NF-κB信号通路激活剂/抑制剂对DEV增殖的影响
发布时间：2021-03-23 21:18
鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus,DEV）为疱疹病毒科成员,可引起鸭、鹅等水禽发生鸭病毒性肠炎（Duck virus enteritis,DVE）,对水禽养殖产业健康发展造成严重威胁,但其致病机理尚未完全清楚。NF-κB信号通路是动物机体的重要信号通路,在病原体感染、免疫应答和炎症反应中发挥重要作用,且影响多种炎性介质如TNF-a、IL-1β、IL-8以及黏附因子的分泌。本实验室曾采用RNA干扰技术开展NF-κB信号分子对DEV增殖的影响,本研究则从另一个角度即采用NF-κB通路的激活剂和抑制剂探索NF-κB通路对DEV增殖的影响,以期为DEV致病机理提供基础资料和新的思路。1.NF-κB1基因荧光定量PCR方法的建立:根据NF-κB1基因序列设计特异性引物,以鸭胚成纤维细胞mRNA提取样本为模板,进行NF-κB1基因的荧光定量PCR检测,构建荧光定量PCR标准曲线并进行特异性、重复性和敏感性检验,结果显示:建立的NF-κB1基因荧光定量PCR方法的标准曲线方程为y=-3.12x+44.086,扩增效率为109.2%;其熔解曲线呈特异性单峰,批内重复变异系数小于0....
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1NF-κB1基因PCR扩增结果
M. 分子量标准 DL2000；1~12.NF-κB 基因重组质粒；-.阴性arker DL2000；1~12.Recombinant plasmid of NF-κB gene；-: 图 3.1.2 NF-κB 基因重组质粒 PCR 鉴定结果Fig. 3.1.2 The PCR identification results of pMD-NF线建立结果退火温度进行优化，退火温度从 50~65℃以 2、Ct 值最小且在熔解曲线为特异性单峰时为℃时所测 Ct 值最低，反应体系最优。取标准R 检测，结果可见荧光定量 PCR 扩增曲线呈曲线呈现平行，Ct 值相差均匀，不同梯度稀释良好的线性关系。扩增效率为 109.2%，以 Ct 取连续的五个点(1.79×107～1.79×1011)获得荧光(y)与起始拷贝数(x)关系式为 y = -3.12x + 44.0 PCR 产物熔解曲线为单特异峰，熔解温度 Tm
图 3.1.3 NF-κB 基因标准曲线建立相关曲线Fig.3.1.3 Establishment of NF-κB gene standard curve量方法特异性分析的 NF-κB1 基因的熔解曲线没有出现非特异性的扩增产物以及引出现单峰，表示针对该基因的引物具有良好的特异性(见图 3.1.4
【参考文献】：
期刊论文
[1]体外研究脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株结构蛋白对人呼吸道上皮细胞内天然免疫反应系统的作用及其免疫学意义[J]. 吴化叶,牟唐维,王建斌,柳蕾,程继帅,冯敏,王丽春,张莹,李琦涵. 病毒学报. 2019(02)
[2]禽呼肠孤病毒σA基因对鸡胚成纤维细胞天然免疫相关基因转录水平的调控影响[J]. 黄莉,谢芝勋,谢丽基,王盛,黄娇玲,范晴,罗思思,张艳芳,曾婷婷,张民秀,邓显文,谢志勤. 中国兽医科学. 2019(05)
[3]α-倒捻子素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路缓解LPS诱导IEC-6细胞的炎症[J]. 邹闻书,尹朋,金娜,高倩,刘凤华. 畜牧兽医学报. 2019(02)
[4]幽门螺杆菌对人组织淋巴瘤细胞的损伤作用及机制[J]. 宋光永,张晓荣,郭松佳,高艳萍. 山东医药. 2018(38)
[5]APE1通过NF-κB通路调节PD-L1在喉鳞状细胞癌中的表达[J]. 杜国强,王立银,王晓凤,李君,张明明,王瑾. 中国医科大学学报. 2018(10)
[6]TLR4/NF-κB信号通路在微小隐孢子虫感染中的作用机制[J]. 汲蕊,梁瑞文,管志玉,李瑞芳,付玉荣,王红艳. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(04)
[7]乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白表达对肝癌细胞免疫逃逸的影响及其机制[J]. 侯建平,徐珂佳,王文义,张琪,丁文金. 中西医结合肝病杂志. 2018(04)
[8]布鲁菌感染细胞NF-κB的表达水平检测及其干扰方法研究[J]. 荆明龙,李敏,王小凤,李明奇,霍凤娇,张豫,刘良波,张静,张辉. 石河子大学学报(自然科学版). 2018(03)
[9]Hedgehog和NF-κB信号通路在结核分枝杆菌感染Ⅱ型肺泡上皮细胞中的免疫调控作用初探[J]. 杜军,任奇杰,王媛,王娟,李勇. 湖北农业科学. 2018(11)
[10]肝螺杆菌致病机制的研究进展[J]. 曹舒扬,于宁,冯洁,钱淼,孙靖谕,谢灵志,张泉. 中国人兽共患病学报. 2018(06)
博士论文
[1]乳酸杆菌影响沙门菌感染仔猪肠道自噬及炎性体产生的机理[D]. 于娇.中国农业大学 2018
[2]uS10和TRAF6在猪瘟病毒感染过程中的作用及机制[D]. 吕慧芳.西北农林科技大学 2018
[3]肠道病毒71型2C蛋白调节NF-κB活化的机制研究[D]. 杜海威.北京协和医学院 2014
硕士论文
[1]C型产气荚膜梭菌对仔猪小肠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路关键分子的影响[D]. 石海仁.甘肃农业大学 2018
[2]感染金黄色葡萄球菌后小尾寒羊乳腺组织及外周血中TLRs和CK的表达[D]. 陈佳佳.甘肃农业大学 2018
[3]GRP78通过NF-κB信号通路调控FAT10表达影响肝癌细胞增殖的研究[D]. 骆成林.南昌大学 2018
[4]基于ipaJ基因鉴定鸡白痢沙门菌PCR方法的建立及IpaJ抑制宿主NF-κB信号通路机制的研究[D]. 徐黎娟.扬州大学 2018
[5]旋毛虫感染及其ES抗原对小鼠NOD1受体通路影响研究[D]. 胡静.东北农业大学 2017
[6]NF-κB信号通路在原花青素拮抗砷诱导的BEAS-2B细胞炎性损伤中的作用研究[D]. 魏猛.石河子大学 2017
[7]脂多糖激活TLR4信号通路对BMP9诱导间充质干细胞成骨分化的影响研究[D]. 郭杨柳.重庆医科大学 2017
[8]弓形虫抗原调节NF-κB信号通路的机制研究[D]. 范思婕.华中农业大学 2016
[9]鸭坦布苏病毒激活NF-κB并诱导IFN-β的信号通路的分子机制研究[D]. 翟亚军.华中农业大学 2016
[10]大肠杆菌感染对仔兔小肠氧化还原状态及TLR4/NF-κB信号通路的影响[D]. 于小婷.山东农业大学 2015
本文编号：3096444
【文章来源】：贵州大学贵州省 211工程院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1NF-κB1基因PCR扩增结果
M. 分子量标准 DL2000；1~12.NF-κB 基因重组质粒；-.阴性arker DL2000；1~12.Recombinant plasmid of NF-κB gene；-: 图 3.1.2 NF-κB 基因重组质粒 PCR 鉴定结果Fig. 3.1.2 The PCR identification results of pMD-NF线建立结果退火温度进行优化，退火温度从 50~65℃以 2、Ct 值最小且在熔解曲线为特异性单峰时为℃时所测 Ct 值最低，反应体系最优。取标准R 检测，结果可见荧光定量 PCR 扩增曲线呈曲线呈现平行，Ct 值相差均匀，不同梯度稀释良好的线性关系。扩增效率为 109.2%，以 Ct 取连续的五个点(1.79×107～1.79×1011)获得荧光(y)与起始拷贝数(x)关系式为 y = -3.12x + 44.0 PCR 产物熔解曲线为单特异峰，熔解温度 Tm
图 3.1.3 NF-κB 基因标准曲线建立相关曲线Fig.3.1.3 Establishment of NF-κB gene standard curve量方法特异性分析的 NF-κB1 基因的熔解曲线没有出现非特异性的扩增产物以及引出现单峰，表示针对该基因的引物具有良好的特异性(见图 3.1.4
【参考文献】：
期刊论文
[1]体外研究脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株结构蛋白对人呼吸道上皮细胞内天然免疫反应系统的作用及其免疫学意义[J]. 吴化叶,牟唐维,王建斌,柳蕾,程继帅,冯敏,王丽春,张莹,李琦涵. 病毒学报. 2019(02)
[2]禽呼肠孤病毒σA基因对鸡胚成纤维细胞天然免疫相关基因转录水平的调控影响[J]. 黄莉,谢芝勋,谢丽基,王盛,黄娇玲,范晴,罗思思,张艳芳,曾婷婷,张民秀,邓显文,谢志勤. 中国兽医科学. 2019(05)
[3]α-倒捻子素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路缓解LPS诱导IEC-6细胞的炎症[J]. 邹闻书,尹朋,金娜,高倩,刘凤华. 畜牧兽医学报. 2019(02)
[4]幽门螺杆菌对人组织淋巴瘤细胞的损伤作用及机制[J]. 宋光永,张晓荣,郭松佳,高艳萍. 山东医药. 2018(38)
[5]APE1通过NF-κB通路调节PD-L1在喉鳞状细胞癌中的表达[J]. 杜国强,王立银,王晓凤,李君,张明明,王瑾. 中国医科大学学报. 2018(10)
[6]TLR4/NF-κB信号通路在微小隐孢子虫感染中的作用机制[J]. 汲蕊,梁瑞文,管志玉,李瑞芳,付玉荣,王红艳. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(04)
[7]乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白表达对肝癌细胞免疫逃逸的影响及其机制[J]. 侯建平,徐珂佳,王文义,张琪,丁文金. 中西医结合肝病杂志. 2018(04)
[8]布鲁菌感染细胞NF-κB的表达水平检测及其干扰方法研究[J]. 荆明龙,李敏,王小凤,李明奇,霍凤娇,张豫,刘良波,张静,张辉. 石河子大学学报(自然科学版). 2018(03)
[9]Hedgehog和NF-κB信号通路在结核分枝杆菌感染Ⅱ型肺泡上皮细胞中的免疫调控作用初探[J]. 杜军,任奇杰,王媛,王娟,李勇. 湖北农业科学. 2018(11)
[10]肝螺杆菌致病机制的研究进展[J]. 曹舒扬,于宁,冯洁,钱淼,孙靖谕,谢灵志,张泉. 中国人兽共患病学报. 2018(06)
博士论文
[1]乳酸杆菌影响沙门菌感染仔猪肠道自噬及炎性体产生的机理[D]. 于娇.中国农业大学 2018
[2]uS10和TRAF6在猪瘟病毒感染过程中的作用及机制[D]. 吕慧芳.西北农林科技大学 2018
[3]肠道病毒71型2C蛋白调节NF-κB活化的机制研究[D]. 杜海威.北京协和医学院 2014
硕士论文
[1]C型产气荚膜梭菌对仔猪小肠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路关键分子的影响[D]. 石海仁.甘肃农业大学 2018
[2]感染金黄色葡萄球菌后小尾寒羊乳腺组织及外周血中TLRs和CK的表达[D]. 陈佳佳.甘肃农业大学 2018
[3]GRP78通过NF-κB信号通路调控FAT10表达影响肝癌细胞增殖的研究[D]. 骆成林.南昌大学 2018
[4]基于ipaJ基因鉴定鸡白痢沙门菌PCR方法的建立及IpaJ抑制宿主NF-κB信号通路机制的研究[D]. 徐黎娟.扬州大学 2018
[5]旋毛虫感染及其ES抗原对小鼠NOD1受体通路影响研究[D]. 胡静.东北农业大学 2017
[6]NF-κB信号通路在原花青素拮抗砷诱导的BEAS-2B细胞炎性损伤中的作用研究[D]. 魏猛.石河子大学 2017
[7]脂多糖激活TLR4信号通路对BMP9诱导间充质干细胞成骨分化的影响研究[D]. 郭杨柳.重庆医科大学 2017
[8]弓形虫抗原调节NF-κB信号通路的机制研究[D]. 范思婕.华中农业大学 2016
[9]鸭坦布苏病毒激活NF-κB并诱导IFN-β的信号通路的分子机制研究[D]. 翟亚军.华中农业大学 2016
[10]大肠杆菌感染对仔兔小肠氧化还原状态及TLR4/NF-κB信号通路的影响[D]. 于小婷.山东农业大学 2015
本文编号：3096444
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