口蹄疫A型VP1蛋白单抗制备及竞争ELISA初步建立
发布时间：2021-02-19 07:39
口蹄疫俗称“口疮”,主要侵害牛、羊、猪等偶蹄动物,引起口、蹄、乳头等部位会出现水泡形成糜烂。口蹄疫发病率高,传播迅速,制约了畜牧业的发展以及动物和动物产品的国际贸易。近年来,口蹄疫A型从东南亚地区传入我们东亚国家,使我国口蹄疫疫情变得更为严峻,因此,需要一种简便、特异的检测方法对该病进行诊断和监测。本研究通过特异性引物扩增克隆口蹄疫A型病毒的VP1基因,构建表达质粒PET-32a-VP1和pGEX-6p-l-VP1,转入BL21重组菌诱导表达融合蛋白,可溶性分析主要以包涵体形式存在。融合蛋白分别经His和GST柱层析纯化,SDS-PAGE分析蛋白电泳纯度较高,Western blot检测能与口蹄疫A型多克隆抗体特异性结合,而不与O型和Asial型发生反应,表明融合蛋白具有良好的特异性和抗原性。用纯化的融合蛋白PET-32a-VPl免疫6周龄的BALB/c雌性小鼠,经过3次免疫后测定效价均大于1:12800,可用于细胞融合。以纯化的融合蛋白pGEX-6p-1-VP1作为包被抗原进行间接ELISA筛选阳性杂交瘤,经4次细胞亚克隆最终筛选出4株稳定分泌抗口蹄疫A型VP1蛋白单抗的杂交瘤细胞株...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]HtsA表达质粒克隆和蛋白质的纯化[J]. 宋英莉,吕春梅,张晓兰,边淑玲,徐杰,朱宛宛,朱辉. 哈尔滨医科大学学报. 2012(04)
[2]口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及应用研究进展[J]. 杨沁,林彤,高闪电,常惠芸. 生物技术通讯. 2012(03)
[3]酶联免疫吸附试验在口蹄疫诊断中的研究进展[J]. 厍大亮,李冬. 中国农学通报. 2011(29)
[4]Evolution and molecular epidemiology of foot-and-mouth disease virus in China[J]. BAI XingWen*,LI PingHua,BAO HuiFang*,LIU ZaiXin*,LI Dong,LU ZengJun,CAO YiMei,SHANG YouJun,SHAO JunJun,CHANG HuiYun,LUO JianXun & LIU XiangTao State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,National Foot-and-Mouth Disease Reference Laboratory,Engineering Research Center of Biological Detection of Gansu Province,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China. Chinese Science Bulletin. 2011(21)
[5]A Simple and Rapid Colloidal Gold-based Immunochromatogarpic Strip Test for Detection of FMDV Serotype A[J]. Tao Jiang1,2,Zhong Liang2,Wei-wei Ren3,Juan Chen2,Xiao-ying Zhi3,Guang-yu Qi3,Xiang-tao Liu2 and Xue-peng Cai 2 (1.Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China; 2. Key laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture,State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China; 3. China Agricultural Vet.Bio.Science and Technlolgy Co.,LTD,Lanzhou 730046,China). Virologica Sinica. 2011(01)
[6]RDD基序对口蹄疫Asia1型毒株感染力的影响[J]. 郑海学,郭建宏,靳野,尚佑军,田宏,杨亚民,刘湘涛,才学鹏. 科学通报. 2010(14)
[7]口蹄疫病毒VP1基因的原核可溶性表达[J]. 王海烽,易忠,魏玉荣,魏婕,胡尔马西,符子华. 中国畜牧兽医. 2009(10)
[8]口蹄疫检测技术的研究进展与应用[J]. 朱文钏,孔繁德,林祥梅,徐淑菲,吴德峰,韩雪清,吴绍强. 经济动物学报. 2009(03)
[9]利用Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体建立单抗竞争ELISA方法[J]. 林彤,邵军军,丛国正,独军政,高闪电,常惠芸,谢庆阁. 安徽农业科学. 2009(23)
[10]C型口蹄疫病毒VP1基因的原核表达及重组蛋白的纯化[J]. 常惠芸,独军政,丛国正,邵军军,林彤,冯金瑞,刘萍. 畜牧与兽医. 2009(07)
硕士论文
[1]抗C型口蹄疫病毒VP1单克隆抗体的制备及初步应用[D]. 杨沁.甘肃农业大学 2012
[2]鹅细小病毒NS基因PCR和单抗竞争ELISA检测方法的建立及应用[D]. 王倩.东北农业大学 2011
[3]A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1单克隆抗体的制备及初步应用[D]. 李菁.中国农业科学院 2010
本文编号：3040807
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?口蹄疫病毒基因组示意图??Ｆｉｇ．?１￣１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｍａｐ?ｏｆ?ＦＭＤＶ?ｇｅｎｏｍｅ??
重组菌?ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／ＢＬ２１?和?ｐＧＥＸ－６ｐ－ｌ－ＶＰ１／ＢＬ２１?裂解产物进行?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?电泳，??用考马斯亮蓝快速染色剂染色，可见重组菌的裂解产物分别在约４３．?６ＫＤａ和４９．?３ＫＤ的??蛋白条带（
祖丨一￣＾一?／??图３－７重组菌ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／ＢＬ２１不同ＩＰＴＧ浓度诱导表达产物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析??Ｍ：标准蛋白质分子量；１－６：分别为?Ｏ．ｌｍＭ、０．４ｍＭ、０．８ｘｎＭ、１．２ｍＭ、１．６ｍＭ、２．０ｍＭ?的??ＩＰＴＧ?浓度诱导?ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／ＢＬ２１?表达??Ｆｉｇ．３－７?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＩＰＴＧ??Ｍ：?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｗｅｉｇｈｔ?ｍａｒｋｅｒ；?１－６：?ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／?ＢＬ２１?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ?ａｔ?Ｏ．ｌｍＭ、??０．４ｍＭ、０．８ｍＭ、１．２ｍＭ、１．６ｍＭ、２．０ｍＭＩＰＴＧ??３．?１．?４．?２优化重组菌ｐＧＥＸ－６ｐ－ｌ－ＶＰｌ／ＢＬ２１表达条件??同上ＰＥＴ－３２ａ－ＶＰｌ／ＢＬ２１的方法对重组菌ｐＧＥＸ－６ｐ－ｌ－ＶＰｌ／ＢＬ２１表达的时间和ＩＰＴＧ??浓度进行优化，由图３－８可见在ｌ．ＯｍＭＩＰＴＧ终浓度条件下，第６小时表达量最大；由图??２８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]HtsA表达质粒克隆和蛋白质的纯化[J]. 宋英莉,吕春梅,张晓兰,边淑玲,徐杰,朱宛宛,朱辉. 哈尔滨医科大学学报. 2012(04)
[2]口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及应用研究进展[J]. 杨沁,林彤,高闪电,常惠芸. 生物技术通讯. 2012(03)
[3]酶联免疫吸附试验在口蹄疫诊断中的研究进展[J]. 厍大亮,李冬. 中国农学通报. 2011(29)
[4]Evolution and molecular epidemiology of foot-and-mouth disease virus in China[J]. BAI XingWen*,LI PingHua,BAO HuiFang*,LIU ZaiXin*,LI Dong,LU ZengJun,CAO YiMei,SHANG YouJun,SHAO JunJun,CHANG HuiYun,LUO JianXun & LIU XiangTao State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,National Foot-and-Mouth Disease Reference Laboratory,Engineering Research Center of Biological Detection of Gansu Province,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China. Chinese Science Bulletin. 2011(21)
[5]A Simple and Rapid Colloidal Gold-based Immunochromatogarpic Strip Test for Detection of FMDV Serotype A[J]. Tao Jiang1,2,Zhong Liang2,Wei-wei Ren3,Juan Chen2,Xiao-ying Zhi3,Guang-yu Qi3,Xiang-tao Liu2 and Xue-peng Cai 2 (1.Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China; 2. Key laboratory of Animal Virology of Ministry of Agriculture,State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046,China; 3. China Agricultural Vet.Bio.Science and Technlolgy Co.,LTD,Lanzhou 730046,China). Virologica Sinica. 2011(01)
[6]RDD基序对口蹄疫Asia1型毒株感染力的影响[J]. 郑海学,郭建宏,靳野,尚佑军,田宏,杨亚民,刘湘涛,才学鹏. 科学通报. 2010(14)
[7]口蹄疫病毒VP1基因的原核可溶性表达[J]. 王海烽,易忠,魏玉荣,魏婕,胡尔马西,符子华. 中国畜牧兽医. 2009(10)
[8]口蹄疫检测技术的研究进展与应用[J]. 朱文钏,孔繁德,林祥梅,徐淑菲,吴德峰,韩雪清,吴绍强. 经济动物学报. 2009(03)
[9]利用Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体建立单抗竞争ELISA方法[J]. 林彤,邵军军,丛国正,独军政,高闪电,常惠芸,谢庆阁. 安徽农业科学. 2009(23)
[10]C型口蹄疫病毒VP1基因的原核表达及重组蛋白的纯化[J]. 常惠芸,独军政,丛国正,邵军军,林彤,冯金瑞,刘萍. 畜牧与兽医. 2009(07)
硕士论文
[1]抗C型口蹄疫病毒VP1单克隆抗体的制备及初步应用[D]. 杨沁.甘肃农业大学 2012
[2]鹅细小病毒NS基因PCR和单抗竞争ELISA检测方法的建立及应用[D]. 王倩.东北农业大学 2011
[3]A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1单克隆抗体的制备及初步应用[D]. 李菁.中国农业科学院 2010
本文编号：3040807
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