NrtR转录因子调控细菌NAD + 代谢的机制研究

发布时间：2021-03-07 11:10

　　NAD+/NADH是所有生物体不可缺少的辅因子,作为细胞能量代谢所必需的辅酶,参与所有生命体的代谢活动。NAD+参与的基础代谢曾被报道与病原菌的毒力相关,本研究初步探索2型猪链球菌（Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2）中NAD+代谢的信号通路及其调控机制,探究NrtR调节子与其毒力的关系,为发现新的药物靶点、预防治疗猪链球菌病提供理论依据。主要研究结果如下:（1）通过生物信息学同源比对发现,在2型猪链球菌中,操纵子nadR-punC-nrtR编码NAD.+的补救合成途径,其中调控因子NrtR同源蛋白负责调控该操纵子的表达。同时,在2型猪链球菌中可能存在另一条补救途径,PncA所在的补救途径,这条途径由另一调节子NiaR负责调控。通过生物信息学分析可知,NrtR蛋白属于Nudix家族,由N端的Nudix结构域和C端的DNA结合结构域组成。采用Ni-NTA亲和层析法和分子筛纯化重组蛋白,化学交联和分子筛都显示作为调控因子的NrtR以二聚体的形式存在。（2）Electrophoretic mobility shift assay（EMSA）试验证明了... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：128 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．２突变体Ａｎｒｒｆ？的构建??Ｆｉｇ．?１．２?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＡｎｒｔＲ?ｍｕｔａｎｔ??

途径基因和ｗｒｉ？的同源基因，且三个基因彼此重叠形成一个操纵子，??ＮｒｔＲ?蛋白预测的?ＤＮＡ?结合位点（ｈｔｔｐ：／／ｒｅｇｐｒｅｃｉｓｅ．ｌｂｌ．ｇｏｖ／ＲｅｇＰｒｅｃｉｓｅ），位于该操纵??子的上游（图１．３Ａ），表明ＮｒｔＲ可能是一个自调控子，可调控自身的表达。；??基因编码一个假定的Ｎ－核糖烟酰胺转运蛋白［３２］，而基因产物ＮａｄＲ具有两种??酶学活性：核苷激酶活性（ＮｍＲ－Ｋ），主要通过磷酸化将ＮｍＲ转变为ＮＭＮ［３２］；??另一个是腺苷转移酶活性（ＮＭＮ－ＡＴ），负责催化ＮＭＮ转化为ＮＡＤ。因此，ｐｎｗＣ??和；＾汉基因编码了?ＲＮａｍ－ＮＡＤ这条补救途径所必需的催化功能［３２］。??Ｒｏｄｉｏｎｏｖ等人［３１］研究报道，链球菌科缺乏ＮＡＤ的从头合成途径［３１］，通过对??ＮＡＤ从头合成基因ｍｃＷ、及的同源比对分析，我们发现在５１．?？ｓｗｈ〗中??确实缺乏这些从头合成途径的基因，这与Ｒｏｄｉｏｎｏｖ等人的报道是一致的。Ｂｉ等人??［５３］报道，烟酸转运蛋白ＮｉａＸ存在于四梭菌属、粪肠球菌及所有的链球菌科中［５３］，??且多数含有ＮｉａＸ的菌种缺乏ＮＡＤ的从头合成途径（天冬氨酸途径）

Ｓ．?ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒｉｓ、Ｓ．?ｔｈｅｎｎｏｐｈｉｌｕｓ?和?Ｍｉｔｉｓ?ｇｎｏｗｐ?＿?的?Ｓ．?ｍｉｔｉｓ、Ｓ．?ｓａｎｇｕｉｎｉｓ、Ｓ．?ｇｏｒｄｏｎｉｉ??进行多序列比对分析，结果显示，Ｓ．？以２的ＮｒｔＲ蛋白与唾液链球菌组和轻型链??球菌组的该蛋白具有一定同源性（图１．５Ｂ），其一级结构氨基酸序列及二级空间结??构均有一定相似性。??２３??

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪链球菌2型HA0609的分离及致病性研究[J]. 吕立新,何孔旺,倪艳秀,俞正玉,茅爱华.  畜牧与兽医. 2013(02)



本文编号：3068977