A塞内卡病毒的分离鉴定及其VP3单抗的制备
发布时间：2021-02-10 07:36
A型塞内卡病毒（SenecavirusA,SVA）是小核糖核酸病毒科,Senecavirus属的唯一成员。SVA感染引起新生仔猪跛行、嗜睡、厌食、急性死亡及特征性水疱病症状。目前已有加拿大、哥伦比亚、美国、巴西、中国、越南、泰国等多个国家报道了 SVA疫情。2015年以来,我国广东、湖北、福建、湖北等14个省份相继暴发SVA疫情。研究表明目前国内流行的SVA毒株正在发生变异,部分毒株已发生重组。最新研究发现SVA似乎获得了比以前更强的致病性和传播能力。然而,中国SVA毒株的流行病学信息还有待补充,特别是SVA致病性毒株的信息仍然非常缺乏。因此,本研究分离鉴定了两株中国的SVA毒株,从亲缘关系、基因组水平以及致病性上分析毒株的差异。制备了能够特异性识别VP3蛋白的单克隆抗体,并鉴定其抗原表位,为SVA新型诊断试剂的研制和该病毒的有关研究工作提供了有力的免疫学工具。具体内容如下:1 A型塞内卡病毒的分离鉴定、基因组测序及遗传进化分析本研究对2017～2018年来自广东若干生猪养殖场的疑似病料进行病毒分离与全基因组测序,并将分离的2株SVA毒株命名为GD04/2017和GD-S5/2018（...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?ＳＶＡ病毒粒子结构示图与基因组结构图ｍ??
?第一章Ａ型塞内卡病毒的分离鉴定及遗传进化分析???离心ｌｍｉｎ，检测并记录质粒的浓度。??１．１５．７?ＰＣＲ鉴定重组质粒??以提取的重组质粒为模板进行ＰＣＲ鉴定，具体反应体系及程序参考１．７，引物参??考表１－７；通过１％琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ结果。经ＰＣＲ鉴定正确的质粒送到南京??擎科生物科技有限公司进行测序。??１．１５．７序列比对与基因组分析??将ＳＶＡ毒株的ＯＲＦ与ＶＰ１基因分别与ＧｅｎＢａｎｋ的其他典型ＳＶＡ毒株比对，利??用＼＾０八７．０版通过最大似然法建立系统发育树。将００－５５／２０１８、０００４／２０丨７、美国??致病毒株ＳＶＡ?ＳＤ１５－２６和原型毒株ＳＶＶ－００１毒株进行ＯＲＦ基因组和多肽序列的分析??比较，标注各毒株之间具有差异的氨基酸，最后统计数据。??２结果??２．１样品的病原检测??２０１７－２０１８年，从广东某些猪场采集若干份水疱病料，通过对病料进行研磨处理、??提取ＲＮＡ及反转录后，设计两对ＳＶＡ基因特异性引物进行病原检测，ＲＴ－ＰＣＲ结果显??示，其中两份采集的病料ＳＶＡ阳性，扩增片段Ｐ、Ｑ的大小与预期相符。??Ｍ?１?２?３?４??誦国??＂ｍｌ??５００?Ｃ??２５０??图１－１样品的ＰＣＲ鉴定结果??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｓａｍｐｌｅ?ＰＣＲ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ??Ｍａｒｋｅｒ：５０００ｂｐ?ＤＮＡ?ｌａｄｄｅｒ?ｍａｒｋｅｒ??１：病料①Ｐ片段５８３ｂｐ?２：病料①Ｑ片段１６５３ｂｐ??３：病料②Ｐ片段５８３ｂｐ?４：病料②Ｑ片段１６５３ｂｐ??２３??
?第一章Ａ型塞内卡病毒的分离鉴定及遗传进化分析???１２－｜??Ｈ?／??３－?ｙ?＾?ＧＤ０４／２０１７??２＇?▲?￣ｍｒ?ＧＤ－Ｓ５／２０１８??１－??０?＾?Ｉ?Ｉ?ｉ?Ｉ?Ｉ?■＂?ｉ??６?１２?２４?３６?４８?６０??Ｈｏｕｒｓ?ｐｏｓｔ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??图１－２分病毒生长动力学曲线??Ｆｉｇ．?１－２?Ｖｉｒｕｓ?ｇｒｏｗｔｈ?ｋｉｎｅｔｉｃ?ｃｕｒｖｅ??２．７病毒空斑??病毒空斑实验结果显示，两个毒株具有相似的空斑形状。??ＧＤ－Ｓ５／２０１８?ＧＤ０４／２０１７?ＳＴ－Ｒ??图１－３病毒空斑实验??Ｆｉｇ．?１－３?Ｖｉｒｕｓ?ｐｌａｑｕｅ?ｔｅｓｔ??２．８间接免疫荧光??２５??
【参考文献】：
期刊论文
[1]The Distribution of Different Clades of Seneca Valley Viruses in Guangdong Province,China[J]. Pan Chen,Fan Yang,Weijun Cao,Huanan Liu,Keshan Zhang,Xiangtao Liu,Zhiwen Xu,Zixiang Zhu,Haixue Zheng. Virologica Sinica. 2018(05)
[2]塞尼卡谷病毒重组酶聚合酶扩增技术（RPA）实时荧光检测方法的建立[J]. 樊晓旭,哈登楚日亚,王英丽,王姣,刘春菊,迟田英,赵永刚,张志诚,吴晓东,王志亮. 中国动物检疫. 2017(08)
[3]B细胞抗原表位的研究进展及其应用[J]. 郭春艳,赵向绒,胡军. 生物技术通讯. 2013(02)
[4]对表位生物学研究的认识和体会[J]. 朱锡华,吴玉章. 上海免疫学杂志. 1998(01)
硕士论文
[1]J亚群禽白血病病毒抗原/抗体检测体系的建立[D]. 王言明.山东农业大学 2014
本文编号：3027022
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?ＳＶＡ病毒粒子结构示图与基因组结构图ｍ??
?第一章Ａ型塞内卡病毒的分离鉴定及遗传进化分析???离心ｌｍｉｎ，检测并记录质粒的浓度。??１．１５．７?ＰＣＲ鉴定重组质粒??以提取的重组质粒为模板进行ＰＣＲ鉴定，具体反应体系及程序参考１．７，引物参??考表１－７；通过１％琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ结果。经ＰＣＲ鉴定正确的质粒送到南京??擎科生物科技有限公司进行测序。??１．１５．７序列比对与基因组分析??将ＳＶＡ毒株的ＯＲＦ与ＶＰ１基因分别与ＧｅｎＢａｎｋ的其他典型ＳＶＡ毒株比对，利??用＼＾０八７．０版通过最大似然法建立系统发育树。将００－５５／２０１８、０００４／２０丨７、美国??致病毒株ＳＶＡ?ＳＤ１５－２６和原型毒株ＳＶＶ－００１毒株进行ＯＲＦ基因组和多肽序列的分析??比较，标注各毒株之间具有差异的氨基酸，最后统计数据。??２结果??２．１样品的病原检测??２０１７－２０１８年，从广东某些猪场采集若干份水疱病料，通过对病料进行研磨处理、??提取ＲＮＡ及反转录后，设计两对ＳＶＡ基因特异性引物进行病原检测，ＲＴ－ＰＣＲ结果显??示，其中两份采集的病料ＳＶＡ阳性，扩增片段Ｐ、Ｑ的大小与预期相符。??Ｍ?１?２?３?４??誦国??＂ｍｌ??５００?Ｃ??２５０??图１－１样品的ＰＣＲ鉴定结果??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｓａｍｐｌｅ?ＰＣＲ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ??Ｍａｒｋｅｒ：５０００ｂｐ?ＤＮＡ?ｌａｄｄｅｒ?ｍａｒｋｅｒ??１：病料①Ｐ片段５８３ｂｐ?２：病料①Ｑ片段１６５３ｂｐ??３：病料②Ｐ片段５８３ｂｐ?４：病料②Ｑ片段１６５３ｂｐ??２３??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]The Distribution of Different Clades of Seneca Valley Viruses in Guangdong Province,China[J]. Pan Chen,Fan Yang,Weijun Cao,Huanan Liu,Keshan Zhang,Xiangtao Liu,Zhiwen Xu,Zixiang Zhu,Haixue Zheng. Virologica Sinica. 2018(05)
[2]塞尼卡谷病毒重组酶聚合酶扩增技术（RPA）实时荧光检测方法的建立[J]. 樊晓旭,哈登楚日亚,王英丽,王姣,刘春菊,迟田英,赵永刚,张志诚,吴晓东,王志亮. 中国动物检疫. 2017(08)
[3]B细胞抗原表位的研究进展及其应用[J]. 郭春艳,赵向绒,胡军. 生物技术通讯. 2013(02)
[4]对表位生物学研究的认识和体会[J]. 朱锡华,吴玉章. 上海免疫学杂志. 1998(01)
硕士论文
[1]J亚群禽白血病病毒抗原/抗体检测体系的建立[D]. 王言明.山东农业大学 2014
本文编号：3027022
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