H1、H3亚型猪流感病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

发布时间：2021-03-20 16:01

　　为建立一种快速、准确地检测H1和H3亚型猪流感病毒（swine influence virus,SIV）的方法,根据H1和H3亚型SIV血凝素（hemagglutinin,HA）基因保守序列,分别设计2对特异性引物和2条Taq Man探针,建立双重实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法敏感性高,可检测到最低拷贝数为102拷贝/μL;重复性良好,重复孔Ct值的变异系数均在5%以下;特异性好,除H1和H3亚型SIV外,H4、H5、H7、H9亚型SIV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒检测均为阴性;在田间样品中成功检出1株H1和1株H3亚型SIV,检出率为1.16%。该方法准确、快速、灵敏、特异,可为H1、H3亚型SIV的快速鉴别检测及流行病学调查提供有效的技术手段。 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2017,44(10)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 毒株
        1.1.2 主要试剂和仪器
    1.2 方法
        1.2.1 引物及探针的设计与合成
        1.2.2 RNA或DNA提取
        1.2.3 标准阳性质粒的制备与鉴定
        1.2.4 反应体系与程序的优化
        1.2.5 标准曲线的绘制
        1.2.6 敏感性试验
        1.2.7 特异性试验
        1.2.8 重复性试验
        1.2.9 田间样品的检测
2 结果
    2.1 双重实时荧光定量RT-PCR反应条件优化
    2.2 标准曲线的建立
    2.3 敏感性试验结果
    2.4 特异性试验结果
    2.5 重复性试验结果
    2.6 田间样品的检测
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]H1亚型猪流感病毒一步法实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 刘好朋,胡京京,唐续,裴仉福,李冰,李琳,陈瑞爱,贺东生.  中国畜牧兽医. 2014(11)
[2]猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 郭慧娟,李秀丽,张国伟,鄢明华,李海花,李富强.  中国畜牧兽医. 2014(05)
[3]猪流感病毒概述[J]. 杨帅,朱闻斐,舒跃龙.  病毒学报. 2013(03)
[4]猪流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 张太翔,凌宗帅,岳志芹,徐彪,梁成珠,刘文鹏,张焕海,张艺兵.  中国畜牧兽医. 2012(06)
[5]猪流感病毒SYBR GreenⅠ定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 张鹏超,师小潇,哈卓,刘永杰,刘惠莉.  中国预防兽医学报. 2010(10)
[6]A型猪流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. 欧阳振宇,唐连飞,朱中武,肖家勇,孟芳,黄萍,吴愈柏.  中国畜牧兽医. 2010(09)
[7]同时检测新甲型H1N1及人季节性H1N1和H3N2流感病毒的单管多重荧光定量PCR方法[J]. 秦萌,王大燕,黄芳,聂凯,曲梅,王淼,韩峰,赵翔,成艳辉,舒跃龙,马学军.  病毒学报. 2010(02)
[8]猪流感诊断技术研究进展[J]. 毕保良,李进涛.  中国畜牧兽医. 2009(10)
[9]H3亚型猪流感病毒荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 王云龙,陈小科,韩洁,李玉林,李恒思,王真,邓黎黎.  动物医学进展. 2009(06)
[10]猪流感研究进展[J]. 张明明,王强,王小辉.  安徽农业科学. 2009(16)

硕士论文
[1]五重荧光定量RT-PCR检测甲型流感病毒方法的建立和应用及2010～2013年杭州地区人H3N2病毒流行病学分析[D]. 戴玉柱.浙江大学 2015



本文编号：3091271