猪瘟病毒NS2、NS3和NS5A与猪Rab25蛋白的亚细胞定位分析
发布时间：2021-03-07 12:52
为了研究NS5A与Rab25的亚细胞定位及作用基因区段,先构建pDsRed1-N1-Rab25红光载体,利用经过改造并加GFP的pcDNA3.1（+）-NS2、pcDNA3.1（+）-NS3和pcDNA3.1（+）-NS5A载体,将pDsRedN1-Rab25红光载体与这3种绿光载体分别共转染于猪血管内皮细胞（SUVEC）,通过共聚焦显微镜观察显示Rab25和NS2、NS3共定位现象不明显而与NS5A存在着明显共定位。为了进一步研究NS5A与Rab25作用基因区段,构建NS5A的3个分段基因载体:pEGFP-C1-NS5A-1-84、pEGFP-C1-NS5A-84-804和pEGFP-C1-NS5A-804-1 491,转染SUVEC并观察共定位情况,结果显示Rab25与NS5A的804～1 491 bp存在明显共定位,而与1～84,84～804 bp的共定位现象不明显。结果说明Rab25与NS5A基因的804～1 491 bp存在共定位,这为继续研究Rab25与NS5A的关键作用位点及互作奠定基础。
【文章来源】：中国兽医学报. 2020,40(04)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
Rab25与NS5A各功能区共定位(10 μm)
CSFV属于黄病毒科瘟病毒属成员,是能造成严重经济损失的烈性传染病[21]。1830-1833年,在印第安纳的沃巴什河地区首次发现CSFV,直到1860年,CSFV在欧洲和美洲广泛流行。目前,很多国家已经彻底根除CSFV。在我国猪瘟(CSF)兔化弱毒疫苗的应用,有效控制急性CSF。但各种疾病的混合感染及慢性CSF较难从猪群中分离,使得这一类型疾病的发病率持续增加[22-23]。CSFV的致病机理较为复杂。在CSFV感染细胞以及复制的过程中涉及到很多Rab蛋白,如Rab1A与CSFV粒子组装有关,Rab5能诱导NS4B复合物的形成促进CSFV复制等[25]。Rab蛋白在细胞膜运输中是一大类发挥调控功能的蛋白,参与多种重要致病性病毒的复制过程。Rab25作为一种参与蛋白转运的蛋白[25],在CSFV复制中的作用还未知。图5 Rab25与NS2、NS3和NS5A共定位(10 μm)
根据生物信息学对NS5A蛋白序列的分析结果和参阅关于HCV及BVDV的NS5A相关研究成果的基础上[18-20],通过生物信息学官网http://smart.embl-heidelberg.de和http://scansite.mit.edu对NS5A蛋白进行生物信息学分析,初步明确CSFV NS5A蛋白的功能分区(图1)。1.6 Rab25与NS5A功能区共定位的观察
【参考文献】：
期刊论文
[1]非典型猪瘟病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 曹亮,田明尧,孙文超,郭丹丹,汪伟,鲁会军,刘云霞,郑敏,钱爱东,金宁一. 中国兽医学报. 2019(04)
[2]2014-2018年广西6种猪主要病毒性繁殖障碍疫病流行病学调查[J]. 段群棚,陈忠伟,何颖,周英宁,李晓玉,梁家幸,闭炳芬,杨思仪,蒋冬福,卢敬专,李斌,秦毅斌,卢冰霞,苏乾莲,赵武. 中国畜牧兽医. 2019(02)
[3]规模化猪场猪瘟和伪狂犬病净化效果的评价[J]. 胡玲玲,汤德元,曾智勇,王彬,黄涛,龙冬梅,石远菊,杨伟,叶丽. 中国兽医学报. 2018(11)
[4]激光共聚焦显微技术在共定位应用中的常见问题[J]. 王娟娟,魏学红. 影像科学与光化学. 2018(06)
[5]猪瘟的防治进展[J]. 曲军. 农业与技术. 2018(03)
[6]激光共聚焦显微镜技术在中药研究中的应用[J]. 李琳,刘德旺,田野,黄林芳. 中成药. 2017(05)
[7]FK506结合蛋白25及其突变体与CLIC1蛋白在真核细胞内共定位的研究[J]. 何薇,耿慧武,左恒,阮操,潘林鑫,范礼斌,刘晓颖. 安徽医科大学学报. 2016(10)
[8]蛋白质互作研究技术[J]. 吴健,朱海霞,赵志荀,颜新敏,赵银龙,吴娜,李健,张志东,张强,李影,吴国华. 动物医学进展. 2016(02)
[9]激光扫描共聚焦显微镜的基本原理及其使用技巧[J]. 李叶,黄华平,林培群,崔艳梅,李勤奋,郑勇奇. 电子显微学报. 2015(02)
本文编号：3069128
【文章来源】：中国兽医学报. 2020,40(04)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
Rab25与NS5A各功能区共定位(10 μm)
CSFV属于黄病毒科瘟病毒属成员,是能造成严重经济损失的烈性传染病[21]。1830-1833年,在印第安纳的沃巴什河地区首次发现CSFV,直到1860年,CSFV在欧洲和美洲广泛流行。目前,很多国家已经彻底根除CSFV。在我国猪瘟(CSF)兔化弱毒疫苗的应用,有效控制急性CSF。但各种疾病的混合感染及慢性CSF较难从猪群中分离,使得这一类型疾病的发病率持续增加[22-23]。CSFV的致病机理较为复杂。在CSFV感染细胞以及复制的过程中涉及到很多Rab蛋白,如Rab1A与CSFV粒子组装有关,Rab5能诱导NS4B复合物的形成促进CSFV复制等[25]。Rab蛋白在细胞膜运输中是一大类发挥调控功能的蛋白,参与多种重要致病性病毒的复制过程。Rab25作为一种参与蛋白转运的蛋白[25],在CSFV复制中的作用还未知。图5 Rab25与NS2、NS3和NS5A共定位(10 μm)
根据生物信息学对NS5A蛋白序列的分析结果和参阅关于HCV及BVDV的NS5A相关研究成果的基础上[18-20],通过生物信息学官网http://smart.embl-heidelberg.de和http://scansite.mit.edu对NS5A蛋白进行生物信息学分析,初步明确CSFV NS5A蛋白的功能分区(图1)。1.6 Rab25与NS5A功能区共定位的观察
【参考文献】：
期刊论文
[1]非典型猪瘟病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 曹亮,田明尧,孙文超,郭丹丹,汪伟,鲁会军,刘云霞,郑敏,钱爱东,金宁一. 中国兽医学报. 2019(04)
[2]2014-2018年广西6种猪主要病毒性繁殖障碍疫病流行病学调查[J]. 段群棚,陈忠伟,何颖,周英宁,李晓玉,梁家幸,闭炳芬,杨思仪,蒋冬福,卢敬专,李斌,秦毅斌,卢冰霞,苏乾莲,赵武. 中国畜牧兽医. 2019(02)
[3]规模化猪场猪瘟和伪狂犬病净化效果的评价[J]. 胡玲玲,汤德元,曾智勇,王彬,黄涛,龙冬梅,石远菊,杨伟,叶丽. 中国兽医学报. 2018(11)
[4]激光共聚焦显微技术在共定位应用中的常见问题[J]. 王娟娟,魏学红. 影像科学与光化学. 2018(06)
[5]猪瘟的防治进展[J]. 曲军. 农业与技术. 2018(03)
[6]激光共聚焦显微镜技术在中药研究中的应用[J]. 李琳,刘德旺,田野,黄林芳. 中成药. 2017(05)
[7]FK506结合蛋白25及其突变体与CLIC1蛋白在真核细胞内共定位的研究[J]. 何薇,耿慧武,左恒,阮操,潘林鑫,范礼斌,刘晓颖. 安徽医科大学学报. 2016(10)
[8]蛋白质互作研究技术[J]. 吴健,朱海霞,赵志荀,颜新敏,赵银龙,吴娜,李健,张志东,张强,李影,吴国华. 动物医学进展. 2016(02)
[9]激光扫描共聚焦显微镜的基本原理及其使用技巧[J]. 李叶,黄华平,林培群,崔艳梅,李勤奋,郑勇奇. 电子显微学报. 2015(02)
本文编号：3069128
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