食淀粉乳杆菌代谢产物调节细胞完整性及屏障功能的抗病毒作用

发布时间：2021-03-02 02:49

　　本试验的目的是研究食淀粉乳杆菌（Lactobacillus amylovorus）代谢产物中起抑制致病菌和抗猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）的成分是否具有一致作用,同时探索TGEV感染猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）时,食淀粉乳杆菌代谢产物对细胞完整性及屏障功能的影响,为抑菌与抗病毒的益生菌制剂的研制提供理论依据。为研究食淀粉乳杆菌代谢产物中起抑菌和抗病毒的成分是否具有一致作用,采用酸、过氧化氢酶及蛋白酶等处理食淀粉乳杆菌培养上清液,并利用琼脂扩散法（牛津杯法）和MTT法分别检测了食淀粉乳杆菌培养上清液对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活力及对TGEV感染IPEC-J2细胞的抗病毒活性。结果显示,经酸、过氧化氢酶及蛋白酶处理后的食淀粉乳杆菌培养上清液的抑菌效果和抗病毒活性均有不同程度的降低,经蛋白酶K处理后的食淀粉乳杆菌培养上清液的抑菌效果和抗病毒活性均明显减弱（P<0.05）,表明培养上清液中对蛋白酶K敏感的物质抑菌与抗病毒能力具有一致性。为研究食淀粉乳杆菌代谢产物对细胞完整性的影响,先将代谢产物与病毒共同孵育后感染IPEC-J2细胞,试验组为代谢产物预处理病毒,同时设立... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 益生菌概述
        1.1.1 益生菌抗病毒和抑菌研究进展
        1.1.2 益生菌肠道功能研究进展
        1.1.3 食淀粉乳杆菌概述
    1.2 TGEV的研究现状
        1.2.1 TGEV的感染机制
    1.3 肠上皮细胞
        1.3.1 IPEC-J2细胞概述
        1.3.2 细胞完整性的研究进展
        1.3.3 肠上皮细胞屏障功能
        1.3.4 肠上皮细胞与病毒的关系
        1.3.5 肠上皮细胞与肠道益生菌的关系
    1.4 目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、细胞和病毒
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要溶液及配制方法
        2.1.4 主要仪器设备
    2.2 试验方法
        2.2.1 食淀粉乳杆菌代谢产物抑菌与抗病毒的比较研究
        2.2.2 食淀粉乳杆菌代谢产物对IPEC-J2细胞完整性的影响
        2.2.3 食淀粉乳杆菌代谢产物对IPEC-J2细胞屏障功能的影响
    2.3 数据处理
3 结果与分析
    3.1 食淀粉乳杆菌代谢产物抑菌与抗病毒的比较研究结果
        3.1.1 牛津杯法抑菌试验结果
        3.1.2 TGEV滴度测定结果
        3.1.3 细胞毒性试验结果
        3.1.4 MTT法抗病毒试验结果
    3.2 食淀粉乳杆菌代谢产物对IPEC-J2细胞完整性的影响
        3.2.1 食淀粉乳杆菌代谢产物对IPEC-J2细胞形态的影响
        3.2.2 食淀粉乳杆菌代谢产物对IPEC-J2细胞增殖的影响
        3.2.3 食淀粉乳杆菌代谢产物对IPEC-J2细胞分化的影响
        3.2.4 食淀粉乳杆菌代谢产物对IPEC-J2细胞活性的影响
    3.3 食淀粉乳杆菌代谢产物对IPEC-J2细胞屏障功能的影响
        3.3.1 目的基因的PCR鉴定
        3.5.2 标准质粒的构建
        3.5.3 IPEC-J2细胞MUC1、CLDN-3及KRT8 mRNA荧光定量PCR检测方法的建立
        3.5.4 食淀粉乳杆菌代谢产物对IPEC-J2细胞屏障功能的影响
4 讨论
    4.1 食淀粉乳杆菌代谢产物抑菌与抗病毒的比较分析
    4.2 食淀粉乳杆菌代谢产物调节IPEC-J2细胞完整性的抗病毒作用
    4.3 食淀粉乳杆菌代谢产物对IPEC-J2细胞屏障功能的影响
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]重组干酪乳杆菌代谢产物抑菌效果的研究[J]. 谭君,侯喜林,余丽芸,李剑华,王桂华,曹宁.  黑龙江八一农垦大学学报. 2012(04)
[2]百饲康(复合微生物制剂)对仔猪生长性能的影响[J]. 戴青,李向东,付中明.  中国动物保健. 2011(01)
[3]肠球菌E4及其抑菌产物特性的研究[J]. 张玲玲,张明.  中国微生态学杂志. 2009(06)
[4]乳酸菌代谢产物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑制作用的研究[J]. 李南薇,李宁.  中国酿造. 2009(05)
[5]益生菌、益生元及合生素的作用机制和相互关系[J]. 孙鸣,潘宝海,陈伟兴,孙冬岩.  饲料研究. 2008(04)
[6]双歧杆菌对轮状病毒感染肠上皮细胞IL-8和TNF-α分泌的影响[J]. 黄鸿眉,程茜.  第四军医大学学报. 2007(22)
[7]Lactobacillus plantarum inhibits epithelial barrier dysfunction and interleukin-8 secretion induced by tumor necrosis factor-a[J]. Jae Sung Ko,Hye Ran Yang,Ju Young Chang,Jeong Kee Seo.  World Journal of Gastroenterology. 2007(13)
[8]重组人BMP-2在烟草不同组织中的表达（英文）[J]. 高原,索广力,韩津,何正权,姚伟,戴建武.  遗传学报. 2006(01)
[9]猪源乳酸菌产乳酸及其抑菌特性研究[J]. 吴惠芬,毛胜勇,姚文,朱伟云.  微生物学通报. 2005(01)
[10]乳酸菌对金黄色葡萄球菌生物拮抗作用的初步研究[J]. 王小红,谢笔钧,史贤明,余佳.  食品工业科技. 2005(01)

硕士论文
[1]乳酸菌及其培养液对肉鸡生产性能、肠道菌群及肠道结构的影响[D]. 马治宇.西北农林科技大学 2008



本文编号：3058454