猪流行性腹泻病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与应用及Nsp2蛋白单克隆抗体的制备

发布时间：2021-02-21 12:44

　　猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一种猪的急性并高度接触性传染病,PEDV感染后可导致水样腹泻、呕吐、脱水等症状,成年猪很少表现出临床症状。从1976年开始我国就陆续有PED的报道,自2010年下半年以来,该病的流行强度和流行区域在不断的加强和扩大,对哺乳仔猪致死率较高,临床上与猪传染性胃肠炎、轮状病毒和大肠杆菌等疫病较难鉴别诊断,给世界养猪业造成了巨大经济损失。本研究将纯化的猪流行性腹泻病毒和N蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,用于PEDV抗体的检测和血清学调查。此外,利用原核表达系统表达获得重组蛋白Nsp2,将纯化的Nsp2蛋白免疫小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备Nsp2蛋白的单克隆抗体,为PEDV诊断和致病机理的研究奠定基础。具体内容如下：1.PEDV全病毒抗原间接ELISA检测方法的建立与初步应用采用差速离心方法获得纯化PEDV,作为包被抗原,建立间接ELISA抗体检测方法,对各项反应条件进行优化,并确定其临界值,同时进行特异性... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：98 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述
    第一章 猪流行性腹泻病毒的研究进展
        1 病毒基本特性
            1.1 病毒理化与培养特性
        2 流行情况
        3 病毒基因组结构与蛋白功能
            3.1 病毒基因组结构
            3.2 病毒蛋白功能
        4 诊断技术
            4.1 临床诊断及病理组织变化
            4.2 实验室诊断方法
        5 免疫与预防
            5.1 PEDV灭活疫苗
            5.2 PEDV弱毒疫苗
        6 控制方法
            6.1 加强饲养管理
            6.2 返饲治疗
            6.3 疫苗注射治疗
        参考文献
第二篇 研究内容
    第二章 猪流行性腹泻病毒全病毒抗原间接ELISA抗体检测方法的建立与初步应用
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 间接ELISA方法的建立及条件优化结果
            2.2 间接ELISA阴阳性判定标准的建立
            2.3 特异性试验
            2.4 敏感性试验
            2.5 重复性试验
            2.6 符合率分析
            2.7 临床血清样品的检测
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第三章 猪流行性腹泻病毒N蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与初步应用
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 N基因的扩增
            2.2 重组质粒酶切鉴定
            2.3 重组N蛋白SDS-PAGE结果
            2.4 表达产物Western-blotting鉴定结果
            2.5 重组N蛋白可溶性检测
            2.6 重组N蛋白表达条件优化
            2.7 重组N蛋白的纯化
            2.8 间接ELISA方法的建立及条件优化结果
            2.9 间接ELISA阴阳性判定标准的建立
            2.10 特异性试验
            2.11 敏感性试验
            2.12 重复性试验
            2.13 符合率分析
            2.14 临床血清样品的检测
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第四章 猪流行性腹泻病毒Nsp2基因原核表达与纯化及蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 Nsp2基因的扩增
            2.2 重组质粒酶切鉴定
            2.3 Nsp2基因序列测定
            2.4 重组Nsp2蛋白SDS-PAGE电泳结果
            2.5 表达产物Western-blotting鉴定结果
            2.6 重组Nsp2蛋白可溶性检测
            2.7 重组Nsp2蛋白表达条件优化
            2.8 重组Nsp2蛋白的纯化
            2.9 杂交瘤细胞株的建立和抗体效价的测定
            2.10 单克隆抗体与原核表达蛋白反应的特异性鉴定
            2.11 杂交瘤细胞株分泌MAb的稳定性鉴定
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
全文总结
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪病毒性腹泻流行现状及防控对策[J]. 刘吉山,王玉茂,林初文,李峰,张松林,王金良.  黑龙江畜牧兽医. 2012(22)
[2]小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及抗原活性检测[J]. 董金凯,罗津,阎瑾琦,张亮,高江平,于继云.  南方医科大学学报. 2012(04)
[3]2011年猪流行性腹泻病毒的遗传变异分析[J]. 刘孝珍,陈建飞,时洪艳,张鑫,石达,刘胜旺,冯力.  中国预防兽医学报. 2012(03)
[4]猪流行性腹泻病毒结构蛋白及疫苗的研究进展[J]. 郭春和,黄毓茂,项林盛,唐丽云,甘建平,郭强,焦茂兴.  畜牧与兽医. 2011(12)
[5]猪传染性胃肠炎病毒S、N基因核酸疫苗的构建与免疫原性试验[J]. 杨恒,李华春,曹三杰,文心田.  中国兽医学报. 2011(11)
[6]猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白与感染细胞核磷蛋白的共定位分析[J]. 吕茂杰,陈建飞,时洪艳,陈小金,范秀萍,申识川,冯力.  微生物学报. 2011(05)
[7]猪流行性腹泻流行规律及防治对策[J]. 洪云华.  安徽农学通报(上半月刊). 2011(01)
[8]猪流行性腹泻的实验室诊断方法[J]. 李思银,杨亮宇,杨玉艾.  猪业科学. 2010(12)
[9]猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪A群轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用[J]. 张坤,何启盖.  畜牧兽医学报. 2010(08)
[10]表达猪流行性腹泻病毒中和抗原位点的重组干酪乳杆菌免疫小鼠诱导的免疫应答[J]. 葛俊伟,姜艳平,汪淼,乔薪瑗,刘敏,唐丽杰,李一经.  中国兽医科学. 2010(07)



本文编号：3044364