抗马动脉炎病毒病毒N蛋白单克隆抗体的制备及表位鉴定和固相竞争ELISA方法的建立
发布时间：2021-03-22 01:53
马病毒性动脉炎（Equine viral arteritis,EVA）是由马动脉炎病毒（Equine arteritis virus,EAV）引起的，在马属动物中通过生殖道和呼吸道途径传播的一种传染病。本研究以引进参考毒株Bucyrus株为基础毒株，通过病毒培养，提取RNA并通过RT-PCR获得了N基因，用原核表达载体pET32a构建重组质粒pET32a-N并转化Rosetta（DE3）。通过对表达条件的不断优化，N蛋白最终以90%上清形式表达，并用镍柱进行纯化。经Western blot鉴定N蛋白免疫原性良好，可作为免疫原用于单抗的制备。将纯化的N蛋白作为免疫原，免疫4-6周龄雌性BALB/c小鼠，通过细胞融合技术制备了5株单抗，分别命名为1C11、2B1、2B3、3F11、8C4。经3次克隆化培养后，Western blot、间接免疫荧光和间接ELISA鉴定该5株单抗均针对N蛋白，而不与His标签反应。经竞争活性检测，单抗2B3、8C4具有良好的竞争活性，可用于竞争ELISA方法的建立。将2株竞争活性的单抗扩大培养，制备腹水，通过效价和亲和力对腹水进行评价，最终选用单抗8C4用于诊...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
N基因的扩增Fig.2.1AmplificationofNgene
图 2.2 重组质粒 pET-N 的 PCR 和酶切鉴定.2 Identification of the recombinant plasmid pET-N by PCR and restricted e000 DNA Marker ; 1: pET-N digested with BamHⅠand SalⅠ2: pET-N ideMarker DL2000SDS-PAGE 分析阳性的重组质粒 pET32a-N 转化 Rosetta（DE3）感受态，挑菌导，诱导完毕后对菌液超声破碎并纯化，纯化后对其进行到清晰地目的条带（图 2.3）。
图 2.2 重组质粒 pET-N 的 PCR 和酶切鉴定on of the recombinant plasmid pET-N by PCR and restricted enzyme digestionarker ; 1: pET-N digested with BamHⅠand SalⅠ2: pET-N identified by PCR; M2: DMarker DL2000 分析质粒 pET32a-N 转化 Rosetta（DE3）感受态，挑菌摇菌后对菌液在毕后对菌液超声破碎并纯化，纯化后对其进行 SDS-PAGE 分析的条带（图 2.3）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]马动脉炎病毒分子生物学研究进展[J]. 韦祖樟,袁世山. 病毒学报. 2008(05)
[2]马动脉炎病毒GL蛋白主要抗原域的表达及间接ELISA的初步建立[J]. 梁成珠,曹瑞兵,魏建超,朱来华,陈溥言,高宏伟. 微生物学报. 2006(03)
[3]ICTV第八次报告的最新病毒分类系统[J]. 洪健,周雪平. Virologica Sinica. 2006(01)
[4]马病毒性动脉炎的研究现状[J]. 杨松,刘永华,彭永刚,王佳丽. 中国预防兽医学报. 2005(06)
[5]实时定量RT-PCR检测马动脉炎病毒[J]. 梁成珠,杨松,高宏伟,朱来华,蔡梅红,王谦滨,陈溥言. 中国兽医学报. 2005(02)
[6]马的病毒性动脉炎[J]. 黄正才. 四川畜牧兽医. 1997(04)
硕士论文
[1]马流感病毒抗原捕捉ELISA检测方法的建立及其初步应用[D]. 姬媛媛.中国农业科学院 2011
本文编号：3093761
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
N基因的扩增Fig.2.1AmplificationofNgene
图 2.2 重组质粒 pET-N 的 PCR 和酶切鉴定.2 Identification of the recombinant plasmid pET-N by PCR and restricted e000 DNA Marker ; 1: pET-N digested with BamHⅠand SalⅠ2: pET-N ideMarker DL2000SDS-PAGE 分析阳性的重组质粒 pET32a-N 转化 Rosetta（DE3）感受态，挑菌导，诱导完毕后对菌液超声破碎并纯化，纯化后对其进行到清晰地目的条带（图 2.3）。
图 2.2 重组质粒 pET-N 的 PCR 和酶切鉴定on of the recombinant plasmid pET-N by PCR and restricted enzyme digestionarker ; 1: pET-N digested with BamHⅠand SalⅠ2: pET-N identified by PCR; M2: DMarker DL2000 分析质粒 pET32a-N 转化 Rosetta（DE3）感受态，挑菌摇菌后对菌液在毕后对菌液超声破碎并纯化，纯化后对其进行 SDS-PAGE 分析的条带（图 2.3）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]马动脉炎病毒分子生物学研究进展[J]. 韦祖樟,袁世山. 病毒学报. 2008(05)
[2]马动脉炎病毒GL蛋白主要抗原域的表达及间接ELISA的初步建立[J]. 梁成珠,曹瑞兵,魏建超,朱来华,陈溥言,高宏伟. 微生物学报. 2006(03)
[3]ICTV第八次报告的最新病毒分类系统[J]. 洪健,周雪平. Virologica Sinica. 2006(01)
[4]马病毒性动脉炎的研究现状[J]. 杨松,刘永华,彭永刚,王佳丽. 中国预防兽医学报. 2005(06)
[5]实时定量RT-PCR检测马动脉炎病毒[J]. 梁成珠,杨松,高宏伟,朱来华,蔡梅红,王谦滨,陈溥言. 中国兽医学报. 2005(02)
[6]马的病毒性动脉炎[J]. 黄正才. 四川畜牧兽医. 1997(04)
硕士论文
[1]马流感病毒抗原捕捉ELISA检测方法的建立及其初步应用[D]. 姬媛媛.中国农业科学院 2011
本文编号：3093761
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3093761.html
