弓形虫顶质体生物发生关键蛋白TgMAP1c作为药物靶点的评价
发布时间：2021-02-18 21:02
弓形虫是一种专性细胞内寄生性原虫,属于顶复门,是引起人兽共患弓形虫病的一种重要病原。弓形虫病是人和哺乳动物感染率较高的寄生虫病。目前临床治疗弓形虫病的药物十分有限,迫切需要寻找新的药物靶点,用以研发治疗弓形虫病的新的药物。顶质体在弓形虫体内发挥着极其重要的功能,如参与合成脂肪酸、血红素和类异戊二烯等弓形虫生长所必须的营养物质。顶质体功能受损会导致虫体死亡。因此顶质体一直被视为理想的治疗弓形虫病的药物靶点。甲硫氨酸氨基肽酶能够切除新生肽链N端起始的甲硫氨酸,在甲硫氨酸的代谢、蛋白质N端的翻译后修饰、蛋白质成熟等过程中发挥着重要的功能。甲硫氨酸氨基肽酶在很多人类疾病中作为重要药物靶点得到了广泛研究,然而弓形虫甲硫氨酸氨基肽酶能否作为治疗弓形虫病的药物靶点还尚未可知。本研究首先通过生物信息学分析对弓形虫甲硫氨酸氨基肽酶进行鉴定。在虫体内过表达弓形虫甲硫氨酸氨基肽酶,通过激光共聚焦显微镜观察其在虫体内的定位情况,发现弓形虫编码的三个甲硫氨酸氨基肽酶（TgMAP1a/b、TgMAP2）定位于虫体胞浆,而TgMAP1c定位于顶质体。为进一步探究TgMAP1c在弓形虫顶质体上发挥的功能,首先利用虫体...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
1.1 弓形虫病
1.2 抗弓形虫药物及药物靶点的研究现状
1.3 弓形虫的顶质体
1.4 甲硫氨酸氨基肽酶
1.5 甲硫氨酸氨基肽酶作为药物靶点的研究
1.6 研究目的及意义
第二章 TgMAPs的生物信息学分析及其定位
2.1 材料
2.1.1 主要仪器
2.1.2 实验材料
2.2 方法
2.2.1 TgMAPs同源性分析与命名
2.2.2 TgMAPs分子结构分析
2.2.3 TgMAP1a/b/c-GFP、TgMAP2-GFP重组质粒的构建
2.2.4 TgMAP1a/b/c-GFP、TgMAP2-GFP在虫体内的定位分析
2.3 实验结果
2.3.1 TgMAPs同源性分析与命名
2.3.2 TgMAPs分子结构分析
2.3.3 构建TgMAP1a/b/c-GFP、TgMAP2-GFP过表达质粒
2.3.4 TgMAP1a/b/c-GFP、TgMAP2-GFP在虫体内的定位
2.4 讨论
2.5 结论
第三章 TgMAP1c转运肽的分析
3.1 材料
3.1.1 主要仪器
3.1.2 实验材料
3.2 方法
3.2.1 构建TgMAP1c截短表达质粒
3.2.2 TgMAP1c截短表达蛋白在虫体内的定位分析
3.3 实验结果
3.3.1 TgMAP1c截短表达质粒的构建
3.3.2 TgMAP1c截短表达蛋白与CPN60 的共定位
3.4 讨论
3.5 结论
第四章 TgMAP1c条件性缺失虫株的构建
4.1 材料
4.1.1 主要仪器
4.1.2 实验材料
4.2 方法
4.2.1 TgMAP1c敲除质粒的构建
4.2.2 TgMAP1c-3HA重组质粒的构建
4.2.3 TgMAP1c-3HA重组虫株的构建、筛选及鉴定
4.2.4 TgMAP1c条件性缺失虫株的构建、筛选及鉴定
4.3 实验结果
4.3.1 构建TgMAP1c敲除质粒
4.3.2 构建TgMAP1c-3HA重组质粒
4.3.3 构建TgMAP1c-3HA重组虫株及鉴定
4.3.4 构建TgMAP1c条件性缺失虫株
4.4 讨论
4.5 结论
第五章 TgMAP1c条件性缺失后的虫体表型
5.1 材料
5.1.1 主要仪器
5.1.2 实验材料
5.2 方法
5.2.1 TgMAP1c缺失虫株增殖水平的检测
5.2.2 TgMAP1c缺失虫株复制水平的检测
5.2.3 TgMAP1c缺失虫株入侵水平的检测
5.2.4 TgMAP1c缺失虫株对顶质体丢失的影响
5.2.5 TgMAP1c缺失虫株对顶质体自身编码基因转录水平的影响
5.2.6 TgMAP1c缺失虫株对弓形虫毒力的影响
5.3 实验结果
5.3.1 TgMAP1c缺失对虫体增殖水平的影响
5.3.2 TgMAP1c缺失对虫体复制水平的影响
5.3.3 TgMAP1c缺失对虫体入侵水平的影响
5.3.4 TgMAP1c缺失对虫体顶质体丢失的影响
5.3.5 TgMAP1c缺失对虫体顶质体自身编码基因转录水平的影响
5.3.6 TgMAP1c缺失对弓形虫毒力的影响
5.4 讨论
5.5 结论
第六章 TgMAP1c补回虫株的构建及表型鉴定
6.1 材料
6.1.1 主要仪器
6.1.2 实验材料
6.2 方法
6.2.1 TgMAP1c补回载体的构建
6.2.2 TgMAP1c补回虫株的构建
6.2.3 TgMAP1c补回虫株的表型鉴定
6.3 实验结果
6.3.1 构建TgMAP1c/Δ429-697 补回载体
6.3.2 TgMAP1c补回虫株的构建
6.3.3 TgMAP1c补回虫株的表型鉴定
6.4 讨论
6.5 结论
第七章 讨论
第八章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3040094
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
1.1 弓形虫病
1.2 抗弓形虫药物及药物靶点的研究现状
1.3 弓形虫的顶质体
1.4 甲硫氨酸氨基肽酶
1.5 甲硫氨酸氨基肽酶作为药物靶点的研究
1.6 研究目的及意义
第二章 TgMAPs的生物信息学分析及其定位
2.1 材料
2.1.1 主要仪器
2.1.2 实验材料
2.2 方法
2.2.1 TgMAPs同源性分析与命名
2.2.2 TgMAPs分子结构分析
2.2.3 TgMAP1a/b/c-GFP、TgMAP2-GFP重组质粒的构建
2.2.4 TgMAP1a/b/c-GFP、TgMAP2-GFP在虫体内的定位分析
2.3 实验结果
2.3.1 TgMAPs同源性分析与命名
2.3.2 TgMAPs分子结构分析
2.3.3 构建TgMAP1a/b/c-GFP、TgMAP2-GFP过表达质粒
2.3.4 TgMAP1a/b/c-GFP、TgMAP2-GFP在虫体内的定位
2.4 讨论
2.5 结论
第三章 TgMAP1c转运肽的分析
3.1 材料
3.1.1 主要仪器
3.1.2 实验材料
3.2 方法
3.2.1 构建TgMAP1c截短表达质粒
3.2.2 TgMAP1c截短表达蛋白在虫体内的定位分析
3.3 实验结果
3.3.1 TgMAP1c截短表达质粒的构建
3.3.2 TgMAP1c截短表达蛋白与CPN60 的共定位
3.4 讨论
3.5 结论
第四章 TgMAP1c条件性缺失虫株的构建
4.1 材料
4.1.1 主要仪器
4.1.2 实验材料
4.2 方法
4.2.1 TgMAP1c敲除质粒的构建
4.2.2 TgMAP1c-3HA重组质粒的构建
4.2.3 TgMAP1c-3HA重组虫株的构建、筛选及鉴定
4.2.4 TgMAP1c条件性缺失虫株的构建、筛选及鉴定
4.3 实验结果
4.3.1 构建TgMAP1c敲除质粒
4.3.2 构建TgMAP1c-3HA重组质粒
4.3.3 构建TgMAP1c-3HA重组虫株及鉴定
4.3.4 构建TgMAP1c条件性缺失虫株
4.4 讨论
4.5 结论
第五章 TgMAP1c条件性缺失后的虫体表型
5.1 材料
5.1.1 主要仪器
5.1.2 实验材料
5.2 方法
5.2.1 TgMAP1c缺失虫株增殖水平的检测
5.2.2 TgMAP1c缺失虫株复制水平的检测
5.2.3 TgMAP1c缺失虫株入侵水平的检测
5.2.4 TgMAP1c缺失虫株对顶质体丢失的影响
5.2.5 TgMAP1c缺失虫株对顶质体自身编码基因转录水平的影响
5.2.6 TgMAP1c缺失虫株对弓形虫毒力的影响
5.3 实验结果
5.3.1 TgMAP1c缺失对虫体增殖水平的影响
5.3.2 TgMAP1c缺失对虫体复制水平的影响
5.3.3 TgMAP1c缺失对虫体入侵水平的影响
5.3.4 TgMAP1c缺失对虫体顶质体丢失的影响
5.3.5 TgMAP1c缺失对虫体顶质体自身编码基因转录水平的影响
5.3.6 TgMAP1c缺失对弓形虫毒力的影响
5.4 讨论
5.5 结论
第六章 TgMAP1c补回虫株的构建及表型鉴定
6.1 材料
6.1.1 主要仪器
6.1.2 实验材料
6.2 方法
6.2.1 TgMAP1c补回载体的构建
6.2.2 TgMAP1c补回虫株的构建
6.2.3 TgMAP1c补回虫株的表型鉴定
6.3 实验结果
6.3.1 构建TgMAP1c/Δ429-697 补回载体
6.3.2 TgMAP1c补回虫株的构建
6.3.3 TgMAP1c补回虫株的表型鉴定
6.4 讨论
6.5 结论
第七章 讨论
第八章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3040094
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