胰岛素抵抗对蛋鸡原代肝细胞脂质代谢的影响及机制研究
发布时间：2021-03-20 13:30
蛋鸡脂肪肝出血综合征（FLHS）是主要营养代谢病之一。研究表明胰岛素水平与营养代谢病的发生发展有密切的关系。但关于胰岛素信号通路紊乱与FLHS发病机制的研究甚少。因此,基于本课题组在前研究发现FLHS的蛋鸡出现高胰岛素、高葡萄糖血症,且胰岛素信号通路显著改变的结果,将进一步探索胰岛素信号通路紊乱与蛋鸡肝细胞脂质代谢的关系。本研究通过蛋鸡肝脏原代细胞体外实验,利用二步原位灌流法获得高产蛋鸡原代肝细胞,然后用高浓度葡萄糖处理细胞建立胰岛素抵抗模型（IR）,探讨IR对蛋鸡肝细胞脂质代谢的影响;用mTOR抑制剂rapamycin处理细胞48h,探究rapamycin对蛋鸡肝细胞mTOR的抑制作用和细胞脂质合成的影响;rapamycin处理细胞后添加葡萄糖培养细胞,分析mTOR是否通过负反馈调节IR促进蛋鸡肝细胞脂质合成。结果如下:（1）与对照组相比,葡萄糖（11、33、44mmol/L）处理细胞12h能够增强细胞对葡萄糖的消耗能力（P<0.01）,而处理细胞24h和36h则显著降低消耗葡萄糖的能力（P<0.05）表明IR模型建立成功;其中55mmol/L葡萄糖处理细胞12h没有显著...
【文章来源】：江西农业大学江西省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
胰岛素及论信分通路（DoupontJ.etal.2009）
图 2-1 高严蛋鸡原学肝细胞论与时间的形态学观察100X (0h)；200X（3h，24h 除 8 d）Fig 2-1 Morphological observation for primary hepatocytes of laying hens with peak eggproduction at different time.100X (0h)；200X（3h，24h and 8 d）（2）高严蛋鸡原学肝细胞 ALB 的分泌除糖原鉴使如图 2-2 所作，本实验可用灌流法分离与的原学肝细胞在接板年第 1 天就开始分泌 ALB，并分泌量持续增长，在第 3 天达到最高。第 4 天分泌量开始减少，但从第天开始，ALB 分泌量又开始增长，与直到第 9 天。培养细胞 48h 时进严糖原染色，细胞学多糖如染通除紫红色，结通所阳性。
2.2 IR 对胰岛素信分通路相本基因 mRNA 除蛋白他达的影响如图 2-4 所作，IR 组 mTOR，S6K1 除 4EBP 基因 mRNA 水平他达与正常组相比显著升高（P<0.05），但 InsR mRNA 他达水平没如升高，与正常组差异论显著（P>0.05Western blot 结通他明 IR 组细胞学 S6K1 的磷酸化蛋白他达增高（图 2-5）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]胰岛素抵抗细胞与大鼠模型的建立及其应用[J]. 俞发荣,连秀珍,谢明仁,李作平. 中国实验动物学报. 2013(06)
[2]HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立与鉴定[J]. 李秀丽,贺嵩敏,朱莹,冯兵,黄小千,陈婷,郑广娟. 中国实验方剂学杂志. 2013(05)
[3]胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立[J]. 刘晓华,江湖,李海星,李超波,曹郁生. 食品科学. 2012(19)
[4]人肝癌细胞胰岛素抵抗模型建立及有效中药成分的筛选[J]. 刘志霞,韩淑英,李继安. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(28)
[5]成年鸡原代肝细胞的原位分离和长期培养[J]. 刘开永,黄显会,高海,贺利民,曾振灵. 中国兽医学报. 2009(09)
[6]体外胰岛素抵抗细胞模型的建立及在药物筛选中的应用[J]. 张汝学,贾正平,李茂星,郭丽民,张小华. 中国药理学通报. 2008(07)
[7]胰岛素抵抗模型的建立与评价[J]. 王利,褚宏恩,孙兆峰,夏作理. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(24)
[8]蜕皮甾酮对胰岛素抵抗细胞模型胰岛素敏感性和糖代谢的影响[J]. 陈秋,夏永鹏,邱宗荫. 中国药理学通报. 2006(04)
[9]GOD-POD法微量化测定方法的建立及其在3T3-L1脂肪细胞和HepG2细胞糖摄取中的应用[J]. 杨桂枝,高小平,晏菊芳,欧可群. 四川解剖学杂志. 2003(01)
[10]高蔗糖膳食诱发大鼠胰岛素抵抗的研究[J]. 东富云,曹又陵,汤新之. 实验动物科学与管理. 1998(04)
本文编号：3091082
【文章来源】：江西农业大学江西省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
胰岛素及论信分通路（DoupontJ.etal.2009）
图 2-1 高严蛋鸡原学肝细胞论与时间的形态学观察100X (0h)；200X（3h，24h 除 8 d）Fig 2-1 Morphological observation for primary hepatocytes of laying hens with peak eggproduction at different time.100X (0h)；200X（3h，24h and 8 d）（2）高严蛋鸡原学肝细胞 ALB 的分泌除糖原鉴使如图 2-2 所作，本实验可用灌流法分离与的原学肝细胞在接板年第 1 天就开始分泌 ALB，并分泌量持续增长，在第 3 天达到最高。第 4 天分泌量开始减少，但从第天开始，ALB 分泌量又开始增长，与直到第 9 天。培养细胞 48h 时进严糖原染色，细胞学多糖如染通除紫红色，结通所阳性。
2.2 IR 对胰岛素信分通路相本基因 mRNA 除蛋白他达的影响如图 2-4 所作，IR 组 mTOR，S6K1 除 4EBP 基因 mRNA 水平他达与正常组相比显著升高（P<0.05），但 InsR mRNA 他达水平没如升高，与正常组差异论显著（P>0.05Western blot 结通他明 IR 组细胞学 S6K1 的磷酸化蛋白他达增高（图 2-5）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]胰岛素抵抗细胞与大鼠模型的建立及其应用[J]. 俞发荣,连秀珍,谢明仁,李作平. 中国实验动物学报. 2013(06)
[2]HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立与鉴定[J]. 李秀丽,贺嵩敏,朱莹,冯兵,黄小千,陈婷,郑广娟. 中国实验方剂学杂志. 2013(05)
[3]胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立[J]. 刘晓华,江湖,李海星,李超波,曹郁生. 食品科学. 2012(19)
[4]人肝癌细胞胰岛素抵抗模型建立及有效中药成分的筛选[J]. 刘志霞,韩淑英,李继安. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(28)
[5]成年鸡原代肝细胞的原位分离和长期培养[J]. 刘开永,黄显会,高海,贺利民,曾振灵. 中国兽医学报. 2009(09)
[6]体外胰岛素抵抗细胞模型的建立及在药物筛选中的应用[J]. 张汝学,贾正平,李茂星,郭丽民,张小华. 中国药理学通报. 2008(07)
[7]胰岛素抵抗模型的建立与评价[J]. 王利,褚宏恩,孙兆峰,夏作理. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(24)
[8]蜕皮甾酮对胰岛素抵抗细胞模型胰岛素敏感性和糖代谢的影响[J]. 陈秋,夏永鹏,邱宗荫. 中国药理学通报. 2006(04)
[9]GOD-POD法微量化测定方法的建立及其在3T3-L1脂肪细胞和HepG2细胞糖摄取中的应用[J]. 杨桂枝,高小平,晏菊芳,欧可群. 四川解剖学杂志. 2003(01)
[10]高蔗糖膳食诱发大鼠胰岛素抵抗的研究[J]. 东富云,曹又陵,汤新之. 实验动物科学与管理. 1998(04)
本文编号：3091082
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