前噬菌体对禽致病性大肠杆菌DE205B环境耐受力的影响

发布时间：2021-03-01 04:33

　　禽致病性大肠杆菌（avian pathogenic Escherichia coli,APEC）DE205B基因组中存在前噬菌体phiv205-1。本文利用RED同源重组技术构建前噬菌体phiv205-1缺失株,采用倍比稀释的方法检测野生株DE205B和前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1在酸、盐和氧化应激等不利条件下的存活率,分析前噬菌体对APEC环境适应力的影响。结果显示,与野生株相比,前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1酸性耐受力下降了56.62%（P<0.001）,在氧化应激条件下的存活率下降了91.78%（P<0.001）。为研究前噬菌体phiv205-1中影响宿主细菌对酸和氧化应激耐受的基因,采用real-time PCR检测了部分phiv205-1基因在氧化应激环境中的表达量,结果显示基因2971、2989、3327及Erf的表达量显著升高。进一步构建了Δ2971、Δ2989、Δ3327及ΔErf的单基因缺失株,环境耐受实验结果显示,与野生株相比,单基因缺失株Δ2971、Δ2989、Δ3327及ΔErf在H₂O

【文章来源】：畜牧与兽医. 2020,52(04)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株、质粒与引物
    1.2 主要试剂和培养基
    1.3 前噬菌体phiv205-1缺失株及单基因缺失株的构建
    1.4 耐酸试验
    1.5 耐渗透压试验
    1.6 耐氧化应激试验
    1.7 实时荧光定量PCR
    1.8 Δ2971、Δ2989、Δ3327及ΔErf缺失株的氧化应激相对存活率测定
    1.9 统计相对存活率
2 结果
    2.1 前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1的构建
    2.2 前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1对酸的耐受性
    2.3 前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1在高渗状态下的存活率
    2.4 前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1在氧化应激状态下的存活率
    2.5 基因2971、2989、3327及Erf在氧化应激条件下的转录水平
    2.6 Δ2971、Δ2989及ΔErf单基因缺失株在氧化应激状态下的存活率显著下降
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]禽致病性大肠杆菌O1、O2、O78血清型三重PCR检测方法的建立[J]. 王娟芳,戴建君,姜敏,任建鸾,李德志,张鹏,孙建和,汤芳.  南京农业大学学报. 2020(01)
[2]大肠杆菌抗酸碱环境的分子机制[J]. 乔佳鑫,范丽菲,姚远.  中国生物化学与分子生物学报. 2018(01)
[3]auf基因对禽致病性大肠杆菌鸭源株的细胞黏附及动物致病性的影响[J]. 王颢锦,汤芳,诸葛祥凯,胡林,陈玲,李亚芯,李德志,戴建君.  南京农业大学学报. 2015(04)
[4]禽致病性大肠杆菌研究进展[J]. 王少辉,戴建君,陆承平.  河北科技师范学院学报. 2010(04)

博士论文
[1]大肠杆菌快速适应氧化应激中tRNA介导的翻译调控机制研究[D]. 钟嘉泳.暨南大学 2018

硕士论文
[1]禽致病性大肠杆菌ArcA基因的缺失及其致病机理的研究[D]. 安春霞.南京农业大学 2015
[2]Stx噬菌体的溶原对大肠杆菌MG1655耐酸性影响的研究[D]. 李慧琴.南京农业大学 2012



本文编号：3056944