检测鸭源沙门氏菌抗体间接ELISA方法的建立与应用

发布时间：2021-02-09 09:24

　　本文以鸭源沙门氏菌作为研究对象,成功建立了以鸭源沙门氏菌裂解抗原为包被抗原的间接ELISA方法,并应用于监测鸭源沙门氏菌蜂胶灭活苗免疫鸭血清抗体的消长变化,为疫苗质量的评估和制定合理的免疫程序提供技术支持。试验以鸭源沙门氏菌超声波裂解物为包被抗原,经ELISA各反应条件的优化,包括反应板均一性测定,羊抗鸭IgG-HRP工作浓度的筛选,抗原最适包被浓度和血清最佳稀释度的选择,抗原包被时间筛选,封闭时间的筛选,阴、阳性血清反应时间的筛选,酶标二抗的作用时间的筛选,底物显色时间的筛选,确定了间接ELISA操作程序：裂解抗原稀释20倍（19.51μg/ml）37℃包被2h；1%牛血清白蛋白封闭液37℃封闭1 h；待测血清（待测抗体）稀释200倍37℃与裂解抗原作用1h；酶标二抗稀释400倍,37℃作用1h；37℃避光显色15 mmin；避光加入终止液2 mol/L H2SO4,终止反应；酶联仪检测OD450值,判定结果阴阳性,成功建立了检测鸭源沙门氏菌抗体的间接ELISA方法；通过特异性试验、敏感性试验、重复性试验,结果表明对鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭疫里默氏杆菌、鸭大肠杆菌、葡萄球菌、腺病毒的... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 沙门氏菌简介
        1.1 生物学特性
        1.2 沙门氏菌的危害
    2 沙门氏菌检测方法的研究进展
        2.1 常规检测方法
        2.2 分子生物学方法
        2.3 免疫学方法
        2.4 核酸探针技术
        2.5 环介导等温扩增LAMP
        2.6 其他检测方法
    3 ELISA法鸭常见细菌、病毒抗体的检测
        3.1 常见致病性病毒抗体的ELISA检测方法
        3.2 常见致病性细菌抗体的ELISA检测方法
    4 本研究的目的与意义
第二章 间接ELISA检测鸭源沙门氏菌抗体方法的建立与应用
    1 试验材料
        1.1 试验菌株
        1.2 试验动物
        1.3 主要仪器
        1.4 主要试剂及配制
    2 试验方法
        2.1 沙门氏菌菌体裂解抗原制备
        2.2 阴性和阳性血清制备
        2.3 间接ELISA最佳工作条件筛选
        2.4 间接ELISA操作步骤
        2.5 特异性试验
        2.6 敏感性试验
        2.7 重复性试验
        2.8 建立的间接ELISA法监测沙门氏菌疫苗免疫鸭血清抗体的消长变化
    3 结果
        3.1 间接ELISA最佳工作条件的确定
        3.2 间接ELISA操作程序
        3.3 特异性试验
        3.4 敏感性试验
        3.5 重复性试验
        3.6 建立的间接ELISA法监测沙门氏菌疫苗免疫鸭血清抗体的消长变化
    4 讨论
结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]沙门菌耐药性现状分析[J]. 林梅,李晓华.  医学研究生学报. 2012(04)
[2]1型鸭疫里氏杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立[J]. 杨依霏,罗青平,张蓉蓉,艾地云,廖永洪,邵华斌,程国富.  动物医学进展. 2012(01)
[3]Ⅰ型鸭肝炎病毒间接ELISA方法的建立[J]. 孙凤萍,高骏,胡建华,王胜昌,高诚.  上海农业学报. 2011(04)
[4]酶联免疫吸附试验检测过程中的质量控制[J]. 范海丽,史恩祥,王伟,丁秀丽.  解放军医药杂志. 2011(05)
[5]LAMP技术快速检测沙门氏菌方法的建立及其应用[J]. 田桢干,阎俊,陆晔,王婷,章琪,张胜萍,王传贵.  中国国境卫生检疫杂志. 2011(05)
[6]50株鸭源致病性沙门氏菌的分离鉴定及药物敏感性检测[J]. 谭伟成,卢景.  上海畜牧兽医通讯. 2011(02)
[7]贵阳市猪肉中沙门氏杆菌的耐药性检测[J]. 王文侠,谭艾娟,吕世明,金志强,方英.  贵州农业科学. 2011(04)
[8]食品沙门氏菌检测方法的发展[J]. 李杜娟.  河南科技. 2011(05)
[9]RNA逆转录荧光定量PCR检测食源性沙门菌[J]. 张弛,褚庆华,杨捷琳,孟瑾,韩奕奕,包建强.  中国卫生检验杂志. 2011(02)
[10]荧光定量RT-PCR检测沙门氏菌方法的建立[J]. 杨柳,苏明权,马越云,焦刚,常亮,肖凤静,李明,彭年才,郝晓柯.  中国实验诊断学. 2011(01)

硕士论文
[1]沙门氏菌invH基因亚单位疫苗和C3d分子佐剂核酸疫苗的制备与免疫效果研究[D]. 王小龙.山东农业大学 2011
[2]LAMP技术检测肉及肉制品中沙门氏菌的研究[D]. 王羽.河北农业大学 2008
[3]食品中沙门氏菌分子检测靶点的筛选与评价[D]. 向雪菲.上海交通大学 2008
[4]猪沙门氏菌的临床分离鉴定及耐药性消除研究[D]. 贾爱卿.华中农业大学 2006
[5]耐氟喹诺酮类药物猪源致病性沙门氏菌gyrA基因PCR-RFLP及序列分析[D]. 谭炳乾.四川农业大学 2002



本文编号：3025423