鸭源鸡杆菌ompW、gtxA双基因缺失株的构建及其相关特性分析
发布时间：2021-02-09 12:52
鸭源鸡杆菌（Gallibacterium anatis,G.anatis）是家禽中常见的条件性致病菌,主要引起蛋鸡生殖道疾病,造成产蛋量下降。【目的】为探究RTX样毒素GtxA及外膜蛋白（OmpW）对鸭源鸡杆菌生物学特性和致病力的影响。【方法】本研究采用自然转化法对突变株RZ△ompW进一步缺失gtxA构建突变株RZ△ompW△gtxA,通过分析其生长特性、黏附能力、引起细胞凋亡程度及对小鼠致病性等,探究其与生物学特性及致病性可能的关系。【结果】结果显示,RZ△ompW△gtxA能稳定遗传gtxA的缺失;单双基因突变株溶血活性均消失、与RZ株相比菌落形态及生长速率并未出现显著改变;相比RZ、RZ△ompW和RZ△gtxA,双基因缺失株RZ△ompW△gtxA在不同时段对鸡原代输卵管上皮细胞的黏附能力显著降低（P<0.05）,诱导鸡输卵管上皮原代细胞发生凋亡的能力明显减弱,对小鼠的致病力显著降低。【结论】GtxA毒素和外膜蛋白OmpW在鸭源鸡杆菌毒力、黏附宿主细胞及诱导其细胞凋亡中起重要作用,且可能存在明显的协同关系。本研究为鸭源鸡杆菌感染机制的阐明奠定基础。
【文章来源】：微生物学报. 2020,60(10)北大核心
【文章页数】：12 页
【部分图文】：
质粒p MD18T-U-K-D PCR及酶切鉴定
anatis RZΔomp WΔgtx A突变株PCR鉴定
鸭源鸡杆菌RZ株和突变株RZΔomp W、RZΔgtx A、RZΔomp WΔgtx A经37°C培养24 h后，均长出半透明、灰白色、有完整边缘、直径1–2 mm的圆形菌落；3株缺失突变株菌落大小形态与原始亲本株RZ无显著变化，但RZΔgtx A、RZΔomp WΔgtx A溶血环均消失而RZΔomp W溶血环无明显变化，表明gtx A的缺失改变了鸭源鸡杆菌溶血活性，omp W和gtx A单独或者同时缺失菌落形态及大小没有显著影响。在相同培养条件下培养鸭源鸡杆菌RZ、RZΔomp W、RZΔgtx A和RZΔomp WΔgtx A，每隔1 h测定菌液OD600值并绘制细菌生长曲线(图4)。结果显示，4株菌生长速率和生长状态相仿，虽生长曲线显示RZΔomp WΔgtx A与其他3株相比生长速度稍缓慢，但无统计学差异(P值均大于0.05，差异不显著)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸭源鸡杆菌gtxA突变株构建及其生物特性分析[J]. 王继洋,彭志锋,刘盼盼,王坤芃,王川庆,陈陆,赵军,杨霞. 中国兽医学报. 2019(03)
[2]鸭源鸡杆菌相关致病因子研究进展[J]. 王继洋,王艳,彭志锋,杨霞. 中国兽医学报. 2017(08)
[3]鸭源鸡杆菌ompW基因缺失菌株的构建及其药物敏感性分析[J]. 彭志锋,崔丹丹,杨霞,敬文宪,王忠田,王坤芃,王川庆. 畜牧兽医学报. 2017(07)
[4]鸭源鸡杆菌外膜蛋白W基因克隆及结构与功能分析[J]. 敬文宪,彭志锋,王新卫,常洪涛,刘红英,王川庆,卢彩景,杨霞. 中国兽医学报. 2017(01)
[5]鸭源鸡杆菌对鸡原代输卵管上皮细胞作用[J]. 张秀平,卢彩景,陈陆,李永涛,刘红英,彭志锋,敬文宪,杨霞,王川庆. 中国兽医学报. 2016(02)
[6]我国鸭源鸡杆菌的研究进展[J]. 彭志锋,杨霞,郑鹿平,王川庆. 中国兽医学报. 2015(12)
[7]鸡原代输卵管上皮细胞体外分离培养与鉴定[J]. 张秀平,陈陆,刘红英,王川庆,姚惠霞,杨霞. 中国兽医学报. 2015(06)
[8]鸭源鸡杆菌对HeLa细胞的黏附和侵袭特性[J]. 张秀平,陈陆,赵军,王川庆,李永涛,刘红英,彭志锋,卢彩景,敬文宪,杨霞. 畜牧兽医学报. 2015(02)
[9]鸭源鸡杆菌毒素蛋白GtxA表达和间接ELISA方法的建立及初步应用[J]. 李欢,杨霞,赵军,魏亚鹏,陈陆,王新卫,常洪涛,李永涛,刘红英,王川庆. 中国兽医学报. 2015(01)
[10]胸膜肺炎放线杆菌RTX毒素与宿主的相互作用[J]. 范盛先,刘辉,陈杨,陈焕春,何启盖. 微生物学报. 2009(02)
硕士论文
[1]鸭源鸡杆菌中国株gtxA单基因、gtxA/flfA双基因缺失株的构建及相关特性分析[D]. 王继洋.河南农业大学 2018
[2]鸭源鸡杆菌中国株外膜蛋白W基因鉴定及其敲除株的构建[D]. 敬文宪.河南农业大学 2016
[3]鸭源鸡杆菌的生物被膜形成能力及对鸡原代输卵管上皮细胞作用的初步研究[D]. 张秀平.河南农业大学 2015
[4]鸭源鸡杆菌流行株毒素蛋白GtxA表达及其部分生物学特性的研究[D]. 李欢.河南农业大学 2014
[5]铁离子调节革兰氏阴性菌外膜蛋白OmpW抗宿主氧化应激作用及机制的研究[D]. 邹海杰.浙江理工大学 2012
本文编号：3025659
【文章来源】：微生物学报. 2020,60(10)北大核心
【文章页数】：12 页
【部分图文】：
质粒p MD18T-U-K-D PCR及酶切鉴定
anatis RZΔomp WΔgtx A突变株PCR鉴定
鸭源鸡杆菌RZ株和突变株RZΔomp W、RZΔgtx A、RZΔomp WΔgtx A经37°C培养24 h后，均长出半透明、灰白色、有完整边缘、直径1–2 mm的圆形菌落；3株缺失突变株菌落大小形态与原始亲本株RZ无显著变化，但RZΔgtx A、RZΔomp WΔgtx A溶血环均消失而RZΔomp W溶血环无明显变化，表明gtx A的缺失改变了鸭源鸡杆菌溶血活性，omp W和gtx A单独或者同时缺失菌落形态及大小没有显著影响。在相同培养条件下培养鸭源鸡杆菌RZ、RZΔomp W、RZΔgtx A和RZΔomp WΔgtx A，每隔1 h测定菌液OD600值并绘制细菌生长曲线(图4)。结果显示，4株菌生长速率和生长状态相仿，虽生长曲线显示RZΔomp WΔgtx A与其他3株相比生长速度稍缓慢，但无统计学差异(P值均大于0.05，差异不显著)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸭源鸡杆菌gtxA突变株构建及其生物特性分析[J]. 王继洋,彭志锋,刘盼盼,王坤芃,王川庆,陈陆,赵军,杨霞. 中国兽医学报. 2019(03)
[2]鸭源鸡杆菌相关致病因子研究进展[J]. 王继洋,王艳,彭志锋,杨霞. 中国兽医学报. 2017(08)
[3]鸭源鸡杆菌ompW基因缺失菌株的构建及其药物敏感性分析[J]. 彭志锋,崔丹丹,杨霞,敬文宪,王忠田,王坤芃,王川庆. 畜牧兽医学报. 2017(07)
[4]鸭源鸡杆菌外膜蛋白W基因克隆及结构与功能分析[J]. 敬文宪,彭志锋,王新卫,常洪涛,刘红英,王川庆,卢彩景,杨霞. 中国兽医学报. 2017(01)
[5]鸭源鸡杆菌对鸡原代输卵管上皮细胞作用[J]. 张秀平,卢彩景,陈陆,李永涛,刘红英,彭志锋,敬文宪,杨霞,王川庆. 中国兽医学报. 2016(02)
[6]我国鸭源鸡杆菌的研究进展[J]. 彭志锋,杨霞,郑鹿平,王川庆. 中国兽医学报. 2015(12)
[7]鸡原代输卵管上皮细胞体外分离培养与鉴定[J]. 张秀平,陈陆,刘红英,王川庆,姚惠霞,杨霞. 中国兽医学报. 2015(06)
[8]鸭源鸡杆菌对HeLa细胞的黏附和侵袭特性[J]. 张秀平,陈陆,赵军,王川庆,李永涛,刘红英,彭志锋,卢彩景,敬文宪,杨霞. 畜牧兽医学报. 2015(02)
[9]鸭源鸡杆菌毒素蛋白GtxA表达和间接ELISA方法的建立及初步应用[J]. 李欢,杨霞,赵军,魏亚鹏,陈陆,王新卫,常洪涛,李永涛,刘红英,王川庆. 中国兽医学报. 2015(01)
[10]胸膜肺炎放线杆菌RTX毒素与宿主的相互作用[J]. 范盛先,刘辉,陈杨,陈焕春,何启盖. 微生物学报. 2009(02)
硕士论文
[1]鸭源鸡杆菌中国株gtxA单基因、gtxA/flfA双基因缺失株的构建及相关特性分析[D]. 王继洋.河南农业大学 2018
[2]鸭源鸡杆菌中国株外膜蛋白W基因鉴定及其敲除株的构建[D]. 敬文宪.河南农业大学 2016
[3]鸭源鸡杆菌的生物被膜形成能力及对鸡原代输卵管上皮细胞作用的初步研究[D]. 张秀平.河南农业大学 2015
[4]鸭源鸡杆菌流行株毒素蛋白GtxA表达及其部分生物学特性的研究[D]. 李欢.河南农业大学 2014
[5]铁离子调节革兰氏阴性菌外膜蛋白OmpW抗宿主氧化应激作用及机制的研究[D]. 邹海杰.浙江理工大学 2012
本文编号：3025659
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3025659.html
