猪细小病毒分子流行病学调查以及PPV3VP2蛋白免疫特性的研究

发布时间：2021-02-26 14:23

　　猪细小病毒1型（Porcine parvovirus 1, PPV1）可导致母猪繁殖功能性障碍,给全球的养猪业带来了巨大的经济损失。近年来国内外陆续报道出多种新型的猪细小病毒,其中包括猪细小病毒2型（Porcine parvovirus 2, PPV2）、猪细小病毒3型（Porcine parvovirus 3, PPV3）、猪细小病毒4型（Porcine parvovirus 4, PPV4）、猪类博卡病毒（Porcine boca-like virus, PBo-likeV）和猪博卡病毒（Porcine bocavirus, PBoV）等。本研究同时对上述五种新型猪细小病毒在国内的流行概况和变异程度进行了调研,丰富了其分子流行病学参考资料；利用大肠杆菌表达系统和昆虫杆状病毒系统同时表达了PPV3VP2完整蛋白和截短蛋白以研究其免疫原性,为PPV3亚单位疫苗的研发奠定了理论基础：利用PPV3重组VP2蛋白pET-28a-540建立了间接ELISA方法,为PPV3的检测提供了血清学检测手段。具体研究内容如下：1.新型猪细小病毒的分子流行病学调查本研究对2008～2013年期间的308份... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：113 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 猪细小病毒的研究进展
    （一） 猪细小病毒1型
        1 PPV1病原学特性
            1.1 病毒分类
            1.2 病毒形态与理化特性
            1.3 PPV1分子生物学研究进展
            1.4 抗原性
            1.5 PPV1致病性与组织嗜性
            1.6 PPV1体外培养特性
            1.7 PPV1流行病学特性
        2 PPV1诊断方法
            2.1 病毒分离
            2.2 血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验
            2.3 中和试验（SN）
            2.4 酶联免疫吸附试验（ELISA）
            2.5 乳胶凝集试验（LAT）
            2.6 胶体金标记技术（SECGA）
            2.7 聚合酶链式反应检测技术（PCR）
            2.8 核酸探针技术
            2.9 免疫荧光技术（IFA）
        3 PPV1疫苗研究
            3.1 弱毒疫苗
            3.2 灭活疫苗
            3.3 基因工程疫苗
    （二） 猪细小病毒2型
    （三） 猪细小病毒3型
    （四） 猪细小病毒4型
    （五） 猪类博卡病毒
    （六） 猪博卡病毒
    参考文献
第二章 新型猪细小病毒的分子流行病学调查
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 病料
            1.1.2 试剂
        1.2 方法
            1.2.1 DNA的提取
            1.2.2 PCR检测
            1.2.3 序列测定
    2 结果
        2.1 PCR结果
            2.1.1 PPV2感染情况
            2.1.2 PPV3感染情况
            2.1.3 PPV4感染情况
            2.1.4 PBo-likeV感染情况
            2.1.5 PBoV感染情况
        2.2 测序结果
            2.2.1 PPV2变异程度
            2.2.2 PPV3变异程度
            2.2.3 PPV4变异程度
            2.2.4 PBo-likeV变异程度
            2.2.5 PBoV变异程度
    3 讨论
    参考文献
    ABSTRACT
第三章 猪细小病毒3型VP2蛋白的原核表达与免疫特性研究
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 主要试剂
        1.2 方法
            1.2.1 重组质粒的构建
            1.2.2 重组质粒的鉴定
            1.2.3 重组质粒的转化
            1.2.4 重组蛋白的表达
            1.2.5 重组蛋白的纯化
            1.2.6 小鼠免疫试验
    2 试验结果
        2.1 重组质粒的鉴定
            2.1.1 目的基因的扩增
            2.1.2 重组质粒的PCR鉴定
            2.1.3 重组质粒的酶切鉴定
        2.2 重组蛋白的表达
            2.2.1 重组蛋白的表达鉴定
            2.2.2 重组蛋白表达条件的优化
        2.3 重组蛋白的纯化
        2.4 抗体效价测定
    3 讨论
    参考文献
    ABSTRACT
第四章 猪细小病毒3型VP2蛋白的真核表达与免疫特性研究
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 主要试剂
        1.2 方法
            1.2.1 重组质粒的构建
            1.2.2 重组质粒的鉴定
            1.2.3 重组Bacmid的构建与鉴定
            1.2.4 重组杆状病毒的获得与扩增
            1.2.5 重组蛋白在Sf9细胞中的表达和鉴定
            1.2.6 重组蛋白的纯化
            1.2.7 免疫特性的研究
    2 试验结果
        2.1 重组质粒的鉴定
            2.1.1 重组质粒的PCR鉴定
            2.1.2 重组质粒的酶切鉴定
        2.2 重组Bacmid的PCR鉴定
        2.3 重组蛋白的表达与鉴定
        2.4 重组蛋白的纯化
        2.5 真核蛋白免疫原性的研究
            2.5.1 抗体效价的测定
            2.5.2 细胞因子浓度的测定
    3 讨论
    参考文献
    ABSTRACT
第五章 猪细小病毒3型间接ELISA抗体检测方法的建立和应用
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 抗原与抗体
            1.1.2 试剂与仪器
        1.2 间接ELISA方法的建立及条件优化
            1.2.1 标准阴阳性血清的筛选
            1.2.2 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的筛选
            1.2.3 最佳抗原包被条件的筛选
            1.2.4 最佳封闭液的筛选
            1.2.5 最佳封闭条件的筛选
            1.2.6 最佳一抗作用条件的筛选
            1.2.7 二抗最佳作用浓度的筛选
            1.2.8 二抗最佳作用条件的筛选
            1.2.9 最佳底物显色条件的筛选
            1.2.10 临界值的确定
        1.3 特异性试验
        1.4 重复性试验
            1.4.1 批内重复性试验
            1.4.2 批间重复性试验
        1.5 临床样品的检测
    2 结果
        2.1 间接ELISA最佳反应条件的确定
            2.1.1 最佳抗原包被浓度和待检血清最佳稀释度的确定
            2.1.2 抗原最佳包被条件的确定
            2.1.3 最佳封闭液的确定
            2.1.4 最佳封闭条件的确定
            2.1.5 最佳血清作用条件的确定
            2.1.6 HRP-SPA最佳稀释度的确定
            2.1.7 HRP-SPA最佳反应条件的确定
            2.1.8 TMB最佳显色条件的确定
            2.1.9 临界值的确定
        2.2 特异性试验
        2.3 重复性试验
            2.3.1 批内重复性试验
            2.3.2 批间重复性试验
        2.4 临床血清样品的检测
    3 讨论
    参考文献
    ABSTRACT
全文总结
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]新型猪细小病毒感染的分子流行病学调查[J]. 崔鹏超,何玉,刘捷,李玉峰,姜平,王先炜.  畜牧与兽医. 2014(04)
[2]猪博卡病毒PCR检测方法的建立及其初步流行病学调查[J]. 胡军勇,张倩,王丹丹,涂志勤,胡睿铭,汤细彪,吴斌.  中国预防兽医学报. 2012(08)
[3]牛副流感病毒3型HN基因原核表达及间接ELISA方法建立[J]. 周玉龙,任亚超,朱战波,侯喜林,王密,耿晶,朴范泽,李森.  病毒学报. 2012(01)
[4]猪支原体重组MSG1蛋白间接ELISA检测方法的建立[J]. 张长莹,李玉峰,华荣蓉,刘捷,姜平.  畜牧与兽医. 2011(02)
[5]猪博卡病毒PCR检测方法的建立及其应用[J]. 翟少伦,岳城,韦祖樟,冉多良,龙进学,蔺涛,邓宇,孙利厂,黄律,袁世山.  中国动物传染病学报. 2010(02)
[6]间接ELISA检测犬细小病毒病血清抗体方法的建立[J]. 刘剑郁,李晓成,陈德坤,张燕霞,陈杰,吴发兴.  中国动物检疫. 2006(03)
[7]猪细小病毒SC-1株VP2基因的克隆及生物信息学分析[J]. 罗燕,郭万柱,刘艳丽,殷华平.  动物医学进展. 2005(08)
[8]Baculovirus as a highly efficient expression vector in insect and mammalian cells[J]. Yu-chen HU~1 Department of Chemical Engineering,National Tsing Hua University,Hsinchu,Taiwan,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2005(04)
[9]猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用[J]. 赵俊龙,陈焕春,吕建强,邱德新,周复春.  中国兽医学报. 2003(02)
[10]猪细小病毒VP2蛋白在昆虫细胞中的表达及其特性[J]. 吕建强,陈焕春,赵俊龙,肖少波,王革非.  微生物学报. 2002(06)

博士论文
[1]猪细小病毒非结构蛋白NS1和结构蛋白VP2的研究[D]. 卿柳庭.华中农业大学 2005
[2]猪细小病毒基因组序列测定及结构蛋白基因的克隆、表达与基因免疫研究[D]. 赵俊龙.华中农业大学 2001



本文编号：3052717