多重TaqMan荧光定量PCR检测仔猪先天性震颤相关病毒方法的建立与应用

发布时间：2021-02-12 07:47

　　旨在研究能够快速、准确、灵敏地鉴别、诊断引起仔猪先天性震颤的猪非典型瘟病毒（Atypical porcine pestivirus, APPV）、猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）、猪圆环病毒3型（Porcine circoviruses type 3, PCV-3）及猪捷申病毒1型（Porcine teschovirus 1,PTV-1）的方法。通过对GenBank中登录的APPV的NS3基因序列、CSFV的E2基因序列、PCV-3的ORF2基因序列和PTV-1的VP1基因序列进行分析,设计针对4种病毒的特异性引物和TaqMan水解探针。通过对反应条件和反应程序进行优化,拟建立针对仔猪先天性震颤相关病毒的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,研究得到的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法能够特异性检测APPV、CSFV、PCV-3和PTV-1,而与其他病原无交叉反应;该研究方法对APPV、CSFV、PCV-3和PTV-1的最低检测量分别为1μl 9.2×10²拷贝、48拷贝、56拷贝和17拷贝。重复性试验结... 

【文章来源】：江苏农业学报. 2020,36(04)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒与病料
    1.2 主要试剂
    1.3 引物的设计及合成
    1.4 重组质粒标准品的制备
    1.5 多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
        1.5.1 反应条件的优化
        1.5.2 标准曲线的制作
        1.5.3 特异性试验
        1.5.4 灵敏性试验
        1.5.5 重复性试验
    1.6 临床样品检测
2 结果与分析
    2.1 多重TaqMan荧光定量PCR方法的建立
    2.2 标准曲线的绘制
    2.3 特异性
    2.4 灵敏性
    2.5 重复性
    2.6 临床样品检测
3 讨 论
4 结 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪瘟引起仔猪先天性震颤的诊断与防制[J]. 罗建,杨小燕,李晓华,戴爱玲.  福建畜牧兽医. 2005(05)
[2]猪瘟造成的仔猪先天性震颤[J]. 陆文俊,王世昌.  养猪. 1998(01)
[3]仔猪先天性肌阵挛病[J]. 赵文远,徐福南,罗清生.  中国畜牧兽医. 1962(08)



本文编号：3030507