鸭疫里默氏杆菌毒力相关基因突变株的构建及其生物学特性研究
发布时间：2021-02-16 20:45
鸭疫里默氏杆菌病是由鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer, RA）引起的,广泛分布于世界各个养鸭国家的,目前最重要的传染病之一。RA菌株的血清型众多,目前为止,共报道有21个血清型,各血清型之间无交叉保护。本实验室前期进行的血清学研究结果表明流行菌株的优势血清型是血清1、2和10型。然而,我们对于鸭疫里默氏杆菌的分子致病机制还知之甚少。本研究检测了鸭疫里默氏杆菌（RA）10个基因在不同菌株间的分布并进行序列分析,研究其在不同菌株中的保守性。研究发现了3个鸭疫里默氏杆菌的具有高度保守性的基因：lipid A、 luxE和tctR;6个可能的血清型相关基因：TR、luxE、IS1、tctR、luxrl和TA；以及5个可能的毒力相关基因：cwaH、lipid A、luxE、IS1和tctR。同时,发现luxE基因既可能与细菌的致病性相关,又可能与细菌的血清型相关。因此,我们进一步研究了该基因对RA的生物学特性影响。本文采用同源重组的方法来构建鸭疫里默氏杆菌Yb2株的luxE基因缺失株Yb2△luxE和luxE基因回复株cYb2△luxE。具体方法为：通过PCR扩增...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
图标清单
英文缩略表
第一章 引言
1.1 概述
1.1.1 病原学
1.1.2 血清型
1.2 全基因组序列的发表
1.3 毒力因子
1.4 Acyl-protein synthetases和Acyl transferase的研究进展
1.4.1 Lux操纵子的概述
1.4.2 发光细菌中luxE基因的研究进展
1.4.3 脂多糖酰基化与免疫应答的关系
1.5 展望
第二章 鸭疫里默氏杆菌10个基因在菌株中的分布及序列分析
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 基因选择、引物设计与合成
2.2 试验方法
2.2.1 测定10个基因在RA菌株中的分布情况
2.2.2 PCR产物的纯化与克隆
2.2.3 序列分析和系统进化树的建立
2.3 结果
2.3.1 10个基因在RA菌株中的分布情况
2.3.2 PCR产物的克隆和鉴定
2.3.3 序列测定与分析
2.3.4 系统进化树的绘制
2.4 讨论
第三章 鸭疫里默氏杆菌LUXE基因缺失株的构建及生物学特性分析
3.1 材料
3.1.1 菌株和培养条件
3.1.2 主要酶、载体及试剂
3.1.3 主要培养基及缓冲液的配制
3.1.4 抗生素及使用浓度
3.1.5 主要仪器设备
3.1.6 PCR引物
3.2 试验方法
3.2.1 提取鸭疫里默氏杆菌Yb2株基因组
3.2.2 鸭疫里默氏杆菌Yb2株luxE基因的克隆及测序
3.2.3 鸭疫里默氏杆菌Yb2 luxE基因同源性左右臂片段的克隆
3.2.4 壮观霉素抗性基因（Spc）的扩增与序列测定
3.2.5 重组质粒pGEM-T easy-luxE-L-Spc-R的构建
3.2.6 自杀性重组质粒pDS132-luxE-LSR的构建
3.2.7 鸭疫里默氏杆菌Yb2株△luxE基因缺失株的筛选及鉴定
3.2.8 鸭疫里默氏杆菌Yb2△luxE基因缺失株的基因互补试验
3.2.9 检测luxE基因缺失对上下游基因的影响
3.2.10 鸭疫里默氏杆菌Yb2△luxE以及cYb2△luxE的生物学特性研究
3.3 试验结果
3.3.1 鸭疫里默氏杆菌Yb2 luxE基因同源性左右臂片段的克隆
3.3.2 壮观霉素抗性基因（Spc）的扩增
3.3.3 重组质粒pGEM-T easy-LSR的构建
3.3.4 自杀性重组质粒pDS132-luxE-LSR
3.3.5 Yb2△luxE基因缺失株的筛选及鉴定
3.3.6 Yb2△luxE基因缺失株的基因互补试验
3.3.7 荧光定量检测luxE基因缺失对上下游基因的影响
3.3.8 鸭疫里默氏杆菌Yb2△luxE以及cYb2△luxE的生物学特性研究
3.4 讨论
全文结论
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]血清10型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制[J]. 王小兰,刘蕾,刘海文,苗双,胡青海,韩先干,丁铲,于圣青. 中国家禽. 2012(15)
[2]血清1型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制[J]. 王小兰,胡青海,童永亮,韩先干,丁铲,于圣青. 中国预防兽医学报. 2012(04)
[3]血清2型鸭疫里默氏杆菌制苗用菌株的筛选及灭活油乳剂疫苗的研制[J]. 王小兰,胡青海,韩先干,丁铲,于圣青. 中国动物传染病学报. 2012(01)
[4]酰基转移酶研究[J]. 范东东,孙铭娟,王梁华,焦炳华. 生命的化学. 2008(06)
[5]Effect of Porphyromonas gingivalis PrtC on cytokine expression in ECV304 endothelial cells and its level in subgingival plaques from patients with chronic periodontitis[J]. Yan-min WU~2,Li-li CHEN~(2,6),Jie YAN~(3,6),Chun-yan ZHUANG~4,Zhi-yuan GU~5~2 Department of Stomatology,the Second Affiliated Hospital,College of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310009,China;~3 Depart-ment of Medical Microbiology and Parasitology,College of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310006,China;~4 Department ofStomatology,the Affiliated Hospital of the School of Medicine,Ningbo University,Ningbo 315020,China;~5 Department of Oral andMaxillofacial Surgery,the Affiliated Hospital of Stomatology,College of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310006,China. Acta Pharmacologica Sinica. 2007(07)
[6]7型鸭疫里氏杆菌分离株的鉴定[J]. 张大丙,郭玉璞. 中国兽医杂志. 2003(05)
[7]血清8型鸭疫里墨氏杆菌在我国的发现及其病原特性研究[J]. 汪铭书,程安春,陈孝跃,刘兆宇,方鹏飞,郭宇飞. 中国预防兽医学报. 2003(01)
[8]血清4型鸭疫里默氏杆菌在我国的发现及其病原特性研究[J]. 汪铭书,程安春,陈孝跃,刘兆宇,方鹏飞,郭宇飞. 中国兽医杂志. 2002(12)
[9]血清5型鸭疫里氏杆菌在我国的发现及其病原特性研究[J]. 汪铭书,程安春,陈孝跃,刘兆宇,方鹏飞,郭宇飞. 中国兽医科技. 2002(09)
[10]15型鸭疫里氏杆菌分离株的鉴定[J]. 张大丙,郭玉璞. 中国兽医杂志. 2002(03)
博士论文
[1]鸭疫里默氏杆菌致病相关因子研究[D]. 李继祥.西南大学 2009
本文编号：3036908
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
图标清单
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第一章 引言
1.1 概述
1.1.1 病原学
1.1.2 血清型
1.2 全基因组序列的发表
1.3 毒力因子
1.4 Acyl-protein synthetases和Acyl transferase的研究进展
1.4.1 Lux操纵子的概述
1.4.2 发光细菌中luxE基因的研究进展
1.4.3 脂多糖酰基化与免疫应答的关系
1.5 展望
第二章 鸭疫里默氏杆菌10个基因在菌株中的分布及序列分析
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 基因选择、引物设计与合成
2.2 试验方法
2.2.1 测定10个基因在RA菌株中的分布情况
2.2.2 PCR产物的纯化与克隆
2.2.3 序列分析和系统进化树的建立
2.3 结果
2.3.1 10个基因在RA菌株中的分布情况
2.3.2 PCR产物的克隆和鉴定
2.3.3 序列测定与分析
2.3.4 系统进化树的绘制
2.4 讨论
第三章 鸭疫里默氏杆菌LUXE基因缺失株的构建及生物学特性分析
3.1 材料
3.1.1 菌株和培养条件
3.1.2 主要酶、载体及试剂
3.1.3 主要培养基及缓冲液的配制
3.1.4 抗生素及使用浓度
3.1.5 主要仪器设备
3.1.6 PCR引物
3.2 试验方法
3.2.1 提取鸭疫里默氏杆菌Yb2株基因组
3.2.2 鸭疫里默氏杆菌Yb2株luxE基因的克隆及测序
3.2.3 鸭疫里默氏杆菌Yb2 luxE基因同源性左右臂片段的克隆
3.2.4 壮观霉素抗性基因（Spc）的扩增与序列测定
3.2.5 重组质粒pGEM-T easy-luxE-L-Spc-R的构建
3.2.6 自杀性重组质粒pDS132-luxE-LSR的构建
3.2.7 鸭疫里默氏杆菌Yb2株△luxE基因缺失株的筛选及鉴定
3.2.8 鸭疫里默氏杆菌Yb2△luxE基因缺失株的基因互补试验
3.2.9 检测luxE基因缺失对上下游基因的影响
3.2.10 鸭疫里默氏杆菌Yb2△luxE以及cYb2△luxE的生物学特性研究
3.3 试验结果
3.3.1 鸭疫里默氏杆菌Yb2 luxE基因同源性左右臂片段的克隆
3.3.2 壮观霉素抗性基因（Spc）的扩增
3.3.3 重组质粒pGEM-T easy-LSR的构建
3.3.4 自杀性重组质粒pDS132-luxE-LSR
3.3.5 Yb2△luxE基因缺失株的筛选及鉴定
3.3.6 Yb2△luxE基因缺失株的基因互补试验
3.3.7 荧光定量检测luxE基因缺失对上下游基因的影响
3.3.8 鸭疫里默氏杆菌Yb2△luxE以及cYb2△luxE的生物学特性研究
3.4 讨论
全文结论
参考文献
致谢
作者简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]血清10型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制[J]. 王小兰,刘蕾,刘海文,苗双,胡青海,韩先干,丁铲,于圣青. 中国家禽. 2012(15)
[2]血清1型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制[J]. 王小兰,胡青海,童永亮,韩先干,丁铲,于圣青. 中国预防兽医学报. 2012(04)
[3]血清2型鸭疫里默氏杆菌制苗用菌株的筛选及灭活油乳剂疫苗的研制[J]. 王小兰,胡青海,韩先干,丁铲,于圣青. 中国动物传染病学报. 2012(01)
[4]酰基转移酶研究[J]. 范东东,孙铭娟,王梁华,焦炳华. 生命的化学. 2008(06)
[5]Effect of Porphyromonas gingivalis PrtC on cytokine expression in ECV304 endothelial cells and its level in subgingival plaques from patients with chronic periodontitis[J]. Yan-min WU~2,Li-li CHEN~(2,6),Jie YAN~(3,6),Chun-yan ZHUANG~4,Zhi-yuan GU~5~2 Department of Stomatology,the Second Affiliated Hospital,College of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310009,China;~3 Depart-ment of Medical Microbiology and Parasitology,College of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310006,China;~4 Department ofStomatology,the Affiliated Hospital of the School of Medicine,Ningbo University,Ningbo 315020,China;~5 Department of Oral andMaxillofacial Surgery,the Affiliated Hospital of Stomatology,College of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310006,China. Acta Pharmacologica Sinica. 2007(07)
[6]7型鸭疫里氏杆菌分离株的鉴定[J]. 张大丙,郭玉璞. 中国兽医杂志. 2003(05)
[7]血清8型鸭疫里墨氏杆菌在我国的发现及其病原特性研究[J]. 汪铭书,程安春,陈孝跃,刘兆宇,方鹏飞,郭宇飞. 中国预防兽医学报. 2003(01)
[8]血清4型鸭疫里默氏杆菌在我国的发现及其病原特性研究[J]. 汪铭书,程安春,陈孝跃,刘兆宇,方鹏飞,郭宇飞. 中国兽医杂志. 2002(12)
[9]血清5型鸭疫里氏杆菌在我国的发现及其病原特性研究[J]. 汪铭书,程安春,陈孝跃,刘兆宇,方鹏飞,郭宇飞. 中国兽医科技. 2002(09)
[10]15型鸭疫里氏杆菌分离株的鉴定[J]. 张大丙,郭玉璞. 中国兽医杂志. 2002(03)
博士论文
[1]鸭疫里默氏杆菌致病相关因子研究[D]. 李继祥.西南大学 2009
本文编号：3036908
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