鸡柔嫩艾美耳球虫微线蛋白-2的真核表达及免疫原性研究

发布时间：2021-03-13 04:01

　　鸡球虫病是由顶复门寄生虫——艾美耳球虫引起的世界范围内严重危害养禽业发展的寄生虫病，给养禽业带来巨大的经济损失。目前，养禽业采用抗球虫药、强毒活疫苗、减毒活疫苗来防控鸡球虫病。但他们自身存在的一些缺点使得未能有效防控鸡球虫病，因而研发高效的新型疫苗已成为缓解养禽业亏损的当务之急。基因工程重组蛋白疫苗为新型疫苗的研发提供了重要方向，而筛选出鸡球虫生活史中的特异性抗原对抗球虫重组蛋白疫苗的研制的至关重要。柔嫩艾美尔球虫微线蛋白2（EtMIC2）可以作为新型疫苗的候选抗原来阻断子孢子侵入宿主细胞。为了获得充足的抗原，必须实现EtMIC2蛋白的高效大量表达。而在酵母真核表达系统中，巴斯德毕赤酵母表达系统不仅具有基因操作简单、发酵生长速度快、外源蛋白表达量高、发酵成本低廉等优点，还具有高等真核表达系统的蛋白翻译后的各种修饰作用，如蛋白磷酸化和糖基化修饰功能等。该系统所表达产物的免疫学活性和生物学功能与天然蛋白质较为接近。因此，在本研究中，我们从SD-01株柔嫩艾美耳球虫的第二代裂殖子总RNA中扩增并克隆了EtMIC2基因，进一步构建真核表达载体pPIC9-EtMIC2和原核表达载体PET30a-... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

柔嫩艾美耳球虫7d生活史Fig.1-17dayslifecycleofEimeriatenella孢子生殖：球虫卵囊随鸡的粪便排到外界环境中，此时的卵囊称为未孢子化卵囊，

坏死细胞、组织被微生物分解产生的有毒物质还有可能导致鸡体皮的破坏更容易导致继发性感染。现将各种球虫的临床症状及病艾美耳球虫病：3~6 周龄雏鸡发病率最高，感染后有 4 天的潜在期精神萎顿，羽毛逆立，缩头闭眼，嗉囊胀满，喜饮水无食欲，喜第 5 天，肛门周围羽毛被血液污染，继而由于自体中毒而出现共痹、痉挛等神经症状。出现排泄血便甚至鲜血，贫血明显，血便死亡，严重时死亡率高达 80%。多数鸡第 7 天停止出血，第 8 天 8 天后尚存活的雏鸡，如果管理良好即专项康复。病理变化局限，个别情况下出血部位超过回-盲连接处扩展到其它部位的消化拇指，内部充满混有血液的组织块等内容物，严重者盲肠组织坏芯（图 1-2）。

感染后 4~5 天排泄大量带粘液的血便，有时引起条内存活的鸡，体质衰弱，不能迅速康复，多数因继发感染细菌或于柔嫩艾美尔球虫球虫。病理变化为小肠长度缩短到约为正常长正常的 2 倍。最显著的炎症反应见于小肠中段，尽管该种配子生至多有中度炎症反应，小肠粘膜出现出血点和灰白色针尖大小到肠内容物呈暗红色或猩红色而且含血凝块或纤维蛋白，严重感染呈现干酪样侵蚀，在粪便中出现凝固的血液和粘膜碎块（图 1-3


本文编号：3079537