奶牛链球菌性乳房炎可视化LAMP检测方法的建立及应用

发布时间：2021-03-07 03:00

　　奶牛链球菌性乳房炎是奶牛乳房炎的常见类别之一。链球菌属致病菌感染奶牛乳房后所引起的临床症状不明显从而不易被牛场察觉,但链球菌性乳房炎所造成的危害却极大,最直观的经济损失是奶牛乳产量下降,牛奶品质变差。同时牛奶中的炎性因子与致病菌、毒素也对消费者健康会造成威胁。准确、快速的致病菌检测是治疗与控制乳房炎的前提,不仅能够有效降低经济损失,避免抗生素滥用,而且可减少耐药菌株出现与牛奶中的药物残留率。由于链球菌对青霉素、氨苄青霉素、万古霉素等多种抗生素均敏感且治疗效果明显,因此,开发建立一种方便快捷的检测链球菌性乳房炎致病菌的技术不仅具有较高的应用价值,是奶牛场乳房炎防控措施中的一项重要内容,同时也有着公共卫生学意义。传统的链球菌培养要求条件高,分离鉴定难度大；PCR方法敏感、快速但依赖于昂贵复杂的精密仪器,难以在条件较差的基层推广普及使用。环介导等温扩增（LAMP）作为新型的体外核酸扩增技术,具有高特异性、高灵敏性,简便快速、成本低,对仪器设备的要求简单的特点,在临床与现场快速检测诊断方而,显示了其突出的优越性本试验采用环介导等温扩增可视化技术快速检测链球菌性乳房炎致病菌。针对链球菌属细菌的高... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

乳房炎分类(根据不同泌乳阶段、临床症状及侦原素）

图3 LAMP引物问距Fig.3 Distance between each primer of LAMP2、引物区的Tmfl对于GC禽贵丰富或GC禽量正常的基W序列，引物区的Tm仿应控制在60?65°C ；对于AT富集的序列，引物区的Tm位则应控制在55?60°C。在设计各区域引物时，应将Flc与Bic的Tmtft控制在65°C (64?66°C之问）；F2B2、F3与B3的Tm位控制在60°C (59?61 °C之问)；LF与LB的Tm位保持在65°C - 66°C之问)。此外，Flc与BIg的Tm应稍高于F2与B2，这有助于扩柄过程巾单模板释放后立刻形成环状结构。3、引物GC禽量LAMP引物的GC含量控制在40?65%之内为rr, J1；巾GC含量在50?60%吋为域佳，设计引物的质量耍相对更好一些。4、引物末端的稳定性

阁4 LAMP反丨Wte迎循环模板介成阶段iP骤一Fig.4 Part 1 of reaction principle of LAMP如图5-A所示，外引物F3从内引物FIP的外侧与模板DNA上的F3c L><:段结合，在A打链背换作爪的Bst DNA聚合酶的引导下，一边将之前111内引物FIP所合成的DNA链剥离、释放，一边以外引物F3的3’末端为起点合成新的模板DNA的互补链（见图5-B)。/ *、 y F2c ￡K 81 B2 aj 5’(\ ' 产ml丨丨丨 |丨?|||l||iT|1i|i|||||iiiiiii III II "IIIIIIIIIII圃_■__■丨議MIMIIIIIIIIiiiiiiiiiii丨丨丨丨丨|nilI mil nili'rmtf W rt n sk nic 03? rS，Flc暴FJc F2c Flc Bl B2 B3 Vnqm 鄉 -/. _. V. M w^mFJ F2 Fl Blc Blc B3c i'


本文编号：3068286