动物组织中喹噁啉类药物残留检测方法研究

发布时间：2021-03-16 08:35

　　喹嗯啉类药物作为饲料添加剂在我国畜牧业上应用广泛,其在动物体内众多代谢物对药效和毒性均会产生影响。研究建立该类药物及代谢物残留的快速筛选和确证分析方法能够为其安全评估和药理毒理学研究提供参考技术。对喹乙醇进行结构改造合成半抗原,采用活化酯法与牛血清白蛋白偶联后免疫新西兰大白兔,获得喹嗯啉类多克隆抗体,建立了猪肝中8种喹嗯啉类药物及代谢物（喹乙醇、卡巴氧、乙酰甲喹、喹烯酮、1—脱氧喹赛多、脱二氧喹烯酮、脱二氧乙酰甲喹和喹嗯啉—2—羧酸）残留的间接酶联免疫吸附检测方法。包被原采用2-丙烯酸-1,4-脱二氧喹噁啉。该方法的IC50为0.10-2.50μg·L-1。样品经0.2mol·L-1-乙腈（3+5,v/v）提取,浓缩后检测。在1-100μg·kg-1的添加浓度范围内,各化合物的平均回收率为80.14-96.90%,批内变异系数为5.67-13.82%,批间变异系数为6.22-14.19%。方法的检测限为0.03-0.79μg·kg-1。采用活化酯法合成3—甲基喹噁啉—2—羧酸（MQCA）—牛血清白蛋白偶联物后免疫巴比小鼠,采用体内腹水诱生法获得MQCA的单克隆抗体,建立了猪肝组织中MQ... 

【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：133 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
图表目录
缩略语表
第一章 喹噁啉类药物研究背景
    1 研究目的和意义
    2 喹噁啉类药物研究进展
        2.1 喹噁啉类药物的种类及介绍
        2.2 喹噁啉类药物的毒性研究
        2.3 喹噁啉类药物的代谢研究
        2.4 喹噁啉类药物的残留检测技术研究
    3 研究内容和方法
        3.1 研究内容
        3.2 研究方法
第二章 喹噁啉类药物多残留ELISA方法研究
    1 材料与方法
        1.1 试剂和药品
        1.2 仪器与设备
        1.3 酶联免疫检测溶液系统
    2 方法
        2.1 喹噁啉类药物半抗原和抗原的制备
        2.2 喹噁啉类药物抗体的制备
        2.3 ELISA检测条件的优化
        2.4 ELISA检测方法的建立
    3 结果分析
        3.1 半抗原的合成和纯化鉴定
        3.2 人工抗原的合成和鉴定
        3.3 抗血清的筛选
        3.4 包被原的筛选
        3.5 包被原稀释度和抗体稀释度的确定
        3.6 包被温度和时间的优化
        3.7 竞争时间的选择
        3.8 抗体特异性的检测
        3.9 喹噁啉类药物及主要代谢物标准曲线的建立
        3.10 ELISA方法灵敏度的测定
        3.11 ELISA方法准确度和精密度的测定
        3.12 阳性样品的检测
    4 讨论
    5 小结
第三章 3-甲基喹噁啉-2-羧酸的ELISA方法研究
    1 材料与设备
        1.1 试剂和药品
        1.2 仪器与设备
        1.3 试验动物和融合细胞
        1.4 单克隆抗体制备溶液系统
        1.5 酶联免疫检测溶液系统
        1.6 标准溶液和其它溶液
    2 方法
        2.1 免疫原和包被原的制备和鉴定
        2.2 单克隆抗体的制备
        2.3 ELISA检测程序
        2.4 ELISA检测条件的优化
        2.5 猪肉组织样品的检测
        2.6 方法的准确度、精密度和灵敏度评估
        2.7 阳性样品的制备和确证检测
    3 结果与分析
        3.1 免疫原和包被原的合成和鉴定
        3.2 单克隆抗体的制备
        3.3 ELISA检测条件的优化
        3.4 ELISA方法特异性的检测
        3.5 ELISA方法的验证
        3.6 阳性样品检测
    4 讨论
    5 小结
第四章 喹烯酮及其代谢物的残留确证分析方法研究
    1 材料与设备
        1.1 药品及代谢物来源
        1.2 试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 主要溶液
    2 试验方法
        2.1 动物实验
        2.2 仪器分析条件
        2.3 样品前处理过程
    3 结果与分析
        3.1 UPLC-Q-TOF MS条件的优化
        3.2 喹烯酮及其代谢物的Q-TOF-MS定量分析方法的建立
        3.3 喹烯酮及其代谢物的Q-TOF-MS/MS定性确证分析
        3.4 喹烯酮及其代谢物的Q-TOF-MS定量分析方法的验证
        3.5 实际样品检测
    4. 讨论
        4.1 方法学讨论
        4.2 样品前处理方法的研究
    5. 小结
第五章 喹赛多及其代谢物的残留确证分析方法研究
    1 材料与设备
        1.1 材料
        1.2 主要仪器
        1.3 主要溶液
    2 试验方法
        2.1 样品的制备
        2.2 样品前处理
        2.3 检测条件的设置
        2.4 基质匹配标准曲线的绘制
        2.5 检测限与定量限的测定
        2.6 准确度、精密度和重复性的测定
        2.7 样品的确证
    3 结果与分析
        3.1 仪器分析条件的优化
        3.2 检测方法的线性关系验证
        3.3 检测限和定量限的确定
        3.4 方法的准确度、精密度和重复性
        3.5 方法的确证分析
    4 讨论
    5 小结
第六章 喹噁啉类药物及其主要代谢物的多残留确证分析方法研究
    1 材料与设备
        1.1 药品及代谢物来源
        1.2 试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 主要溶液
    2 方法
        2.1 样品的制备和来源
        2.2 仪器分析条件
        2.3 样品前处理过程
    3 结果与分析
        3.1 样品溶解液对13种化合物色谱行为的影响
        3.2 质谱条件的优化研究
        3.3 基质匹配标准曲线的制备
        3.4 检测限和定量限的确定
        3.5 方法的准确度、精密度和重复性
        3.6 方法的确证分析
    4 讨论
    5 小结
第七章 结论和创新点
    1 结论
        1.1 制备了喹噁啉类药物多克隆抗体,建立了喹噁啉类药物及其代谢物多残留的酶联免疫测定方法
        1.2 制备了3-甲基喹噁啉-2-羧酸单克隆抗体,建立了三种喹噁啉类药物共同代谢物的酶联免疫测定方法
        1.3 建立了喹烯酮及其代谢物多残留的超高效液相色谱—飞行时间质谱确证分析方法
        1.4 建立了喹赛多及其代谢物多残留的超高效液相色谱—串联质谱确证分析方法
        1.5 建立了喹噁啉类药物及其代谢物多残留的超高效液相色谱—串联质谱确证分析方法
    2 创新点
        2.1 制备了包被半抗原2-丙烯酸-1,4-二氮喹噁啉,并将其用于酶联免疫检测方法
        2.2 建立了猪肝中8种喹噁啉类药物及代谢物多残留的ELISA测定方法和3-甲基喹噁啉-2-羧酸残留的ELISA快速筛选方法
        2.3 建立了动物组织中喹烯酮及其代谢物、喹赛多及其代谢物和13种喹噁啉类药物及代谢物多残留的液相色谱-质谱联用确证分析方法
参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]高效液相色谱-电喷雾离子阱飞行时间质谱法鉴定乙酰甲喹及其代谢物[J]. 刘迎春,司红彬,贺利民,丁焕中,黄显会,陈建新,陈杖榴,曾振灵.  分析化学. 2010(01)
[2]乙酰甲喹在试验性肝功能损害家兔体内的药动学研究[J]. 陆晨薇,李引乾,关永娟,张煜波,白东英,苗小楼,熊永洁.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2008(12)
[3]猪饲料中喹噁啉类药物酶联免疫检测方法的建立[J]. 赵春保,彭大鹏,陶燕飞,陈冬梅,袁宗辉.  中国农业科技导报. 2008(S2)
[4]喹乙醇在我国的应用研究进展[J]. 马敬中,武冬梅,汪有生.  化学世界. 2008(10)
[5]喹乙醇的应用研究进展[J]. 董尧,王前勇.  畜牧兽医杂志. 2008(03)
[6]乙酰甲喹在绵羊体内的药物动力学研究[J]. 黄勇旗,李引乾,杨亚军,苗小楼,谢沄,白东英,陆晨薇,孙黎,马宝祯.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2008(02)
[7]喹乙醇在水产动物中的应用及其安全性评价[J]. 杨波,陈吉红.  兽药与饲料添加剂. 2006(02)
[8]新兽药喹烯酮亚慢性经口毒性研究[J]. 许建宁,王全凯,崔涛,黄齐颐,王建国.  中国兽药杂志. 2005(03)
[9]猪食用组织中喹喔啉-2-羧酸的高效液相色谱检测方法[J]. 邱银生,袁宗辉,殷居易.  中国兽医学报. 2003(03)
[10]喹赛多对家禽常见病原菌的体外抗菌活性研究[J]. 黄玲利,袁宗辉,范盛先,刘登才,陈品,王大菊.  华南农业大学学报. 2003(02)

博士论文
[1]喹唑啉类化合物库的固相合成、生物活性筛选及钐试剂在有机合成中的应用[D]. 章砚东.浙江大学 2007
[2]喹赛多促进猪生长的内分泌机理研究[D]. 朱惠玲.华中农业大学 2007
[3]新型喹唑啉类衍生物合成及生物活性研究[D]. 刘刚.贵州大学 2006
[4]喹赛多对仔猪及幼龄牛羊生长的影响研究[D]. 丁明星.华中农业大学 2006
[5]喹赛多在肉鸡的有效性与安全性研究[D]. 黄玲利.华中农业大学 2006
[6]液相组合合成喹喔啉醇类化合物化学库及其优化和ADME特性初探[D]. 张亮.中国协和医科大学 2005
[7]喹乙醇对鲤鱼的生理生化效应及其在组织中的残留[D]. 叶继丹.东北农业大学 2003
[8]喹赛多在猪体内的药动学和残留研究[D]. 邱银生.华中农业大学 2003

硕士论文
[1]猪肝细胞黄嘌呤氧化还原酶代谢喹赛多的结构和功能研究[D]. 陈持纲.华中农业大学 2012
[2]喹赛多对恒化器模型中人肠道菌群的影响[D]. 郭卫革.华中农业大学 2012
[3]喹噁啉类在大鼠和猪肝微粒体中脱氧速率与肝细胞中毒性的研究[D]. 张华海.华中农业大学 2010
[4]氚标乙酰甲喹的合成及其在动物体内的处置研究[D]. 尹伏军.华中农业大学 2010
[5]小鼠喹乙醇急性与蓄积性中毒试验研究[D]. 罗明刚.四川农业大学 2010
[6]喹烯酮抗菌促生长作用及在鲤、斑点叉尾鮰体内的药物动力学研究[D]. 杨莉.四川农业大学 2010
[7]喹唑啉化合物库内小分子促小鼠胚胎干细胞心肌分化活性筛选及相关分子事件研究[D]. 胡颖.浙江大学 2010
[8]喹唑啉类抗肿瘤化合物的设计、合成及生物活性筛选[D]. 丁文波.浙江大学 2010
[9]喹喔啉酮类化合物逆转多药耐药作用及QA3逆转机制研究[D]. 孙丽蕊.山东大学 2009
[10]HPLC同时测定饲料中喹噁啉类三种药物方法的研究[D]. 刘发全.安徽农业大学 2008



本文编号：3085744