建立TetO诱导重编程的猪体细胞系

发布时间：2021-03-10 07:56

　　将外源多能转录因子（Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc）介导成体干细胞，诱导得到多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs），其具有与ES （embryonic stem）细胞相同的特性，不涉及胚胎伦理问题。近年，iPSCs技术发展迅猛，成为生命科学研究及临床应用的热点研究领域。国内外多家实验室成功地将猪体细胞诱导为iPSCs。但不同实验室得到的猪iPSCs，由于采用的方法和培养条件不同，使其表观遗传特性存在差异。重编程过程需要高滴度的和一定化学剂量的转录因子表达，诱导时4个转录因子随机整合，形成的iPSCs通常拥有不同的拷贝数。这种病毒载体随机拷贝插入和重编程的随机性，给研究细胞重编程机制和利用小分子替代转录因子的研究带来了困难。本实验将携带4个鼠源多能转录因子的慢病毒载体TetO-FUW-OSKM和辅助载体FUW-M2rtTA同时感染猪胎儿成纤维细胞（Porcine Embryonic Fibroblasts，PEF），将串联的四因子整合到体细胞基因组中，在添加Dox （deoxycycline）的多能细胞培养条件下形成iPSCs，称... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

复合型Tet-on系统示意图

20321)和 FUW-M2rtTA(Plasmid 20342)来自于 addgene(图3-1)。转化：由于大肠杆菌 Stbl3 菌株具有能够有效抑制长片段末端重复区的重组的可能性，Stbl3 菌株特别适合复制含有同向重复序列的慢病毒。按 GeneCopoeia 公司 E.colicompopetent cells stbl3(#U0103A)使用说明书进行转化。具体方法：(1) 将感受态细胞20

3.2.2 TetO 诱导表达系统的功能验证FUW-M2rtTA F:ACTCGGTTTGTCGTCTGT 954 20342(来源于 Addgene)R:GCTACTTGATGCTCCTGTTmOct4F:AAGTTGGCGTGGA GACTTTG 479 NM_013633.3R:CATGGTCTCCAGACTCCACmSox2F:AGCCCGGACCGCGTCAAGA 610 NM_011443.3R:TGGAGCCCAGCGCCATACCGmKlf4F:TGGCTGCCAGCAACACAGGT 378 NM_010637.3R:TGACCGTGCAGGACGGGACCmc-MycF:AGGACTGTATGTGGAGCGGTTTC 490 AK087961.1R:AGTGGGCTGTGCGGAGGTTTR:CTTCTGGGTGGCAGTGAThGAPDH F: ACAACTTTGGTATCGTGGAA 458 NM_001256799.1R: AAATTCGTTGTCATACCAGG


本文编号：3074335