小鹅瘟灭活疫苗（TZ10株）的研制
发布时间：2021-03-11 01:18
小鹅瘟是导致雏鹅死亡的常见疾病之一,可造成巨大经济损失,严重危害养鹅业的发展。现有弱毒活疫苗和小鹅瘟抗体的广泛应用,在我国小鹅瘟疫病防控过程中发挥了巨大的作用。但活毒疫苗存在毒力返强的潜在危害,从而限制了其生产应用,因此研究小鹅瘟灭活疫苗显得尤为重要。本研究对小鹅瘟分离毒株的生物学特性进行了系统研究,筛选出免疫原性好、繁殖滴度高的小鹅瘟野毒株作为灭活疫苗候选株,并开展了生产工艺、乳化工艺和免疫效力研究工作,以期制备出安全、高效的小鹅瘟灭活疫苗,为我国小鹅瘟疫病的防控和净化提供有力工具。1、小鹅瘟病毒疫苗候选株的筛选为了研制与当前小鹅瘟流行株匹配的疫苗,本研究对从2009～2011年江苏省养鹅地区疑似小鹅瘟的临床样品中共分离了 5株鹅细小病毒（GPV）,同时对分离株进行VP3基因测序并绘制遗传进化树,序列分析结果表明GPV分离株与国内大部分分离株属于同一分支,明显不同于国内疫苗株SY61和台湾主要分支。对获得的毒株经有限稀释法纯化,并对纯化后的病毒进行繁殖性能、毒力、特异性及免疫原性等进行了测定,5株病毒均属于强毒株,其中 Gosling plague virus/taizhou/10（...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１胚体病变照??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ?ｃｈａｎ?ｇｅｎｓ?ｏｆ?ｅｇｇ?ｂｏｄｙ??
２．?２．?４．１?ＶＰ３基因扩增及鉴定??ＧＰＶ各分离株ＶＰ３基因扩增产物经１％琼脂糖凝胶电泳分析，均可见约５３９ｂｐ的目的??条带，ＤＮＡ大小与预期的结果相符，电泳图片见图２－３。?????－？??■■■■??图２－３分离株ＶＰ３基因ＰＣＲ鉴定结果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＶＰ３?ｇｅｎｅｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?ＮＪ０９?株?２：?ＴＪ１０?株?３：?ＮＴ０９?株??４：?ＹＺｌｌ株５：?ＹＺ１０株＋：阳性对照阴性对照??２．?２．４．２?ＶＰ３基因序列分析??将扩增的目的片段送南京金斯瑞生物科技有限公司测序后，对测定的基因进行序列分??析，ＢＬＡＳＴ结果显示，５株分离株的基因序列均与ＧｅｎＢａｎｋ数据库中的ＧＰＶ最为相近（见??图２－４）。其中，ＮＪ０９株和ＹＺ１１株基因与ＧｅｎＢａｎｋ数据库中收录的Ｇｏｏｓｅ?ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ?ｓｔｒａｉｎ??ＬＨ?（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＫＭ２７２５６０）具有最高的相似性；ＴＺ１０株基因与ＧｅｎＢａｎｋ数据库??中收录的?Ｇｏｏｓｅ?ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ?ｓｔｒａｉｎ?ＹＺ９９－６?（ＧｅｎＢａ
Ｅ（Ｇｅｎｂａｎｋ登录号：ＫＣ１８４１３３）遗传关系最近，该毒株基因组全长为５１２５ｂｐ。ＴＺＩ０株全??基因组与疫苗株ＳＹＧ６１ｖ株（Ｇｅｎｂａｎｋ登录号：ＫＣ９９６７２９）相比在４６３６ｂｐ－４６８５ｂｐ处有多??处序列插入，见
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国鹅细小病毒研究进展[J]. 杜翔宇,李温明,胡振林,张甜甜,胡桂学,董浩. 中国兽医杂志. 2016(06)
[2]鹅细小病毒分子生物学的研究新进展[J]. 孟繁兴,董浩,胡桂学. 黑龙江畜牧兽医. 2015(23)
[3]动物试验替代方法在兽用疫苗检验中的应用概况[J]. 王晓卉,李翠,蒋卉,张秀英,温芳,陆连寿,王在时. 中国兽药杂志. 2015(04)
[4]我国小鹅瘟研究进展及成就[J]. 金文杰,吕亚楠,王芳,朱良全,秦爱建,丁家波. 微生物学通报. 2014(03)
[5]鹅副粘病毒病的防制[J]. 汪志铮. 贵州畜牧兽医. 2013(02)
[6]2株鹅细小病毒全基因组特征分析[J]. 王浩,田先举,张烁,周秀红,刘红梅,潘玲,祁克宗. 畜牧兽医学报. 2013(04)
[7]我国2株野生动物源细小病毒VP2和NS1基因序列及所编码蛋白的分析[J]. 梁萌,王化磊,冯昊,金宏丽,胡桂秋,郭鹤,齐瑛琳,冯娜,郑学星,张仁舟,赵永坤,高玉伟,杨松涛,夏咸柱. 中国兽医学报. 2013(03)
[8]鹅细小病毒病、副黏病毒病的流行病学调查及病原分离鉴定[J]. 黄宇翔,刘力威,李洪彬,王志强,邹越. 中国家禽. 2013(02)
[9]鹅球虫病的流行特点及其防治[J]. 王留,刘秀玲. 养禽与禽病防治. 2012(12)
[10]番鸭小鹅瘟病直接荧光诊断试剂的研制[J]. 朱小丽,陈少莺,程晓霞,林锋强,陈仕龙,王劭,李兆龙,王燕玲. 畜牧兽医杂志. 2012(04)
博士论文
[1]小鹅瘟病毒保护性抗原的原核表达及免疫原性研究[D]. 李书光.中国农业大学 2016
硕士论文
[1]吉林省养鹅业现状及产业化分析[D]. 刘洪亮.吉林农业大学 2015
[2]鹅细小病毒的分离鉴定及其全基因测序及结构蛋白的表达[D]. 徐浩.吉林农业大学 2014
[3]鹅细小病毒病油乳剂灭活疫苗的研制[D]. 李琳.吉林大学 2008
[4]检测GPV抗体的间接ELISA方法的建立及初步应用[D]. 李永轩.吉林农业大学 2007
本文编号：3075611
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１胚体病变照??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ?ｃｈａｎ?ｇｅｎｓ?ｏｆ?ｅｇｇ?ｂｏｄｙ??
２．?２．?４．１?ＶＰ３基因扩增及鉴定??ＧＰＶ各分离株ＶＰ３基因扩增产物经１％琼脂糖凝胶电泳分析，均可见约５３９ｂｐ的目的??条带，ＤＮＡ大小与预期的结果相符，电泳图片见图２－３。?????－？??■■■■??图２－３分离株ＶＰ３基因ＰＣＲ鉴定结果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＶＰ３?ｇｅｎｅｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?ＮＪ０９?株?２：?ＴＪ１０?株?３：?ＮＴ０９?株??４：?ＹＺｌｌ株５：?ＹＺ１０株＋：阳性对照阴性对照??２．?２．４．２?ＶＰ３基因序列分析??将扩增的目的片段送南京金斯瑞生物科技有限公司测序后，对测定的基因进行序列分??析，ＢＬＡＳＴ结果显示，５株分离株的基因序列均与ＧｅｎＢａｎｋ数据库中的ＧＰＶ最为相近（见??图２－４）。其中，ＮＪ０９株和ＹＺ１１株基因与ＧｅｎＢａｎｋ数据库中收录的Ｇｏｏｓｅ?ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ?ｓｔｒａｉｎ??ＬＨ?（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＫＭ２７２５６０）具有最高的相似性；ＴＺ１０株基因与ＧｅｎＢａｎｋ数据库??中收录的?Ｇｏｏｓｅ?ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ?ｓｔｒａｉｎ?ＹＺ９９－６?（ＧｅｎＢａ
Ｅ（Ｇｅｎｂａｎｋ登录号：ＫＣ１８４１３３）遗传关系最近，该毒株基因组全长为５１２５ｂｐ。ＴＺＩ０株全??基因组与疫苗株ＳＹＧ６１ｖ株（Ｇｅｎｂａｎｋ登录号：ＫＣ９９６７２９）相比在４６３６ｂｐ－４６８５ｂｐ处有多??处序列插入，见
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国鹅细小病毒研究进展[J]. 杜翔宇,李温明,胡振林,张甜甜,胡桂学,董浩. 中国兽医杂志. 2016(06)
[2]鹅细小病毒分子生物学的研究新进展[J]. 孟繁兴,董浩,胡桂学. 黑龙江畜牧兽医. 2015(23)
[3]动物试验替代方法在兽用疫苗检验中的应用概况[J]. 王晓卉,李翠,蒋卉,张秀英,温芳,陆连寿,王在时. 中国兽药杂志. 2015(04)
[4]我国小鹅瘟研究进展及成就[J]. 金文杰,吕亚楠,王芳,朱良全,秦爱建,丁家波. 微生物学通报. 2014(03)
[5]鹅副粘病毒病的防制[J]. 汪志铮. 贵州畜牧兽医. 2013(02)
[6]2株鹅细小病毒全基因组特征分析[J]. 王浩,田先举,张烁,周秀红,刘红梅,潘玲,祁克宗. 畜牧兽医学报. 2013(04)
[7]我国2株野生动物源细小病毒VP2和NS1基因序列及所编码蛋白的分析[J]. 梁萌,王化磊,冯昊,金宏丽,胡桂秋,郭鹤,齐瑛琳,冯娜,郑学星,张仁舟,赵永坤,高玉伟,杨松涛,夏咸柱. 中国兽医学报. 2013(03)
[8]鹅细小病毒病、副黏病毒病的流行病学调查及病原分离鉴定[J]. 黄宇翔,刘力威,李洪彬,王志强,邹越. 中国家禽. 2013(02)
[9]鹅球虫病的流行特点及其防治[J]. 王留,刘秀玲. 养禽与禽病防治. 2012(12)
[10]番鸭小鹅瘟病直接荧光诊断试剂的研制[J]. 朱小丽,陈少莺,程晓霞,林锋强,陈仕龙,王劭,李兆龙,王燕玲. 畜牧兽医杂志. 2012(04)
博士论文
[1]小鹅瘟病毒保护性抗原的原核表达及免疫原性研究[D]. 李书光.中国农业大学 2016
硕士论文
[1]吉林省养鹅业现状及产业化分析[D]. 刘洪亮.吉林农业大学 2015
[2]鹅细小病毒的分离鉴定及其全基因测序及结构蛋白的表达[D]. 徐浩.吉林农业大学 2014
[3]鹅细小病毒病油乳剂灭活疫苗的研制[D]. 李琳.吉林大学 2008
[4]检测GPV抗体的间接ELISA方法的建立及初步应用[D]. 李永轩.吉林农业大学 2007
本文编号：3075611
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