猪ACRBP基因真核表达载体的构建及生殖系统表达验证

发布时间：2021-02-12 14:02

　　本实验旨在获得带有增强型绿色荧光蛋白及表达猪ACRBP基因的pIRES2-EGFP-ACRBP真核表达载体和CHO细胞株,并且检测猪睾丸、附睾、前列腺、尿道球腺、精子、精清、性成熟母猪卵巢和输卵管中ACRBP蛋白的表达情况。本实验通过基因克隆的方法获得猪源ACRBP基因,并构建了pIRES2-EGFPACRBP真核表达载体,经过双酶切、测序鉴定后,转染CHO细胞,通过绿色荧光观察、RT-PCR和Westernblot检验ACRBP表达载体在CHO癌细胞株中的表达情况。结果显示:ACRBP蛋白在睾丸、附睾、前列腺、尿道球腺、卵巢、输卵管、精子中有条带,而在猪的精清中没有条带,转入CHO细胞后可观察到带荧光的阳性质粒,通过RT-PCR和Western-blot检测到ACRBP在CHO中得到了表达。 

【文章来源】：中国畜牧杂志. 2020,56(09)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

pIRES2-EGFP-ACRBP重组质粒酶切回收PCR产物（A）电泳图和pIRES2-EGFP-ACRBP重组质粒PCR产物（B）电泳图

RT-PCR结果图

以没有经过转染重组表达载体的CHO细胞为对照组，检测到转染过重组质粒pIRES2-EGFP-ACRBP的CHO细胞中在32 ku处有条带，其大小与预期相符合，在未经过转染的阴性对照CHO癌细胞在32 ku大小处无条带，说明ACRBP基因在蛋白水平上表达（图8）。图8 Western blot检测重组表达载体在CHO中的表达结果

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3030971