鸡肝脏和骨骼肌miRNA表达和功能研究

发布时间：2021-03-04 13:34

　　肝脏代谢和骨骼肌发育是鸡十分重要的两个生物过程,microRNA（miRNA）是一类小的非编码的约22个核苷酸长度的单链RNA分子,是基因表达的重要调控因子,其对肝脏代谢和骨骼肌发育发挥了重要的作用。本研究以鸡肝脏和骨骼肌miRNA为研究对象,对其进行了一系列的表达和功能研究,主要研究结果如下：（1）运用实时荧光定量PCR检测miR-122的组织表达,发现其在肝脏中表达量最高。运用靶基因预测软件预测出364个miR-122的靶基因,挑选其中与肝脏代谢相关的预测靶基因P4HA1、PKM2、TGF-β3、FABP5和ARCN1。实时荧光定量PCR显示miR-122在肝脏生长发育过程中上调,在鸡肝细胞离体培养过程中下调,5个基因在肝脏生长发育过程中表达不受影响,P4HA1、TGF-β3和ARCN1在肝细胞离体过程中下调,而FABP5在离体和培养过程中分别下调和上调,PKM2不受影响。体外双荧光素酶报告系统和靶位点突变实验证明5个基因及预测靶位点分别是miR-122的靶基因和靶位点,通过鸡细胞系过表达miR-122证明其对TGF-β3的调控在mRNA水平,而对P4HA1、PKM2和ARCN1的... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：144 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
    1.1 肝脏和肌肉中miRNA研究进展
        1.1.1 miRNA的生物合成、作用机制和靶基因鉴定
        1.1.2 miR-122
        1.1.3 miR-126
        1.1.4 miR-1a
        1.1.5 miR-133a
    1.2 畜禽miRNA研究进展
        1.2.1 牛miRNA
        1.2.2 鸡miRNA
        1.2.3 猪miRNA
        1.2.4 羊miRNA
        1.2.5 畜禽miRNA研究展望
    1.3 miRNA相关研究技术
        1.3.1 实时荧光定量PCR
        1.3.2 miRNA靶基因预测
        1.3.3 miRNA靶基因验证
        1.3.4 高通量测序
        1.3.5 RNA干扰
    1.4 本研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验样品
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 实验引物及核酸
    2.2 实验方法
        2.2.1 miRNA及基因表达分析
        2.2.2 miRNA靶基因验证
        2.2.3 抑制miR-122的原代鸡肝细胞基因分析
        2.2.4 TGF-β3 RNAi
        2.2.5 GH处理的原代鸡肝细胞miRNA测序
        2.2.6 数据统计分析
3 结果与分析
    3.1 鸡miR-122功能研究
        3.1.0 miR-122组织表达特征
        3.1.1 miR-122靶基因预测
        3.1.2 miR-122及靶基因在不同生长发育时期鸡肝脏中表达特征
        3.1.3 miR-122及靶基因在原代鸡肝细胞中表达特征
        3.1.4 miR-122靶基因验证
        3.1.5 抑制miR-122的原代鸡肝细胞基因表达研究
        3.1.6 干扰TGF-β3的原代鸡肝细胞基因表达研究
    3.2 鸡miR-126功能研究
        3.2.1 miR-126组织表达特征
        3.2.2 miR-126靶基因预测
        3.2.3 miR-126及靶基因在不同生长发育时期鸡肝脏中表达特征
        3.2.4 miR-126及靶基因在原代鸡肝细胞中表达特征
        3.2.5 miR-126靶基因验证
    3.3 GH处理的原代鸡肝细胞miRNA表达研究
        3.3.1 GH处理原代鸡肝细胞后IGF-I表达升高
        3.3.2 GH处理的原代鸡肝细胞miRNA测序研究
    3.4 鸡miR-1a功能研究
        3.4.1 miR-1a组织表达特征
        3.4.2 miR-1a靶基因预测
        3.4.3 miR-1a及靶基因在不同生长发育时期鸡骨骼肌中表达特征
        3.4.4 miR-1a靶基因验证
    3.5 鸡miR-133a功能研究
        3.5.1 miR-133a组织表达特征
        3.5.2 miR-133a靶基因预测
        3.5.3 miR-133a及靶基因在不同生长发育时期鸡骨骼肌中表达特征
        3.5.4 miR-133a靶基因验证
4 讨论
    4.1 鸡miR-122功能研究
        4.1.1 miR-122组织表达特征
        4.1.2 miR-122靶基因预测
        4.1.3 miR-122及靶基因在不同生长发育时期鸡肝脏中表达特征
        4.1.4 miR-122及靶基因在原代鸡肝细胞中表达特征
        4.1.5 miR-122靶基因验证
        4.1.6 抑制miR-122的原代鸡肝细胞基因表达研究
        4.1.7 干扰TGF-β3的原代鸡肝细胞基因表达研究
    4.2 鸡miR-126功能研究
        4.2.1 miR-126组织表达特征
        4.2.2 miR-126靶基因预测
        4.2.3 miR-126及靶基因在不同生长发育时期鸡肝脏中表达特征
        4.2.4 miR-126及靶基因在原代鸡肝细胞中表达特征
        4.2.5 miR-126靶基因验证
    4.3 GH处理的原代鸡肝细胞miRNA表达研究
        4.3.1 cGH处理原代鸡肝细胞的效果
        4.3.2 GH处理的原代鸡肝细胞miRNA测序
    4.4 鸡miR-1a功能研究
        4.4.1 miR-1a组织表达特征
        4.4.2 miR-1a靶基因预测
        4.4.3 miR-1a及靶基因在不同生长发育时期鸡骨骼肌中表达特征
        4.4.4 miR-1a靶基因验证
    4.5 鸡miR-133a功能研究
        4.5.1 miR-133a组织表达特征
        4.5.2 miR-133a靶基因预测
        4.5.3 miR-133a及靶基因在不同生长发育时期鸡骨骼肌中表达特征
        4.5.4 miR-133a靶基因验证
5 结论
参考文献
附录
致谢
攻读博士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-133a在结肠癌组织中的表达[J]. 谢海涛.  广东医学. 2012(15)
[2]miR-133a在乳腺癌组织中的表达及其临床意义[J]. 项茹,吴正升,张晴,徐晓春,吴强.  安徽医科大学学报. 2011(02)
[3]microRNA在肌肉发育中的功能研究进展[J]. 王星果,郁建锋,顾志良.  生命科学. 2010(02)
[4]RNA干扰原理及其在肿瘤研究中的应用[J]. 黄坤寨,蔡建春.  医学综述. 2010(01)
[5]成年鸡肝细胞的分离与原代培养[J]. 陈黎龙,江青艳,朱晓彤,束刚,高淑静,高萍,张永亮.  江西农业大学学报. 2008(03)



本文编号：3063304