TETs和山羊子宫液、血浆外泌体对山羊早期妊娠的影响

发布时间：2021-02-17 09:22

　　在山羊妊娠过程中,胎盘是影响山羊胚胎发育和生长的重要因素。妊娠早期胎盘发育异常会造成流产、胎儿发育不良、发育迟缓等诸多问题。妊娠早期胎盘发育的调控机制复杂。TET（Ten-Eleven Translocation）蛋白家族在调控胚胎和胎盘发育等过程中具有重要作用,输卵管与子宫内膜细胞的死亡平衡会影响受精卵及早期胚胎的发育。但TETs是否参与早期胚胎发育过程中的输卵管或子宫内膜细胞的生命活动还不清楚。研究表明,外泌体在各种体液中均存在,并且含有多种蛋白质、脂质、核酸等生物成分,可以作为细胞间通讯载体,能够介导细胞与细胞之间、细胞与组织之间生物信息的转运,进而调节靶细胞或靶组织的功能。目前关于山羊体液外泌体的分离、鉴定及对胎盘发育的调控功能等方面还鲜有研究。本研究以山羊为研究对象,首先探究了空配19d（C19）与妊娠19d（P19）山羊输卵管及子宫角中TETs及细胞程序性死亡相关基因、炎症相关基因的表达规律,并分析了TETs与细胞程序性死亡基因之间的相关关系;其次,抽提、鉴定C19组及P19组子宫液外泌体,并研究了山羊子宫液对胎盘滋养层细胞增殖的影响;最后,对非妊娠（NP）及妊娠30d（P... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
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第1章 文献综述
    1.1 哺乳动物妊娠早期胚胎发育和附植
    1.2 妊娠早期胚胎发育及附植的分子调控
        1.2.1 哺乳动物妊娠早期胚胎附植标记基因
        1.2.2 TET家族参与调控妊娠早期胚胎发育及附植
        1.2.3 细胞程序性死亡相关基因参与调控妊娠早期胚胎发育及附植
    1.3 外泌体对妊娠早期胚胎发育及附植的调控
        1.3.1 外泌体的研究进展
        1.3.2 外泌体在哺乳动物妊娠中的生物学功能
        1.3.3 外泌体与妊娠相关疾病的关系
    1.4 本研究的目的及意义
第2章 TETs与细胞程序性死亡相关基因在妊娠早期山羊输卵管及子宫角表达研究
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 试验仪器
        2.2.2 材料试剂
        2.2.3 试验动物
        2.2.4 HE染色试验
        2.2.5 基因表达检测
        2.2.6 结果统计与分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 子宫角的组织形态变化
        2.3.2 胚胎附植标志基因在子宫角中的表达
        2.3.3 TETs在输卵管及子宫角的表达
        2.3.4 细胞程序性死亡相关基因在输卵管和子宫角中的表达
        2.3.5 TETs与细胞程序性死亡相关基因之间的相关性分析
    2.4 讨论
    2.5 小结
第3章 山羊子宫液外泌体对胎盘滋养层细胞增殖的影响
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 试验仪器
        3.2.2 材料试剂
        3.2.3 试验动物
        3.2.4 超速离心步骤
        3.2.5 外泌体形态观察
        3.2.6 BCA法测定蛋白浓度
        3.2.7 蛋白免疫印迹（Western blotting）
        3.2.8 细胞培养
        3.2.9 细胞增殖试验
        3.2.10 DIL标记外泌体进入胎盘滋养层细胞
        3.2.11 qRT-PCR检测mRNA的表达量
        3.2.12 结果统计与分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 子宫液总蛋白含量变化
        3.3.2 检测不同浓度子宫液对山羊胎盘滋养层细胞增殖的影响
        3.3.3 山羊子宫液对胎盘滋养层细胞增殖和凋亡相关基因的影响
        3.3.4 山羊子宫液外泌体的抽提与鉴定
        3.3.5 山羊子宫液外泌体总蛋白测定及标志蛋白检测
        3.3.6 DIL标记的外泌体进入胎盘滋养层细胞
        3.3.7 山羊子宫液外泌体对胎盘滋养层细胞增殖的影响
    3.4 讨论
    3.5 小结
第4章 妊娠早期山羊血浆外泌体对胎盘滋养层细胞增殖mi RNAs的筛选鉴定
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 试验仪器
        4.2.2 材料试剂
        4.2.3 试验动物
        4.2.4 超速离心步骤
        4.2.5 外泌体形态观察
        4.2.6 BCA蛋白浓度测定
        4.2.7 蛋白免疫印迹（Western blotting）
        4.2.8 细胞增殖试验
        4.2.9 DIL标记外泌体进入胎盘滋养层细胞
        4.2.10 血浆外泌体RNA提取
        4.2.11 血浆外泌体miRNA的测序分析
        4.2.12 结果统计与分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 山羊血浆外泌体的抽提与鉴定
        4.3.2 山羊血浆外泌体总蛋白测定及标志蛋白检测
        4.3.3 DIL标记的外泌体进入胎盘滋养层细胞
        4.3.4 山羊血浆外泌体对胎盘滋养层细胞增殖的影响
        4.3.5 测序数据及其质量控制
        4.3.6 差异表达miRNAs分析
        4.3.7 差异表达miRNA靶基因预测及功能分析
    4.4 讨论
    4.5 小结
第5章 结论
参考文献
附录
致谢
在学期间发表的文章


【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞自噬与小RNA病毒相互作用分子机制研究进展[J]. 姜慧慧,王洪梅,潘伟,侯佩莉,赵贵民,何洪彬.  动物医学进展. 2019(11)
[2]NOTCH信号通路在滋养细胞浸润及胎盘血管重铸中的研究进展[J]. 鲁蕃,孙晓彤,何西彦,杨莉莉.  实用妇科内分泌电子杂志. 2019(30)
[3]哺乳动物子宫腔胞外囊泡的组分及功能研究进展[J]. 高威,周臣,洪林君.  现代畜牧兽医. 2019(06)
[4]细胞焦亡研究进展[J]. 潘少容,曾克武,白云.  生理科学进展. 2019(02)
[5]Perturbations in the uterine luminal fluid composition are detrimental to pregnancy establishment in cattle[J]. Thiago Martins,Guilherme Pugliesi,Mariana Sponchiado,Angela M.Gonella-Diaza,Oscar A.Ojeda-Rojas,Frederich D.Rodriguez,Roney S.Ramos,Andrea C.Basso,Mario Binelli.  Journal of Animal Science and Biotechnology. 2019(01)
[6]BDNF和TRKB蛋白在妊娠期山羊子宫和胎盘的表达[J]. 杨雪,郑文亚,郑路程,王芹芹,熊芳颖,刘犇.  中国畜牧杂志. 2018(06)
[7]山羊早期胎儿组织TET1与Wnt通路基因的表达变化及其相关性[J]. 谭强,罗南剑,张艳丽,安炳星,陈秋羊,赵永聚.  中国农业科学. 2017(14)
[8]Wnt信号通路在牛胎盘发育过程中的功能研究进展[J]. 孙宏亮,许美花,王瑶,鲁文赓.  中国畜牧兽医. 2017(01)
[9]Tetrachloro-1,4-benzoquinone induces apoptosis of mouse embryonic stem cells[J]. Cuiping Li,Fengbang Wang,Hailin Wang.  Journal of Environmental Sciences. 2017(01)
[10]C1q和肿瘤坏死因子相关蛋白4（CTRP4）降低子痫前期大鼠滋养层细胞的caspase-1和IL-1β水平[J]. 段利利,刘子冬,王林,马斌芳,范忆冰,徐莹,郭芬芬.  细胞与分子免疫学杂志. 2016(11)

博士论文
[1]猪附植前期不同形状孕体差异表达基因的筛选与PLET1基因在胎盘发育中的功能初步研究[D]. 滕柳.华中农业大学 2016
[2]小鼠早期胚胎中DNA羟甲基化的动态变化及Tet蛋白的功能[D]. 史历历.中国农业大学 2016

硕士论文
[1]山羊胎盘滋养层细胞TET1调控MMPs和TIMPs分子的研究[D]. 高静.西南大学 2019
[2]山羊胎盘滋养层细胞TET1基因对Wnt通路相关分子表达的影响[D]. 唐毅平.西南大学 2018
[3]山羊Tet1基因克隆及其在胎盘的表达谱[D]. 熊小燕.西南大学 2016
[4]山羊OPN基因多态性及其与胎盘效率、产羔数的关联分析[D]. 毛建文.西南大学 2013
[5]Yes相关蛋白（YAP）在脊椎动物斑马鱼胚胎发育中的作用[D]. 蒋璆.复旦大学 2009



本文编号：3037779