猪巨细胞病毒快速检测方法的建立及河南猪群流行病学调查
发布时间：2021-03-23 16:30
猪巨细胞病毒病是由致猪发病的猪巨细胞病毒（Porcine Cytomegalovirus, PCMV）引起的种条件性传染病。长期以来由于对该病研究不够深入,其对猪群的危害性没有得到足够关注。但近年来研究发现该病毒主要在猪肺泡巨噬细胞中增殖破坏机体免疫系统,造成机体感染后抵抗力降低,易并发和继发其他病原体（如猪蓝耳病）感染,PCMV对养猪业的危害逐渐引起了行业人士的高度重视。因此,开展该病的快速诊断方法研究和流行病学调查,对降低该病对养猪业的危害具有重要意义。本研究应用基因工程技术对PCMV的DNA聚合酶基因特异性片段进行克隆和序列测定；大量比对GenBank中PCMV DNA聚合酶基因序列,设计PCR和荧光定量PCR（FQ-PCR）特异性引物和TaqMan荧光探针,优化反应条件,建立PCMVPCR和FQ-PCR检测方法并对该方法的敏感性、特异性和重复性进行验证,对疑似PCMV感染的临床样品采采用FQ-PCR方法进行应用检测,同时与常规PCR方法进行对比实验,对检测结果为PCMV阳性猪的不同组织器官和血清进行病毒含量测定；对2009年～2011年河南省部分猪群进行了PCMV感染和混合感染...
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：87 页
【学位级别】：博士
【图文】：
一，巨细胞?
1.1.1.4抵抗力巨细胞病^^易被酸制剂、胎溶剂、紫外线灭活，乙酸、氣仿丨打机溶削处理可使巨细胞病毒丧火感染力。排山猪体外的猪巨细胞病屯抵抗力弱，表面活性类消毋药物就存消毋效见。猪巨细胞病:?在-8(rc条件下可存活一年以上，L々期保存的最适合温度娃-196°C (液減）；-7(rc反S冻融3次仍J%存感染力，在37°C条件'卜4小时仍A.冇感染力；37°C保持24小时则火去感染力；50°C时20分钟不失去感染力，但30分钟后则火去活性135)61。1.1.1.5病毒培养猪巨细胞病毒在体外增殖JV有一定难度，采W猪丨；？或猪寧丸原代细胞、末梢血液中的巨哩细胞以及猪贤传代细胞培养，均不能增殖，但S接叫已感染了病毒的猪或寧丸作细胞带毒培养，则可充分增殖，开出现细胞病变[37]。猪巨细胞病毒可在肺泡巨哩细胞中生L<：增殖，丨H没有被病毋污染的3周龄至5周龄猪的肺泡巨哩细胞进行培养，可100%地分离山猪巨细胞病岛，但病毒增殖速度非常缓慢[38]，接种后3天?4大才可看到巨细胞形成和核内包涵体，偶尔还可见细胞衆内包涵体，但其人小比核内包涵体耍小。在接种11天?14天后，猪巨细胞病.?的最高滴度可达105.5TClD50/ml。然而，由于肺泡巨喷细胞0身不能繁殖，培养较W难，受到包括猪巨细胞病毒和高致病性猪蓝耳病病岛在|^_1的病35污染，闪此在肺泡巨啦细胞分离使丨H之前必须对猪巨细胞病
图2- 3 PCMV重组质粒酶切鉴定结果IVLDNA标准DL 100；丨-2.质粒酶切Fig.2-3 Recombinant plasmid of pGEM-T/PCMV digested with restrictM..DNA Marker DL 100; 1-2.Plasmid digested by EcoR I胞病毒DNA聚合酶基因序列测定
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪巨细胞病毒TaqMan荧光定量PCR检测的建立[J]. 拜廷阳,赵德明,吴志明,闫若潜,刘淑敏,赵明军,刘梅芬. 中国人兽共患病学报. 2014(02)
[2]人巨细胞病毒实验室诊断进展[J]. 夏宇,张波. 国际检验医学杂志. 2013(08)
[3]人巨细胞病毒病毒体的组装研究新进展[J]. 毛有胜,贾淑芳,计晓,李增,王明丽. 微生物与感染. 2013(01)
[4]猪巨细胞病毒（PCMV）四川株gB基因的克隆与序列分析[J]. 何万平,赵玲,刘艳,刘燕,吴玉梅,徐凯. 中国畜牧兽医. 2013(03)
[5]猪巨细胞病毒gB基因优势抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 刘骁,廖珊,朱玲,周远成,周璐. 中国兽医科学. 2013(02)
[6]四川省猪巨细胞病毒病感染调查及分析[J]. 刘骁,徐志文,周远程,王燕群,史小红. 猪业科学. 2013(01)
[7]猪传染性胃肠炎与流行性腹泻病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 闫若潜,安春霞,刘淑敏,赵雪丽,郭小玲,赵明军,吴志明. 中国畜牧兽医. 2012(09)
[8]原代人绒毛滋养层细胞分离培养及其对巨细胞病毒的易感性研究[J]. 周淑,董丽群,关林波,于萍. 四川大学学报(医学版). 2012(03)
[9]猪巨细胞病毒SC株DNA聚合酶基因的克隆及生物信息学分析[J]. 王燕群,徐志文,郭万柱,朱玲,梅淼. 中国兽医科学. 2011(09)
[10]猪圆环病毒2型、猪巨细胞病毒和TTV-2混合感染的流行病学调查[J]. 刘捷,陆琪,王先炜,李玉峰,王晓晔,姜平. 中国兽医学报. 2011(08)
硕士论文
[1]猪巨细胞病毒gB间接阻断ELISA方法的建立及在四川省的流行病学调查[D]. 刘骁.四川农业大学 2012
[2]猪巨细胞病毒gB基因克隆、原核表达及抗血清的制备[D]. 王慧.扬州大学 2012
[3]猪巨细胞病毒囊膜糖蛋白B重组抗原的研制及应用[D]. 李晶.湖南农业大学 2009
[4]猪致病性链球菌快速检测方法的建立及应用[D]. 拜廷阳.西北农林科技大学 2007
[5]基于TaqMan探针的猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立及应用[D]. 张福良.西北农林科技大学 2006
[6]绿色荧光蛋白表达的重组巨细胞病毒的构建及抗巨细胞病毒药物筛选[D]. 张晓梅.山东大学 2005
本文编号：3096083
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：87 页
【学位级别】：博士
【图文】：
一，巨细胞?
1.1.1.4抵抗力巨细胞病^^易被酸制剂、胎溶剂、紫外线灭活，乙酸、氣仿丨打机溶削处理可使巨细胞病毒丧火感染力。排山猪体外的猪巨细胞病屯抵抗力弱，表面活性类消毋药物就存消毋效见。猪巨细胞病:?在-8(rc条件下可存活一年以上，L々期保存的最适合温度娃-196°C (液減）；-7(rc反S冻融3次仍J%存感染力，在37°C条件'卜4小时仍A.冇感染力；37°C保持24小时则火去感染力；50°C时20分钟不失去感染力，但30分钟后则火去活性135)61。1.1.1.5病毒培养猪巨细胞病毒在体外增殖JV有一定难度，采W猪丨；？或猪寧丸原代细胞、末梢血液中的巨哩细胞以及猪贤传代细胞培养，均不能增殖，但S接叫已感染了病毒的猪或寧丸作细胞带毒培养，则可充分增殖，开出现细胞病变[37]。猪巨细胞病毒可在肺泡巨哩细胞中生L<：增殖，丨H没有被病毋污染的3周龄至5周龄猪的肺泡巨哩细胞进行培养，可100%地分离山猪巨细胞病岛，但病毒增殖速度非常缓慢[38]，接种后3天?4大才可看到巨细胞形成和核内包涵体，偶尔还可见细胞衆内包涵体，但其人小比核内包涵体耍小。在接种11天?14天后，猪巨细胞病.?的最高滴度可达105.5TClD50/ml。然而，由于肺泡巨喷细胞0身不能繁殖，培养较W难，受到包括猪巨细胞病毒和高致病性猪蓝耳病病岛在|^_1的病35污染，闪此在肺泡巨啦细胞分离使丨H之前必须对猪巨细胞病
图2- 3 PCMV重组质粒酶切鉴定结果IVLDNA标准DL 100；丨-2.质粒酶切Fig.2-3 Recombinant plasmid of pGEM-T/PCMV digested with restrictM..DNA Marker DL 100; 1-2.Plasmid digested by EcoR I胞病毒DNA聚合酶基因序列测定
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪巨细胞病毒TaqMan荧光定量PCR检测的建立[J]. 拜廷阳,赵德明,吴志明,闫若潜,刘淑敏,赵明军,刘梅芬. 中国人兽共患病学报. 2014(02)
[2]人巨细胞病毒实验室诊断进展[J]. 夏宇,张波. 国际检验医学杂志. 2013(08)
[3]人巨细胞病毒病毒体的组装研究新进展[J]. 毛有胜,贾淑芳,计晓,李增,王明丽. 微生物与感染. 2013(01)
[4]猪巨细胞病毒（PCMV）四川株gB基因的克隆与序列分析[J]. 何万平,赵玲,刘艳,刘燕,吴玉梅,徐凯. 中国畜牧兽医. 2013(03)
[5]猪巨细胞病毒gB基因优势抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 刘骁,廖珊,朱玲,周远成,周璐. 中国兽医科学. 2013(02)
[6]四川省猪巨细胞病毒病感染调查及分析[J]. 刘骁,徐志文,周远程,王燕群,史小红. 猪业科学. 2013(01)
[7]猪传染性胃肠炎与流行性腹泻病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 闫若潜,安春霞,刘淑敏,赵雪丽,郭小玲,赵明军,吴志明. 中国畜牧兽医. 2012(09)
[8]原代人绒毛滋养层细胞分离培养及其对巨细胞病毒的易感性研究[J]. 周淑,董丽群,关林波,于萍. 四川大学学报(医学版). 2012(03)
[9]猪巨细胞病毒SC株DNA聚合酶基因的克隆及生物信息学分析[J]. 王燕群,徐志文,郭万柱,朱玲,梅淼. 中国兽医科学. 2011(09)
[10]猪圆环病毒2型、猪巨细胞病毒和TTV-2混合感染的流行病学调查[J]. 刘捷,陆琪,王先炜,李玉峰,王晓晔,姜平. 中国兽医学报. 2011(08)
硕士论文
[1]猪巨细胞病毒gB间接阻断ELISA方法的建立及在四川省的流行病学调查[D]. 刘骁.四川农业大学 2012
[2]猪巨细胞病毒gB基因克隆、原核表达及抗血清的制备[D]. 王慧.扬州大学 2012
[3]猪巨细胞病毒囊膜糖蛋白B重组抗原的研制及应用[D]. 李晶.湖南农业大学 2009
[4]猪致病性链球菌快速检测方法的建立及应用[D]. 拜廷阳.西北农林科技大学 2007
[5]基于TaqMan探针的猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立及应用[D]. 张福良.西北农林科技大学 2006
[6]绿色荧光蛋白表达的重组巨细胞病毒的构建及抗巨细胞病毒药物筛选[D]. 张晓梅.山东大学 2005
本文编号：3096083
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