新城疫病毒单感染及猪流感病毒与猪链球菌共感染差异蛋白组学分析
发布时间：2021-02-20 11:54
本课题是应用基于双向电泳的蛋白质组学技术及MALDI TOF/TOF质谱检测技术，分析不同禽源的新城疫病毒（NA-1及F48E9株）体外感染原代鸡胚成纤维细胞（CEF）全蛋白变化情况。实验分为三组比较：比较新城疫病毒NA-1感染细胞前后全细胞蛋白；比较新城疫病毒F48E9感染细胞前后全细胞蛋白；比较不同NA-1及F48E9新城疫病毒感染细胞后全细胞蛋白。通过比较鉴定差异表达的蛋白，分析差异蛋白的功能。进而选取其中两种蛋白进行功能分析，采用构建真核表达质粒转染细胞的方法，研究蛋白过表达对细胞增殖的影响。首先用NA-1株病毒体外感染原代鸡胚成纤维细胞12h、24h、36h观察细胞病变及间接免疫荧光试验确定病毒感染细胞最佳时期，通过以上两种方法，确定病毒感染全细胞蛋白提取时间为病毒感染细胞后24h，在这个时期，大部分（90%）细胞已经被病毒感染，但并没有死亡，是病毒感染研究的最佳时间。在确定时间点后，扩大培养细胞，然后将病毒NA-1及F48E9感染鸡胚成纤维细胞24h，感染结束后加入全细胞蛋白提取液提取感染及未感染的鸡胚成纤维全细胞蛋白，离心去除细胞碎片后，上清液即为粗提蛋白样品。在双向电泳...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：136 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
间接免疫荧光试验检测NA-1病毒感染不同时间，病毒感染细胞结果
图 1.2 蛋白标准曲线Figure 1.2 Protein standard curve同源新城疫病毒感染 CEF 的双向电泳凝胶图谱源新城疫 NA-1 株和禽源新城疫 F48E9 株感染鸡胚成纤维细胞 24h 后总蛋白，为了减小误差，每种样品感染 3 次，凝胶电泳重复 3 次。双8cm pH4-7 IPG 胶条分离 150μg 蛋白，分离后，应用与质谱兼容的银色后进行图像扫描及图像分析，如图 2.2、2.3、2.4 所示，我们分别（未感染的 CEF 细胞），569（感染 NA-1 的 CEF 细胞）和 578（感染 FF 细胞）左右的点。凝胶经扫描后，将图像输入软件，用软件进行蛋比较，差异在 3 倍以上的蛋白点为差异蛋白点，进行后续的分析及感染 NA-1 病毒的 CEF 细胞（NA）全蛋白与未感染的 CEF 全细胞ol)的比较有 14 个 3 倍以上显著差异点；感染 F48E9 病毒的 CEF 细胞（
疫、鹅源新城疫感染鸡胚成纤维细胞及未感染的鸡胚成胞双向电泳差异点比较ken Newcastle Disease, goose-origin Newcastle disease infbryo fibroblasts and uninfected chicken embryo fibroblao-dimensional electrophoresis point of difference感染 3 倍以上差异点个数 上调 A vs Control 14 3 E vs Control 18 7 NA vs FE 17 4
【参考文献】：
期刊论文
[1]钙网蛋白的免疫生物学活性研究进展[J]. 洪超,高晓明. 生物物理学报. 2012(08)
[2]波形蛋白在细胞中的潜在功能[J]. 郭文琼,宋富强,陈炜,胡晓梅. 生命的化学. 2012(04)
[3]新城疫病毒人工感染鹅脾脏差异表达蛋白质组初步分析[J]. 王郁杨,开妍,段志强,吴双,胡顺林,王晓泉,刘秀梵. 畜牧兽医学报. 2012(07)
[4]膜联蛋白的功能与调控研究进展[J]. 黄逸群,左开井. 生物技术进展. 2012(03)
[5]角蛋白与肿瘤[J]. 曾晶,陈东妮,徐进. 中国细胞生物学学报. 2012(05)
[6]禽流感病毒H5N1病毒颗粒中鸡胚宿主蛋白的质谱分析[J]. 王志武,孙万春,周悦,丛中一,周庆伟,刘宁. 分析化学. 2012(03)
[7]钙网蛋白与肿瘤免疫[J]. 吴红艳,王艳林. 生命科学. 2011(10)
[8]波形蛋白介导猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞作用的初步研究[J]. 王伟伟,张璐,马晓春,高继明,肖一红,周恩民. 病毒学报. 2011(05)
[9]禽主要病毒性感染的比较蛋白质组学研究进展[J]. 段志强,王郁杨,开妍,胡顺林,刘秀梵. 中国家禽. 2010(24)
[10]病毒蛋白质组学:病毒学研究前沿[J]. 周圣涛,刘锐,赵霞,黄灿华,魏于全. 中国科学:生命科学. 2010(09)
博士论文
[1]传染性法氏囊病毒感染鸡靶器官的比较蛋白质组研究[D]. 吴永平.浙江大学 2009
本文编号：3042732
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：136 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
间接免疫荧光试验检测NA-1病毒感染不同时间，病毒感染细胞结果
图 1.2 蛋白标准曲线Figure 1.2 Protein standard curve同源新城疫病毒感染 CEF 的双向电泳凝胶图谱源新城疫 NA-1 株和禽源新城疫 F48E9 株感染鸡胚成纤维细胞 24h 后总蛋白，为了减小误差，每种样品感染 3 次，凝胶电泳重复 3 次。双8cm pH4-7 IPG 胶条分离 150μg 蛋白，分离后，应用与质谱兼容的银色后进行图像扫描及图像分析，如图 2.2、2.3、2.4 所示，我们分别（未感染的 CEF 细胞），569（感染 NA-1 的 CEF 细胞）和 578（感染 FF 细胞）左右的点。凝胶经扫描后，将图像输入软件，用软件进行蛋比较，差异在 3 倍以上的蛋白点为差异蛋白点，进行后续的分析及感染 NA-1 病毒的 CEF 细胞（NA）全蛋白与未感染的 CEF 全细胞ol)的比较有 14 个 3 倍以上显著差异点；感染 F48E9 病毒的 CEF 细胞（
疫、鹅源新城疫感染鸡胚成纤维细胞及未感染的鸡胚成胞双向电泳差异点比较ken Newcastle Disease, goose-origin Newcastle disease infbryo fibroblasts and uninfected chicken embryo fibroblao-dimensional electrophoresis point of difference感染 3 倍以上差异点个数 上调 A vs Control 14 3 E vs Control 18 7 NA vs FE 17 4
【参考文献】：
期刊论文
[1]钙网蛋白的免疫生物学活性研究进展[J]. 洪超,高晓明. 生物物理学报. 2012(08)
[2]波形蛋白在细胞中的潜在功能[J]. 郭文琼,宋富强,陈炜,胡晓梅. 生命的化学. 2012(04)
[3]新城疫病毒人工感染鹅脾脏差异表达蛋白质组初步分析[J]. 王郁杨,开妍,段志强,吴双,胡顺林,王晓泉,刘秀梵. 畜牧兽医学报. 2012(07)
[4]膜联蛋白的功能与调控研究进展[J]. 黄逸群,左开井. 生物技术进展. 2012(03)
[5]角蛋白与肿瘤[J]. 曾晶,陈东妮,徐进. 中国细胞生物学学报. 2012(05)
[6]禽流感病毒H5N1病毒颗粒中鸡胚宿主蛋白的质谱分析[J]. 王志武,孙万春,周悦,丛中一,周庆伟,刘宁. 分析化学. 2012(03)
[7]钙网蛋白与肿瘤免疫[J]. 吴红艳,王艳林. 生命科学. 2011(10)
[8]波形蛋白介导猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞作用的初步研究[J]. 王伟伟,张璐,马晓春,高继明,肖一红,周恩民. 病毒学报. 2011(05)
[9]禽主要病毒性感染的比较蛋白质组学研究进展[J]. 段志强,王郁杨,开妍,胡顺林,刘秀梵. 中国家禽. 2010(24)
[10]病毒蛋白质组学:病毒学研究前沿[J]. 周圣涛,刘锐,赵霞,黄灿华,魏于全. 中国科学:生命科学. 2010(09)
博士论文
[1]传染性法氏囊病毒感染鸡靶器官的比较蛋白质组研究[D]. 吴永平.浙江大学 2009
本文编号：3042732
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3042732.html
