基于HCR技术建立沙门氏菌可视化检测方法的研究
发布时间：2021-03-04 05:51
食源性致病菌作为主要影响因素引起的一系列食物中毒事件,严重的影响了我国的食品安全。沙门氏菌是较为常见的食源性致病细菌之一,广泛存在于未经消毒的蔬菜、水果、牛奶等。沙门氏菌既能造成家畜、家禽的死亡,作为传染源又长期存于禽畜产品中,严重的威胁人类的健康及食品安全。然而,一般常见的检测方法存在操作繁琐、耗时长、需要大型的操作仪器,花费昂贵以及检测的灵敏性低,特异性不稳定等一系列问题。因此,为了改善一般常见的检测方法的不足,建立一种快速、灵敏、便携的沙门氏菌等食源性致病菌的检测方法,对于维护我国食品安全尤为重要。核酸夹心ELISA对沙门氏菌可视化检测方法的建立。试验以链霉亲和素标记的微孔板为反应平台,根据检测靶标沙门氏菌标准序列设计标记biotin的抓取探针CP和标记FITC的检测探针DP,通过生物素与链霉亲和素的特异性结合,使得抓取探针CP固定在微孔板上,抓取探针CP将靶标固定到微孔板上,标记FITC的检测探针DP与靶标结合并间接偶联于微孔板上,anti-FITC-HRP与检测探针DP标记的FITC结合,HRP催化底物TMB显色的作用达到定量监测靶标的作用。实验中对反应条件进行优化:确定抓取...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
核酸夹心ELISA对沙门氏菌检测方法的原理图
每个微孔中的颜色反应，及酶标仪的检测数据分析，判断最终.4 特异性的检测本研究设计合成了与沙门氏菌特异核酸区别的大肠杆菌 O157、金黄色葡萄球菌、弗氏柠檬酸杆菌、单增李斯特菌的特异核，用于检测本试验方法的特异性。 实验结果.1 抓取探针最佳孵育时间的检测结果孵育时间的长短直接影响生物素与固相 96 孔板上链霉亲和素条件下，孵育时间过短，抓取探针不能够完全与反应板结合，的信号值会相对较低。沙门氏菌特异核酸的浓度为 10 nmol/L 0.1 μmol/L，抓取探针的孵育时间一次是 0 h，1 h，2 h，3 1.2 中的线性分析所示，孵育时间为 2 h 时，反应吸光度值最。随着孵育时间的增加，反应信号值有所下降，故 2 h 为最佳时间。
图 1.3 Anti-FITC-HRP 孵育时间对反应效果的影响g.1.3 The efficiency of anti-FITC-HRP incubating time检验一种检测方法的重要判定条件。将 0.5 μmol/L 的 CP 加到；分别将沙门氏菌等几种食源性致病菌的特异核酸序列稀释成们分别与 DP (0.5 μmol/L)的杂交，混合液孵育 30 min；加的 anti-FITC-HRP 反应 2 h，最后加入了 TMB 底物，进行结果的 1.4 中的检测结果可知，相对于其他几种食源性致病菌，沙门氏明显，且表示出了较强的信号值。其他几种菌的显色结果几乎没几乎没有吸光值变化，所以该检测方法有较好的特异性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PCR鉴定沙门氏菌血清分型方法的建立与应用[J]. 赵建梅,李月华,宋传周,赵格,曲志娜. 中国动物检疫. 2018(01)
[2]基于表面增强拉曼技术快速检测5种食源性致病菌[J]. 高玮村,李博,王习文,李乾学,李楠,李志萍,夏志平. 吉林农业大学学报. 2017(06)
[3]2015-2016年陕西汉中市食品中沙门氏菌污染状况调查分析[J]. 张志强,陈雅丽,刘红丽,高洁,张木林,李芃芃. 医学动物防制. 2018(01)
[4]16SrRNA序列分析在沙门氏菌鉴定分型中的应用[J]. 苏远科,王志宏,郭晓燕,吕斐,崔常勇. 食品安全质量检测学报. 2017(11)
[5]基于纳米探针检测食源性肠炎沙门氏菌技术初探[J]. 刘慧玲,涂晓波,吕敬章,黄欣迪,吴绍精,洪小柳,葛丽雅,黄李华,张恒. 食品安全质量检测学报. 2017(11)
[6]多重实时荧光定量PCR快速检测婴幼儿奶粉中沙门氏菌、克罗诺杆菌和金黄色葡萄球菌[J]. 林碧莲,柯振华,陈筱婷,许任伟. 食品安全质量检测学报. 2017(11)
[7]沙门氏菌的实验室检验技术[J]. 杨玲,方新元,贾立云,蔡扩军,徐敏,蒲敬伟. 中国畜牧兽医文摘. 2017(11)
[8]基于复合纳米材料和酶切信号放大电化学适体传感器检测沙门氏菌[J]. 徐连应,王毕妮,张富新. 中国农业科学. 2017(21)
[9]442件食品安全风险监测样品微生物检测结果分析[J]. 聂玉敏,丁启能,韩英,段云权,王晓平. 河南预防医学杂志. 2017(11)
[10]新型碳氢制冷剂HCR22在R600a食品制冷系统的应用[J]. 刘金光,熊旭波,王世清,栾明川,张岩,姜文利. 食品与机械. 2017(01)
博士论文
[1]沙门氏菌mcr-1基因传播机制与食源性耐药致病菌检测芯片研究[D]. 崔明全.中国农业大学 2017
[2]基于固相增菌法和纳米生物传感技术的沙门氏菌可视化高效检测技术的研究[D]. 唐锋.华中科技大学 2016
[3]沙门氏菌及其致病性血清型分子检测技术研究及在食品中的应用[D]. 翟立公.南京农业大学 2015
[4]肠炎沙门氏菌的分离鉴定与特异性检测方法的建立[D]. 陆广富.扬州大学 2010
硕士论文
[1]基于限制性核酸内切酶放大技术的沙门氏菌检测生物传感器[D]. 邱婷婷.济南大学 2016
[2]基于LCR、PCR核酸试纸条检测食源性致病菌方法的研究[D]. 侯巧华.吉林农业大学 2016
[3]沙门氏菌的分离鉴定及PCR快速分型的研究[D]. 游勇来.华南理工大学 2013
[4]纳米材料及生物活性酶在生物传感器中的应用[D]. 张莉.湖南大学 2011
本文编号：3062677
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
核酸夹心ELISA对沙门氏菌检测方法的原理图
每个微孔中的颜色反应，及酶标仪的检测数据分析，判断最终.4 特异性的检测本研究设计合成了与沙门氏菌特异核酸区别的大肠杆菌 O157、金黄色葡萄球菌、弗氏柠檬酸杆菌、单增李斯特菌的特异核，用于检测本试验方法的特异性。 实验结果.1 抓取探针最佳孵育时间的检测结果孵育时间的长短直接影响生物素与固相 96 孔板上链霉亲和素条件下，孵育时间过短，抓取探针不能够完全与反应板结合，的信号值会相对较低。沙门氏菌特异核酸的浓度为 10 nmol/L 0.1 μmol/L，抓取探针的孵育时间一次是 0 h，1 h，2 h，3 1.2 中的线性分析所示，孵育时间为 2 h 时，反应吸光度值最。随着孵育时间的增加，反应信号值有所下降，故 2 h 为最佳时间。
图 1.3 Anti-FITC-HRP 孵育时间对反应效果的影响g.1.3 The efficiency of anti-FITC-HRP incubating time检验一种检测方法的重要判定条件。将 0.5 μmol/L 的 CP 加到；分别将沙门氏菌等几种食源性致病菌的特异核酸序列稀释成们分别与 DP (0.5 μmol/L)的杂交，混合液孵育 30 min；加的 anti-FITC-HRP 反应 2 h，最后加入了 TMB 底物，进行结果的 1.4 中的检测结果可知，相对于其他几种食源性致病菌，沙门氏明显，且表示出了较强的信号值。其他几种菌的显色结果几乎没几乎没有吸光值变化，所以该检测方法有较好的特异性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PCR鉴定沙门氏菌血清分型方法的建立与应用[J]. 赵建梅,李月华,宋传周,赵格,曲志娜. 中国动物检疫. 2018(01)
[2]基于表面增强拉曼技术快速检测5种食源性致病菌[J]. 高玮村,李博,王习文,李乾学,李楠,李志萍,夏志平. 吉林农业大学学报. 2017(06)
[3]2015-2016年陕西汉中市食品中沙门氏菌污染状况调查分析[J]. 张志强,陈雅丽,刘红丽,高洁,张木林,李芃芃. 医学动物防制. 2018(01)
[4]16SrRNA序列分析在沙门氏菌鉴定分型中的应用[J]. 苏远科,王志宏,郭晓燕,吕斐,崔常勇. 食品安全质量检测学报. 2017(11)
[5]基于纳米探针检测食源性肠炎沙门氏菌技术初探[J]. 刘慧玲,涂晓波,吕敬章,黄欣迪,吴绍精,洪小柳,葛丽雅,黄李华,张恒. 食品安全质量检测学报. 2017(11)
[6]多重实时荧光定量PCR快速检测婴幼儿奶粉中沙门氏菌、克罗诺杆菌和金黄色葡萄球菌[J]. 林碧莲,柯振华,陈筱婷,许任伟. 食品安全质量检测学报. 2017(11)
[7]沙门氏菌的实验室检验技术[J]. 杨玲,方新元,贾立云,蔡扩军,徐敏,蒲敬伟. 中国畜牧兽医文摘. 2017(11)
[8]基于复合纳米材料和酶切信号放大电化学适体传感器检测沙门氏菌[J]. 徐连应,王毕妮,张富新. 中国农业科学. 2017(21)
[9]442件食品安全风险监测样品微生物检测结果分析[J]. 聂玉敏,丁启能,韩英,段云权,王晓平. 河南预防医学杂志. 2017(11)
[10]新型碳氢制冷剂HCR22在R600a食品制冷系统的应用[J]. 刘金光,熊旭波,王世清,栾明川,张岩,姜文利. 食品与机械. 2017(01)
博士论文
[1]沙门氏菌mcr-1基因传播机制与食源性耐药致病菌检测芯片研究[D]. 崔明全.中国农业大学 2017
[2]基于固相增菌法和纳米生物传感技术的沙门氏菌可视化高效检测技术的研究[D]. 唐锋.华中科技大学 2016
[3]沙门氏菌及其致病性血清型分子检测技术研究及在食品中的应用[D]. 翟立公.南京农业大学 2015
[4]肠炎沙门氏菌的分离鉴定与特异性检测方法的建立[D]. 陆广富.扬州大学 2010
硕士论文
[1]基于限制性核酸内切酶放大技术的沙门氏菌检测生物传感器[D]. 邱婷婷.济南大学 2016
[2]基于LCR、PCR核酸试纸条检测食源性致病菌方法的研究[D]. 侯巧华.吉林农业大学 2016
[3]沙门氏菌的分离鉴定及PCR快速分型的研究[D]. 游勇来.华南理工大学 2013
[4]纳米材料及生物活性酶在生物传感器中的应用[D]. 张莉.湖南大学 2011
本文编号：3062677
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