单增李斯特菌LM90侵染人/鼠脑微血管内皮细胞cDNA文库构建

发布时间：2021-03-19 07:57

　　单核细胞增多性李斯特菌（listeria monocytogenes, LM）是重要的食源性胞内致病菌，临床主要引起脑膜炎，脑膜脑炎，围产期母畜和胎儿感染。该病的发生主要是源于该菌能穿过动物三大屏障：肠道屏障、血脑屏障、血胎屏障。LM可以跨越血脑屏障中主要组成结构—脑微血管内皮细胞间紧密连接，表明LM表面存在着不同的配体，这些配体可以与内皮细胞上受体相结合，进而使其进入宿主细胞内与细胞内的蛋白相互作用。为了筛选与LM表面蛋白相互作用的宿主内皮细胞蛋白，本研究以人脑微血管内皮细胞（原代）、鼠脑微血管内皮细胞（传代）为体外血脑屏障模型，通过LM侵染上述细胞建立cDNA文库，为酵母双杂交的筛选奠定基础。1.李斯特菌的PCR检测：根据已公布李斯特菌各菌种保守基因Iap和lmo0038的核苷酸序列，合成了能够区分李斯特菌不同种的特异性引物，对实验室保存的菌种进行PCR的验证，本试验中李斯特菌各菌株的PCR鉴定结果为：种1、种2、种3扩增出1108bp特异性条带,确定为塞氏李斯特菌，种5、干粉3、干粉4扩增出720bp和403bp特异性条带，确定单核细胞增多性李斯特菌。2.LM对人／鼠脑微血管内皮... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

单增李斯特菌感染宿主细胞过程及涉及相关毒力因子Figure3-1TheListeriamonocytogenescellinfectioncycleandthevirulencefactorsinvolvedinthesuccessivesteps.

cDNA合成原理简要步骤Figure4-1：SchematicoutlineofcDNAsynthesis

循环数 步1 预30 循1 延1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。钾平板筛选氏阳性菌，染色后蓝色小杆菌或球杆状菌芽胞，无荚膜。菌体大小为宽 0.4~ 0.5μm形成易于辨认溶血的、黑色、细小的菌落定，PCR 预扩增片段大小与结果为：试验中种 2、种 3 扩增序列大小为 1108bp,即为塞小为 720bp 和 403bp，即为单核细胞增生

【参考文献】：
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本文编号：3089248