鲁西牛消化道各段T1R1、T1R3及pepT1基因的表达差异性研究

发布时间：2021-03-12 07:19

　　反刍动物氨基酸营养需要一直是研究的热点和难点。由于反刍动物采食的氨基酸有一部分会被瘤胃微生物降解，并且其代谢和生产的氨基酸需要量受生理状态和生产水平的影响，因此研究人员很难准确测定氨基酸的需要量。而氨基酸在反刍动物生产性能发挥中所起的重要作用又使得搞清氨基酸需要是一个迫切的问题。氨基酸营养需要测定的困难表现在理论和技术两个方面。其中理论上最重要的问题是关于氨基酸的吸收调控机制还没有完全搞清楚。T1R基因家族的T1R1基因和T1R3基因对氨基酸的识别发挥着重要的作用，其配体是氨基酸。越来越多的实验表明了T1R1基因和T1R3基因除了在味蕾中表达外，还在胃肠道中表达，并且是以异源二聚体的形式发挥作用的，参与氨基酸的吸收调控。为此，本文以实时荧光定量PCR的方法检测了在鲁西牛消化道各段中T1R1基因和T1R3基因的表达情况及其规律。动物体内对氨基酸的吸收主要是以小肽的形式进行吸收的，而小肽的吸收则需要依靠小肽转运蛋白载体，即pepT1，所以本研究同时还检测了pepT1基因在鲁西牛消化道各段中的表达情况，以揭示这3个基因的表达是否有相关的联系。通过实验我们得到了以下结果：1、鲁西牛消化道各段中... 

【文章来源】：江苏师范大学江苏省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
目录
引言
1 文献综述
    1.1 氨基酸受体研究简介
        1.1.1 充当氨基酸受体的功能要素
        1.1.2 已经鉴定出的氨基酸受体简介
        1.1.3 消化道中表达的味觉受体的研究进展
    1.2 小肽转运蛋白载体 1 简介
        1.2.1 pepT1 的分子结构
        1.2.2 PepT1mRNA在动物组织中的表达
        1.2.3 PepT1 的转运机制
    1.3 实时荧光定量PCR简介
        1.3.1 实时荧光定量PCR的过程
        1.3.2 一步法与两步法实时荧光定量PCR
        1.3.3 荧光染料的种类
        1.3.4 实时荧光定量PCR的类型
2 实验技术路线、材料和方法
    2.1 实验技术路线
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验样本的采集
        2.2.2 实验试剂剂
        2.2.3 实验所用溶液与培养基的配制
        2.2.4 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 提取各组织的总RNA
        2.3.2 所提取的总RNA的检测
        2.3.3 反转录反应
        2.3.4 引物和TaqMan探针的设计
        2.3.5 普通梯度PCR
        2.3.6 实时荧光定量PCR条件的摸索
        2.3.7 质粒标准品的制作
        2.3.8 实时荧光定量PCR
    2.4 实验统计分析
        2.4.1 2-△△Ct 方法的数学推导
        2.4.2 内标及相关参照因子的选择
3 实验结果
    3.1 提取的总RNA
    3.2 所研究基因T1R1、T1R3、pepT1 和管家基因β-actin最佳退火温度
    3.3 T1R1、T1R3、pepT1 和β-actin特异性目的片段的回收
    3.4 菌液PCR鉴定阳性重组子
    3.5 提取质粒测序
    3.6 目的基因和管家基因扩增效率的验证
    3.7 鲁西牛消化道各段中T1R1、T1R3 及pepT1 mRNA的相对表达结果
        3.7.1 鲁西牛消化道各段T1R1 基因mRNA的相对表达
        3.7.2 鲁西牛消化道各段T1R3 基因mRNA的相对表达
        3.7.3 鲁西牛消化道各段pepT1 基因mRNA的相对表达
        3.7.4 T1R1、T1R3、pepT1 基因mRNA在鲁西牛消化道同一段的相对表达
    3.8 T1R1、T1R3、pepT1 基因与氨基酸吸收调控的相关性分析
4 讨论
    4.1 相关实验方法的改进探讨
        4.1.1 牛消化组织总RNA的提取、检测
        4.1.2 反转录引物的选择
        4.1.3 小片段DNA的回收、纯化
        4.1.4 重组子的转化、鉴定
    4.2 实验结果的分析与讨论
5 结论与创新点
    5.1 结论
    5.2 创新点
参考文献
作者简介
学位论文数据集


【参考文献】：
期刊论文
[1]哺乳类动物胃肠道内味觉受体的信号研究[J]. 陈晓慧,张春雷,陈宏,房兴堂.  中国牛业科学. 2012(05)
[2]实时荧光定量PCR技术及实例分析[J]. 李洁.  中国现代教育装备. 2009(01)

博士论文
[1]反刍动物瘤胃消化代谢的调控以及必需氨基酸在胃肠道的氧化[D]. 沈向真.南京农业大学 2003



本文编号：3077915