假单胞菌毒力及致病性的机制研究[D]. 余华.第三军医大学 2016
[2]乙酰羟酸合成酶亚基间相互作用的研究[D]. 赵跃芳.南开大学 2013
硕士论文
[1]靶向AHAS酶抑制剂的筛选及抗结核分支杆菌活性的研究[D]. 丁修冬.吉林大学 2017
[2]植物病原真菌乙酰乳酸合成酶（ALS）及其抑制剂的研究[D]. 叶朝燕.浙江大学 2014
[3]禾谷镰刀菌支链氨基酸合成基因FgILV5的生物学功能研究[D]. 王健.南京农业大学 2014
[4]四川地区斑点叉尾鮰源维氏气单胞菌的耐药性以及耐药基因检测分析[D]. 赵敏.四川农业大学 2013
[5]NDPK-A及其Cys突变体对A549细胞增殖、周期及凋亡的影响[D]. 高雪.暨南大学 2011
[6]核苷二磷酸激酶在响应菲胁迫中的功能分析[D]. 谭龙.福建农林大学 2011
本文编号：3024334
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