牛肿瘤坏死因子α单克隆抗体的制备及初步应用

发布时间：2021-02-11 13:17

　　肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）是由Carswell等人发现的一种能够杀伤肿瘤细胞的炎性细胞因子。其由自然杀伤细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等产生,具有促进细胞增殖和分化、杀伤或抑制肿瘤细胞、调节机体免疫等多种生物功能,不仅能帮助机体抵抗如大肠杆菌、结核分枝杆菌等病原微生物的感染,还能与其它细胞因子一起参与机体自身免疫性疾病的发生和发展。TNF-α作为一种评价牛结核病、牛乳房炎等牛疾病的重要指标,具有重要的应用价值和临床意义。本研究旨在制备出基于流式细胞术检测牛胞内TNF-α的单克隆抗体,为诊断相关牛疾病提供原材料。1.牛TNF-α基因的克隆及原核表达分离荷斯坦奶牛外周血单个核细胞（PBMC）,加入佛波酯（PMA）刺激6h后提取细胞总RNA并反转录成cDNA,以cDNA为模板扩增目的基因BoTNF-α,将扩增成功的目的基因连入原核表达载体pET-30a（+）和pGEX-6p-1中构建重组表达质粒。经过PCR、酶切、测序验证正确后,将两种载体分别导入宿主表达菌BL21（DE3）及BL21中,构建重组表达菌 BL21（DE3）（pET-30a（+）-B... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
符号说明
综述 肿瘤坏死因子α的研究进展
    1 TNF-α生物学特性与功能的研究
        1.1 TNF-α的来源与结构
        1.2 TNF-α的配体和受体
        1.3 TNF-α介导的信号通路
        1.4 TNF-α抗感染的作用
    2 TNF-α在疾病中的作用
        2.1 TNF-α在癌症中的作用
        2.2 TNF-α在结核病中的作用
        2.3 TNF-α在脑缺血、心血管疾病等中的作用
    3 TNF-α单克隆抗体的研究进展及应用
    参考文献
第一章 牛TNF-α基因的克隆及原核表达
    1 材料与试剂
        1.1 质粒及菌种
        1.2 试剂
        1.3 仪器设备
    2 方法
        2.1 BoTNF-α基因的克隆
        2.2 表达载体的构建
        2.3 原核表达菌的构建与鉴定
        2.4 重组菌的诱导表达及重组蛋白的纯化
        2.5 重组菌诱导表达产物的SDS-PAGE鉴定及Western blot分析
    3 结果
        3.1 原核表达质粒的鉴定
        3.2 重组菌诱导表达及纯化产物的SDS-PAGE分析
        3.3 重组菌诱导表达产物的免疫学特性鉴定
        3.4 重组蛋白rHis-BoTNF-α及rGST-BoTNF-α蛋白浓度的测定
    4 讨论
    参考文献
第二章 牛TNF-α单克隆抗体的制备及初步应用
    1 材料与试剂
        1.1 细胞
        1.2 试剂
        1.3 主要仪器设备
        1.4 实验动物
    2 方法
        2.1 小鼠免疫
        2.2 细胞融合
        2.3 阳性杂交瘤细胞的筛选
        2.4 阳性细胞的亚克隆
        2.5 阳性杂交瘤细胞的冻存及复苏
        2.6 腹水的制备
        2.7 单克隆抗体的鉴定
        2.8 流式细胞术检测方法的初步建立
        2.9 单克隆抗体的初步应用
    3 结果
        3.1 牛TNF-α单克隆抗体的鉴定
        3.2 流式检测方法的初步建立
        3.3 单克隆抗体的初步应用
    4 讨论
    参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]流式细胞术在兽医临床上的应用研究[J]. 余娟,徐彦召,刘兴友.  现代农业科技. 2018(21)
[2]胃癌患者血清中肿瘤坏死因子-α和白介素-6水平检测及其临床诊断价值[J]. 姜春霞,陈阔.  肿瘤基础与临床. 2017(01)
[3]隐性乳房炎病牛乳清中IL-8及TNF-α含量的变化[J]. 尹柏双,王秋竹,付连军,郝景锋,沙万里,王奔,郑洪娟,苗玉辉.  江苏农业科学. 2017(02)
[4]负性共刺激分子免疫球蛋白BTLA的特点及其在肺结核病灶组织中的表达[J]. 程晓菊,周国旗.  贵州医药. 2016(08)
[5]芍药苷对TNF-α诱导的内皮细胞TNFR1/NF-κB信号通路的抑制作用[J]. 马淑慧,王海芳,刘金连,霍雪萍,赵向绒,曹情雯,刘勤社.  中国中西医结合杂志. 2016(03)
[6]牛肠道病毒2型单克隆抗体的制备及其应用研究[J]. 郭金玉,张鹤晓,吴丹,高志强,张冉,张乐萃.  畜牧兽医学报. 2015(11)
[7]TNF-α在抗感染中的作用[J]. 华锋,刘金辉.  南昌大学学报(医学版). 2012(05)
[8]TNF-α在癌症中的作用研究进展[J]. 向春艳,何小燕,李逐波,刘衍季,赖翔宇.  生命科学. 2012(03)
[9]肝癌组织中MIF、TNF-α的表达及临床意义[J]. 陶斌胜,熊茂明,曹立宇.  临床与实验病理学杂志. 2011(11)
[10]重组牛白细胞介素4的原核表达及其单克隆抗体研制[J]. 陈祥,张成全,徐正中,孟闯,黄金林,潘志明,焦新安.  细胞与分子免疫学杂志. 2011(06)

硕士论文
[1]以TNF-α为靶点治疗炎症性肠病的研究进展[D]. 方杰.蚌埠医学院 2014
[2]内脏脂肪素诱导人脐静脉内皮细胞损伤的作用机制及定心方的干预[D]. 崔小冰.南方医科大学 2014



本文编号：3029170