液氦玻璃化冷冻对牛GV期卵母细胞发育及基因表达的影响

发布时间：2021-03-12 19:54

　　本试验用液氦取代传统的液氮作为冷源冷冻牛GV期卵母细胞，通过研究液氦对牛GV期卵母细胞发育能力的影响、不同冷源冷冻牛GV期卵母细胞对GDF9、BAX、ZAR1基因mRNA表达量的影响，分析液氦冷冻牛GV期卵母细胞的可行性，以及牛卵母细胞经液氦冷冻解冻后成熟、发育能力与所选基因表达量变化之间的关系。试验一：将牛GV期卵母细胞随机分为三组：（1）新鲜对照组；（2）液氮玻璃化冷冻组；（3）液氦玻璃化冷冻组。其中，两个试验组都选用20%乙二醇（EG）、20%二甲基亚砜（DMSO）和0.5M（moL/L）蔗糖作为冷冻液。卵母细胞经冷冻解冻后进行体外成熟（IVM）、体外受精（IVF）和体外培养（IVC），并统计数据。对照组可直接进行IVM、IVF、IVC。结果显示：牛GV期卵母细胞经液氮和液氦OPS玻璃化冷冻，卵母细胞解冻之后形态正常率为81.1%vs.89.0%，差异显著（P<0.05）；成熟24h后，统计极体排放情况用以确定细胞成熟率，对照组、液氮OPS玻璃化冷冻组和液氦OPS玻璃化冷冻组的成熟率分别为69.5%、42.6%、50.6%，对照组显著高于两个冷冻组（P<0.05），但... 

【文章来源】：河南科技大学河南省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第1章 文献综述
    1.1 哺乳动物卵母细胞冷冻研究进展
    1.2 卵母细胞的成熟
        1.2.1 细胞器重组
        1.2.2 成熟过程中细胞骨架纤维的动态
        1.2.3 分子成熟
        1.2.4 细胞质成熟的标志物和抗氧化系统
    1.3 玻璃化冷冻
        1.3.1 玻璃化冷冻原理
        1.3.2 冷冻保护剂
    1.4 冷源
        1.4.1 冷源发展史
        1.4.2 液氦
    1.5 冷冻对卵母细胞的影响
    1.6 GV 期卵母细胞冷冻的研究
    1.7 母源基因
        1.7.1 GDF9 基因
        1.7.2 ZAR1 基因
        1.7.3 BAX 基因
    1.8 本研究的目的及意义
第2章 液氦玻璃化冷冻对牛 GV 期卵母细胞发育能力的影响
    2.1 试验材料
        2.1.1 材料来源
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器设备
        2.1.4 主要溶液配置
    2.2 试验方法
        2.2.1 卵母细胞采集
        2.2.2 卵泡液的制备
        2.2.3 卵母细胞体外成熟
        2.2.4 牛卵母细胞成熟评定方法
        2.2.5 卵母细胞体外受精和体外培养
        2.2.6 OPS 制备
        2.2.7 牛 GV 期卵母细胞液氮玻璃化冷冻与解冻
        2.2.8 牛 GV 期卵母细胞液氦玻璃化冷冻与解冻
        2.2.9 试验设计
        2.2.10 统计分析
    2.3 试验结果
    2.4 讨论
第3章 不同冷源冷冻牛 GV 期卵母细胞对 GDF9、ZAR1、BAX 基因 mRNA 表达量的影响
    3.1 试验材料
        3.1.1 材料来源
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器设备
        3.1.4 主要溶液配置
    3.2 试验方法
        3.2.1 卵母细胞的采集
        3.2.2 OPS 制备
        3.2.3 牛 GV 期卵母细胞液氮玻璃化冷冻与解冻
        3.2.4 牛 GV 期卵母细胞液氦玻璃化冷冻与解冻
        3.2.5 卵母细胞的体外成熟
        3.2.6 牛卵母细胞成熟评定方法
        3.2.7 牛卵母细胞总 RNA 提取和逆转录反应
        3.2.8 引物设计与 qRT-PCR 分析
        3.2.9 试验设计
    3.3 试验结果
        3.3.1 普通 PCR 检测产物检测结果
        3.3.2 QTR-PCR 检测结果
    3.4 讨论
第4章 结论
参考文献
缩略语词汇表
致谢
攻读硕士学位期间的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响[J]. 王静,林嘉鹏,石庆华,陈博,汪立芹,赵云程,黄俊成.  畜牧兽医学报. 2011(09)
[2]牛卵母细胞玻璃化冷冻对基因mRNA表达量的影响[J]. 林嘉鹏,王静,赵云程,陈童,汪立芹,陈博,黄俊成.  中国实验动物学报. 2011(02)
[3]母源基因Gdf9、Zar1、Mater和Dnmt1 mRNA在绵羊卵母细胞和早期胚胎中的表达[J]. 侯敏,林嘉鹏,白洁,赵云程,汪立琴,陈世彬,叶小芳,黄俊成.  中国草食动物. 2010(02)
[4]牦牛生长分化因子-9基因cDNA克隆及序列分析[J]. 尹荣华,字向东,马志杰,陈绍威,张大伟,梁冠男.  畜牧兽医学报. 2009(07)
[5]奶牛卵丘细胞和共培养细胞对体外受精胚胎发育的影响[J]. 马红.  广东农业科学. 2009(06)
[6]凋亡调节基因bcl-2/bax与卵巢早衰的关系[J]. 王雪峰,何援利.  生殖与避孕. 2008(08)
[7]猪GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存技术研究[J]. 戴建军,芮荣,武彩红,葛立军,卢庆.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2007(08)
[8]卵母细胞冷冻保存研究进展[J]. 李晓晨.  上海畜牧兽医通讯. 2007(02)
[9]牛GV期卵母细胞冷冻保存后发育潜力的研究[J]. 包华琼,李跃民,王新庄,孙岚.  动物医学进展. 2006(07)
[10]卵丘在卵母细胞成熟中的作用[J]. 岳顺利,周佳勃,严云勤.  细胞生物学杂志. 2005(04)

博士论文
[1]牛IVF胚胎培养与冷冻方法优化[D]. 禹学礼.西北农林科技大学 2010

硕士论文
[1]Gdf9、Dnmt1、Zar1、Mater基因在绵羊卵母细胞、卵丘细胞和胚胎中的表达分析[D]. 侯敏.新疆农业大学 2010
[2]DNA甲基化和组蛋白修饰调节牛ZAR1基因表达的研究[D]. 辛鹏慧.内蒙古大学 2009
[3]猪生发泡期卵母细胞的玻璃化冷冻保存[D]. 戴志俊.安徽农业大学 2008
[4]蒙古绵羊Bcl-2/Bax基因cDNA的克隆及序列分析[D]. 郭宏儒.内蒙古农业大学 2008



本文编号：3078886