柔嫩艾美耳球虫在鸡巨噬细胞中的培养及子孢子感染巨噬细胞细胞因子的表达水平

发布时间：2021-02-09 22:47

　　鸡球虫病由一种或多种艾美耳球虫引起的危害养鸡业最严重的肠道寄生虫病,可导致体重显著下降、营养不良、失血、脱水和对其他疾病的易感性增加,每年造成世界范围内的经济损失高达30亿美元。先天性免疫系统是抵抗微生物入侵的第一道防线,其中巨噬细胞在先天性免疫和适应性免疫中都发挥重要作用。巨噬细胞可被多种细胞因子和病原相关分子模式如脂多糖、CpG DNA信号激活,从而启动先天免疫反应。本研究将鸡巨噬细胞（HD11）作为柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）子孢子的宿主细胞,研究体外E.tenella子孢子在鸡巨噬细胞（HD11）中的发育情况以及巨噬细胞（HD11）产生的抗感染免疫。具体内容如下:1.柔嫩艾美耳球虫子孢子的HD11细胞体外培养。将E.tenella子孢子接种HD11巨噬细胞,制备细胞爬片,用吉姆萨染色显微镜观察,结果发现E.tenella子孢子成功入侵HD11细胞,但并没有发育迹象,体外培养至50 h时巨噬细胞裂解,子孢子游离在培养基中并且活力良好。2.分别设置实验组,活子孢子感染HD11细胞组;空白对照组,将子孢子悬液换成相等体积的培养基;阳性对照组,将子孢子悬液换成试剂盒中阳性对照试... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Summary
缩略词英汉对照表
第一章 绪论
    1 前言
        1.1 鸡球虫病及防治现状
            1.1.1 鸡球虫病病原
            1.1.2 鸡球虫生活史
            1.1.3 鸡球虫病防治现状及最新探索
        1.2 鸡球虫对宿主细胞的入侵
        1.3 鸡球虫细胞培养的研究现状及进展
        1.4 鸡免疫系统
            1.4.1 B淋巴细胞
            1.4.2 T淋巴细胞
            1.4.3 巨噬细胞
                1.4.3.1 鸡巨噬细胞来源
                1.4.3.2 巨噬细胞与寄生虫的相互作用
            1.4.4 NK细胞
        1.5 抗艾美耳球虫的先天性免疫反应和获得性免疫反应
            1.5.1 抗体反应
            1.5.2 细胞免疫
            1.5.3 细胞因子及 NO 在抗球虫感染中的作用
        1.6 本研究的目的和意义
第二章 柔嫩艾美耳球虫子孢子在HD11细胞中的体外培养
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 鸡巨噬细胞和虫株
            1.1.2 实验动物
            1.1.3 主要试剂
            1.1.4 主要仪器设备
        1.2 方法
            1.2.1 鸡球虫的复壮与传代
            1.2.2 球虫卵囊的收集与孢子化
            1.2.3 无菌子孢子的提取
            1.2.4 HD11细胞的复苏与培养
            1.2.5 柔嫩艾美耳球虫在HD11细胞中的体外培养
    2 结果
        2.1 柔嫩艾美耳球虫在HD11细胞中体外培养的研究
            2.1.1 孢子化卵囊和子孢子的收集与纯化
            2.1.2 柔嫩艾美耳球虫在HD11细胞中的培养
            2.1.3 柔嫩艾美耳球虫在CEK细胞中的培养
            2.1.4 接种时间的确定
            2.1.5 接种剂量的确定
    3 讨论
第三章 柔嫩艾美耳球虫感染HD11细胞免疫反应的检测
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 鸡巨噬细胞和虫株
            1.1.2 实验动物
            1.1.3 主要试剂
            1.1.4 主要仪器设备
        1.2 实验方法
            1.2.1 鸡球虫的复壮与传代
            1.2.2 球虫卵囊的收集与孢子化
            1.2.3 无菌子孢子的提取
            1.2.4 HD11细胞的复苏与培养
            1.2.5 柔嫩艾美耳球虫感染HD11 细胞细胞内NO和 ROS的检测
            1.2.6 细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p40、IFN-γ、TNF-α、iNOS和IRF7表达水平检测
    2 结果
        2.1 柔嫩艾美耳球虫子孢子感染HD11 细胞后细胞内NO和 ROS的检测
        2.2 柔嫩艾美耳球虫感染相关的8种宿主细胞因子表达水平检测
    3 讨论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]柔嫩艾美耳球虫在鸡胚盲肠上皮细胞中体外培养营养条件的研究[J]. 古少鹏,侯金环,陈赵英,李宝钧,郑明学.  畜牧兽医学报. 2010(12)
[2]鸡球虫苗（LCV-2号）安全性和免疫效果研究[J]. 闫鸿斌,田广孚,贾万忠,林青,李辉,侯俊玲,郑亚东,程晓红,宋玉霞,才学鹏.  中国预防兽医学报. 2007(05)
[3]NO在雏鸡球虫感染过程中的作用[J]. 申兆菊,朱蓓蕾,蒋金书.  畜牧兽医学报. 2002(04)
[4]鸡球虫耐药性的研究进展[J]. 马立农,陈杖榴.  中国兽药杂志. 1999(04)
[5]柔嫩艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫在鸡胚培养和鸡肾细胞中的发育[J]. 蒋金书,胡景辉.  中国农业大学学报. 1998(S2)
[6]不同培养基成分在球虫细胞培养中的作用[J]. 谢宏料,谢明权,吴惠贤,彭新宇,温列娜,张健騑.  动物学报. 1996(03)
[7]脆弱艾美耳球虫（Eimeria tenella）细胞培养的观察[J]. 韩志华,李少泉,张惠英,史天卫.  畜牧与兽医. 1985(02)

博士论文
[1]柔嫩艾美耳球虫DF-1细胞培养体系的建立及EtSerpin，EtAMA1基因功能的初步研究[D]. 姜连连.中国农业科学院 2011



本文编号：3026355