高褪黑素奶山羊乳腺反应器的建立及其通过自噬调节炎症的研究
发布时间：2021-03-06 23:29
褪黑素（N-乙酰基-5-甲氧基色胺,melatonin）主要是由动物松果体分泌的胺类激素,作用于全身的多个器官、组织、细胞,具有调节生物节律、改善睡眠,调节免疫系统、增强免疫力,调控生殖活动,抗氧化作用,抗衰老功能,抗肿瘤功能及清除体内自由基等多种生理和药理作用。芳烷基胺N-乙酰基转移酶（AANAT）是脊椎动物中褪黑素生物合成的主要限速酶。本研究利用转基因技术,将AANAT基因转入奶山羊的基因组中,一是生产全身过表达AANAT的奶山羊,并以此为模型研究内源高水平褪黑素对个体繁殖和免疫的影响;二是培育出乳腺特异性过表达AANAT的奶山羊,并生产高水平褪黑素羊奶。利用体细胞核移植转基因技术生产全身过表达AANAT的崂山奶山羊。首先成功构建pIRES2-EGFP-AANAT和CAG-AANAT全身表达载体。采集35d左右的崂山奶山羊胎儿,并利用组织块贴壁培养法分离培养崂山奶山羊胎儿成纤维细胞。利用电穿孔方法转染胎儿成纤维细胞,经G418及绿色荧光筛选后,挑出阳性单克隆细胞系,扩大培养并进行DNA水平的阳性鉴定,mRNA水平和蛋白水平的表达检测,选出3个细胞系作为核移植供体细胞。通过对33只奶...
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
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子和细胞功能。从此，显微注射法、精子载体法、１ＣＳＩ介导的转基因、原始生殖细胞（ＰＧＣｓ）??法、胚胎干细胞法、慢病毒载体法、转座子转基因法、ＲＮＡ干扰、体细胞核移植及其他基因编辑??方法已成功用于生产转基因小鼠和其他转基因动物物种（图４）。由于未解决的技术和安全问题，??各自都有其优点和缺点，需要进一步研究。目前原核胚显微注射和体细胞核移植是生产转基因家??畜常用的方法。??一？?＾Ｍａｌｅ??＾?Ｍｅｔａｐｈａｓｅ?ＩＩ?＼?＜?１??（ｆ?）?ｏｏｃｙｔｅｓ?Ｖ＇??Ａ）?Ｏｏｃｙｔｅ?Ｂ）?Ｚｙｇｏｔｅ?Ｖ?Ｃ）?Ｓｐｅｒｍ－ｍｅｄｉａｔｅｄ??－，?ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｇｅｎｅ?ｔｒａｎｓｆｅｒ??＾??＾?ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ?Ｖ－／?ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ??Ｖ?ＤＮＡ／ＲＮＡ／ｔｅｎｌｉｖｉｒａｌ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?心?；?＾??０—?＾０?ｃ）?Ｏ?Ｏ??Ｎｕｄｔｔａｒ?ａ）?ｂ）?Ｃ）?ｄ）??ｔｒａｎｓｆｅｒ?Ｐｒｏｎｕｃｔｏａｒ?Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ?ＰｏｒＭｅＨｉｎｅ?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ??（ＳＣＮＴ）?ｉｎ｜ｅｃｔｉｏｏ?ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?〇（?ｎｕｃｌｅａｓｅｓ??（ＤＮＡ．?ＴＳ．?ＲＮＡ．?（ＺＦＮ，?ＴＡＬＥＮ．?（Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ）?（２ＦＮ．?ＴＡｔＥＮ．??ＺＦＮ．?ＴＡＬＥＮ．?ＣＲＩＳＰＲ）?ＣＲＩＳＰＲ）??ＣＲＩＳＰＲ）???Ｉ?Ｉ?｜?｜???ｒ￣??／ｎ
【参考文献】：
期刊论文
[1]褪黑素生理活性及其作用机制的研究进展[J]. 张天宝,侯鹏高. 齐齐哈尔医学院学报. 2015(11)
[2]我国奶山羊产业发展现状、问题及对策[J]. 林俊,卢茵,蒋婧. 饲料博览. 2014(02)
[3]转基因动物生物反应器研究及产业化进程[J]. 商圣哲,赵杰,李宁. 生物产业技术. 2014(01)
[4]老年抑郁症患者失眠与血浆褪黑素水平的关系[J]. 代娟,李恒芬,曹素霞,谢正. 中国健康心理学杂志. 2010(11)
[5]Melatonin Protects N2a against Ischemia/Reperfusion Injury through Autophagy Enhancement[J]. 国艳春,王剑飞,王忠强,杨易,王西明,段秋红. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2010(01)
[6]我国山羊奶开发现状及重点[J]. 曹斌云,罗军,姚军虎,渊锡藩. 畜牧兽医杂志. 2007(01)
[7]褪黑素抗氧化保护作用机制及应用的研究进展[J]. 吴纯启,王治乔. 国外医学(药学分册). 2004(04)
[8]褪黑激素的生理功能[J]. 魏涛,唐粉芳,金宗濂. 食品工业科技. 2002(09)
[9]褪黑激素的生物学作用[J]. 徐金会. 曲阜师范大学学报(自然科学版). 2002(03)
[10]褪黑激素对生殖的调控机理及其在动物繁殖中的作用和应用前景[J]. 李连瑞,何良军,吴静. 动物科学与动物医学. 2002(03)
本文编号：3068015
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图0翻燕渝御化拳蜻鞠喊泥山.;or佃渊l妇
５－芙全色氣Ｉ髮（５－ｈｙｄｉ．ｏｘｙｔｒｙｐｔｏｐｌｉａｎ）??ＡＡＡＤ?！??５－轻色胺（Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ）??ＡＡＮＡＴ??Ｎ－乙酸－５－轻色胺（Ｎ－ａｃｔｙｌｓｅｒｏｔｏｍｎ）??ＨＩＯＭＴ??褪黑素（Ｍｅｌａｔｏｎｉｎ）??图２褪黑素的生物合成??Ｆｉｇｕｒｅ?２?Ｍｅｌａｔｏｎｉｎ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｐａｔｈｗａｙ??１．１．３褪黑素合成限速酶??芳院基胺Ｎ－乙酰站转移＿?（ＡＡＮＡＴ）是褪黑索＿＇ｌ：物合成屮的倒数第ｉ?：位合成酶（Ｆａｌｃ６ｎ?ｅｔ?ａｌ．，??２００９），催化５－羟色胺生成Ｎ－乙酰－５－羟色胺（阉３），以脊推动物中槌黑素生物合成的主要限速酶??（Ｂｌｏｍｅｋｅ?ｅｔ?ａｌ．．?２００８；?Ｚｈｅｎｇ?ｅｔ?ａｌ．．?２００１），??ＮＨ２??
子和细胞功能。从此，显微注射法、精子载体法、１ＣＳＩ介导的转基因、原始生殖细胞（ＰＧＣｓ）??法、胚胎干细胞法、慢病毒载体法、转座子转基因法、ＲＮＡ干扰、体细胞核移植及其他基因编辑??方法已成功用于生产转基因小鼠和其他转基因动物物种（图４）。由于未解决的技术和安全问题，??各自都有其优点和缺点，需要进一步研究。目前原核胚显微注射和体细胞核移植是生产转基因家??畜常用的方法。??一？?＾Ｍａｌｅ??＾?Ｍｅｔａｐｈａｓｅ?ＩＩ?＼?＜?１??（ｆ?）?ｏｏｃｙｔｅｓ?Ｖ＇??Ａ）?Ｏｏｃｙｔｅ?Ｂ）?Ｚｙｇｏｔｅ?Ｖ?Ｃ）?Ｓｐｅｒｍ－ｍｅｄｉａｔｅｄ??－，?ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｇｅｎｅ?ｔｒａｎｓｆｅｒ??＾??＾?ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ?Ｖ－／?ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ??Ｖ?ＤＮＡ／ＲＮＡ／ｔｅｎｌｉｖｉｒａｌ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?心?；?＾??０—?＾０?ｃ）?Ｏ?Ｏ??Ｎｕｄｔｔａｒ?ａ）?ｂ）?Ｃ）?ｄ）??ｔｒａｎｓｆｅｒ?Ｐｒｏｎｕｃｔｏａｒ?Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ?ＰｏｒＭｅＨｉｎｅ?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ??（ＳＣＮＴ）?ｉｎ｜ｅｃｔｉｏｏ?ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?〇（?ｎｕｃｌｅａｓｅｓ??（ＤＮＡ．?ＴＳ．?ＲＮＡ．?（ＺＦＮ，?ＴＡＬＥＮ．?（Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ）?（２ＦＮ．?ＴＡｔＥＮ．??ＺＦＮ．?ＴＡＬＥＮ．?ＣＲＩＳＰＲ）?ＣＲＩＳＰＲ）??ＣＲＩＳＰＲ）???Ｉ?Ｉ?｜?｜???ｒ￣??／ｎ
【参考文献】：
期刊论文
[1]褪黑素生理活性及其作用机制的研究进展[J]. 张天宝,侯鹏高. 齐齐哈尔医学院学报. 2015(11)
[2]我国奶山羊产业发展现状、问题及对策[J]. 林俊,卢茵,蒋婧. 饲料博览. 2014(02)
[3]转基因动物生物反应器研究及产业化进程[J]. 商圣哲,赵杰,李宁. 生物产业技术. 2014(01)
[4]老年抑郁症患者失眠与血浆褪黑素水平的关系[J]. 代娟,李恒芬,曹素霞,谢正. 中国健康心理学杂志. 2010(11)
[5]Melatonin Protects N2a against Ischemia/Reperfusion Injury through Autophagy Enhancement[J]. 国艳春,王剑飞,王忠强,杨易,王西明,段秋红. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2010(01)
[6]我国山羊奶开发现状及重点[J]. 曹斌云,罗军,姚军虎,渊锡藩. 畜牧兽医杂志. 2007(01)
[7]褪黑素抗氧化保护作用机制及应用的研究进展[J]. 吴纯启,王治乔. 国外医学(药学分册). 2004(04)
[8]褪黑激素的生理功能[J]. 魏涛,唐粉芳,金宗濂. 食品工业科技. 2002(09)
[9]褪黑激素的生物学作用[J]. 徐金会. 曲阜师范大学学报(自然科学版). 2002(03)
[10]褪黑激素对生殖的调控机理及其在动物繁殖中的作用和应用前景[J]. 李连瑞,何良军,吴静. 动物科学与动物医学. 2002(03)
本文编号：3068015
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