EGCG对犬肝细胞脂代谢的调节作用研究
发布时间：2021-02-26 16:43
表没食子儿茶素没食子酸酯（Epi-gallocatechin-3-gallate,EGCG）,是茶多酚中主要的生物活性成分,具有抗氧化、抗炎、抑菌、清除体内自由基、降血脂、降血压和降血糖、预防心脑血管疾病等作用。高脂血症是目前宠物犬常见的营养代谢性疾病之一,给犬的健康带来巨大的威胁。本试验通过体外培养犬肝细胞,添加不同浓度的EGCG作用于犬肝细胞后,研究EGCG对AMPKα信号转导通路中相关蛋白和基因表达的影响,初步阐明EGCG降低犬肝细胞脂合成,增加脂氧化的作用机制。选取健康幼犬,通过两步灌流法分离培养犬原代肝细胞,添加不同浓度的EGCG（0、0.01、0.1和1.0μM EGCG）,作用不同时间后,确定EGCG最佳添加浓度和作用时间。犬原代肝细胞培养48 h后,添加不同浓度的EGCG和AMPKα的抑制剂BML-275（0、0.01、0.1及1.0μM EGCG、10μM BML-275、0.1μM EGCG+10μM BML-275）作用于犬肝细胞。运用倒置显微镜和透射电镜观察犬肝细胞的形态学变化;采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测PPARα、SREBP-1c、ACO、C...
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
EGCG的基础结构
2 结果与分析2.1 犬原代肝细胞分离培养结果2.1.1 犬原代肝细胞分离培养过程本研究采用两步胶原酶灌流法分离培养犬原代肝细胞。具体步骤如图 2-1 所示，具体步骤陈述参照材料方法。通过细胞计数，将细胞密度调整为 2×106cells/mL，以胎盘蓝拒染试验检测犬肝细胞存活率为 85%-90%左右，在条件为37 ℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
2.1.2 原代肝细胞生长状态观察如图 2-2 所示，倒置显微镜下观察肝细胞从接种到贴壁生长的具体变化，4 h后换生长培养基，接种 24 h 后，肝细胞贴壁生长，细胞边缘呈圆球形或者多边形，细胞贴附于细胞板上(图 2C)；培养 48 h 后，细胞贴壁牢固，长出伪足，呈多边形，胞浆内容物含有丰富的糖原，细胞排布均匀，细胞间隙明显，细胞生长状态良好(图 2D)。细胞从 4-192 h，本试验多次培养结果得知肝细胞在培养 48 h后细胞活性最好，用于后续添加刺激因子试验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]EGCG抗糖尿病心肌病小鼠心肌组织中氧化应激损伤作用机制的探讨[J]. 任仲坤,张志毕,刘艳红,张荣平,杨晖. 中国实验方剂学杂志. 2018(03)
[2]降脂茶辅助治疗血脂异常的临床研究进展[J]. 王晶,李冰,奚希,林殷,张聪,张玉苹,潘诗霞,廖艳. 中医药导报. 2017(20)
[3]EGCG防治糖尿病作用及机制研究进展[J]. 张灵枝,邓旭铭,潘顺顺,赖幸菲,孙世利,陈文品. 华南农业大学学报. 2017(05)
[4]表没食子儿茶素没食子酸酯抗肿瘤作用的研究进展[J]. 罗可望,龙颖妍,黄卫人. 医学综述. 2017(10)
[5]AMPK细胞能量感受器研究进展[J]. 孙维琦,王路红,李环. 北华大学学报(自然科学版). 2017(02)
[6]EGCG功能活性与制备技术研究进展[J]. 甘正刚,张胜虎. 农技服务. 2017(01)
[7]AMPK在能量代谢中的作用研究[J]. 龙腾腾,郭春丽,刘潇,王玉霞,徐慧,岳旺. 黑龙江畜牧兽医. 2016(15)
[8]腺苷酸活化蛋白激酶信号转导通路在奶牛酮病发生和发展过程中的调控机制[J]. 董记红,吴金节,王希春,冯士彬,丁红研,刘国文,李心慰,李小兵,王哲,李玉. 动物营养学报. 2016(04)
[9]茶多酚防治2型糖尿病的分子机理研究进展[J]. 高媛圆,毛立民,徐平,王岳飞. 茶叶科学. 2015(03)
[10]自拟调脂茶治疗2型糖尿病合并高脂血症[J]. 郑海燕,廖勇敢. 中国老年保健医学. 2013(05)
博士论文
[1]EGCG实验条件的探索以及EGCG对胰岛素受体的激活作用[D]. 宋爽.吉林大学 2013
[2]AMP激活的蛋白质激酶（AMPK）调控机制的研究[D]. 陈雷.清华大学 2010
硕士论文
[1]EGCG减脂作用及其机理研究[D]. 李芳.吉林大学 2017
[2]有氧运动对增龄大鼠骨骼肌AMPK通路的影响及其作用机制[D]. 朱文.湖南师范大学 2015
[3]虫草素调血脂作用与上调AMPK蛋白表达作用机制研究[D]. 苏岩.哈尔滨商业大学 2013
[4]表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对小鼠卵母细胞体外成熟，受精及胚胎发育的影响[D]. 谷亚轻.扬州大学 2008
本文编号：3052870
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
EGCG的基础结构
2 结果与分析2.1 犬原代肝细胞分离培养结果2.1.1 犬原代肝细胞分离培养过程本研究采用两步胶原酶灌流法分离培养犬原代肝细胞。具体步骤如图 2-1 所示，具体步骤陈述参照材料方法。通过细胞计数，将细胞密度调整为 2×106cells/mL，以胎盘蓝拒染试验检测犬肝细胞存活率为 85%-90%左右，在条件为37 ℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
2.1.2 原代肝细胞生长状态观察如图 2-2 所示，倒置显微镜下观察肝细胞从接种到贴壁生长的具体变化，4 h后换生长培养基，接种 24 h 后，肝细胞贴壁生长，细胞边缘呈圆球形或者多边形，细胞贴附于细胞板上(图 2C)；培养 48 h 后，细胞贴壁牢固，长出伪足，呈多边形，胞浆内容物含有丰富的糖原，细胞排布均匀，细胞间隙明显，细胞生长状态良好(图 2D)。细胞从 4-192 h，本试验多次培养结果得知肝细胞在培养 48 h后细胞活性最好，用于后续添加刺激因子试验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]EGCG抗糖尿病心肌病小鼠心肌组织中氧化应激损伤作用机制的探讨[J]. 任仲坤,张志毕,刘艳红,张荣平,杨晖. 中国实验方剂学杂志. 2018(03)
[2]降脂茶辅助治疗血脂异常的临床研究进展[J]. 王晶,李冰,奚希,林殷,张聪,张玉苹,潘诗霞,廖艳. 中医药导报. 2017(20)
[3]EGCG防治糖尿病作用及机制研究进展[J]. 张灵枝,邓旭铭,潘顺顺,赖幸菲,孙世利,陈文品. 华南农业大学学报. 2017(05)
[4]表没食子儿茶素没食子酸酯抗肿瘤作用的研究进展[J]. 罗可望,龙颖妍,黄卫人. 医学综述. 2017(10)
[5]AMPK细胞能量感受器研究进展[J]. 孙维琦,王路红,李环. 北华大学学报(自然科学版). 2017(02)
[6]EGCG功能活性与制备技术研究进展[J]. 甘正刚,张胜虎. 农技服务. 2017(01)
[7]AMPK在能量代谢中的作用研究[J]. 龙腾腾,郭春丽,刘潇,王玉霞,徐慧,岳旺. 黑龙江畜牧兽医. 2016(15)
[8]腺苷酸活化蛋白激酶信号转导通路在奶牛酮病发生和发展过程中的调控机制[J]. 董记红,吴金节,王希春,冯士彬,丁红研,刘国文,李心慰,李小兵,王哲,李玉. 动物营养学报. 2016(04)
[9]茶多酚防治2型糖尿病的分子机理研究进展[J]. 高媛圆,毛立民,徐平,王岳飞. 茶叶科学. 2015(03)
[10]自拟调脂茶治疗2型糖尿病合并高脂血症[J]. 郑海燕,廖勇敢. 中国老年保健医学. 2013(05)
博士论文
[1]EGCG实验条件的探索以及EGCG对胰岛素受体的激活作用[D]. 宋爽.吉林大学 2013
[2]AMP激活的蛋白质激酶（AMPK）调控机制的研究[D]. 陈雷.清华大学 2010
硕士论文
[1]EGCG减脂作用及其机理研究[D]. 李芳.吉林大学 2017
[2]有氧运动对增龄大鼠骨骼肌AMPK通路的影响及其作用机制[D]. 朱文.湖南师范大学 2015
[3]虫草素调血脂作用与上调AMPK蛋白表达作用机制研究[D]. 苏岩.哈尔滨商业大学 2013
[4]表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对小鼠卵母细胞体外成熟，受精及胚胎发育的影响[D]. 谷亚轻.扬州大学 2008
本文编号：3052870
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3052870.html
