奶山羊乳腺上皮细胞永生化细胞系的建立
发布时间：2021-03-23 22:20
乳腺上皮细胞是一种高度分化的体细胞，但其在体外培养条件下仍可保持合成和分泌乳汁的功能，因此可作为靶细胞被用于乳腺生物反应器的制作，产生具有很高药用价值和活性成分的外源蛋白质产物，这对于建立乳腺生物反应器、通过核移植获得转基因动物都具有重要的意义。因此建立一个有永生潜力乳腺上皮细胞系是非常重要的。相比于多种建立永生细胞系的方法，如过表达原癌基因、转染SV40大T抗原等，使用端粒酶逆转录酶基因可有效降低细胞在永生化过程中发生生物学特征改变甚至发生癌变等的风险。本实验使用奶山羊的乳腺组织进行乳腺上皮细胞分离纯化培养，向细胞内稳定转染含有hTERT基因的表达载体，并进行细胞筛选，以期获得永生化的山羊乳腺上皮细胞系，为后续的研究奠定基础。获得主要结果如下：1.使用组织块培养法，在5d后组织块迁出细胞，观察细胞为多角形，形态一致，为典型乳腺上皮细胞的铺路石状，细胞界限清楚，连接紧密，分布密集，增殖旺盛，免疫组织化学鉴定表明乳腺上皮细胞表达角蛋白；通过体外诱导，山羊乳腺上皮细胞可以分泌β-酪蛋白。2.使用脂质体转染法，将外源基因pCI-neo-hTERT转入第3代的奶山羊乳腺上皮细胞，经500μg/...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
山羊乳腺上皮细胞角蛋白免疫荧光染色A:角蛋白染色；B：DAPI染色；C：合并图D：白光图
A BC D图 2-2 山羊乳腺上皮细胞角蛋白免疫荧光染色A: 角蛋白染色； B：DAPI 染色；C：合并图 D：白光图Fig.2-2 cytokeratin immunofluorescence of GMECsA: cytokeratin staining; B: DAPI staining; C: Merge Figure D: White Figure
R 产物回收送测序，并将测序结果在 GeneBank 上和山羊 的全基因序列进行比对，GeneBank 上登录号为 AF40909图 2-4 RT-PCR 检测 GMECs 的 β-酪蛋白的表达Fig.2-4 Detection of beta-casein expression in GMECs by RT-图 2-5 GMECs 的 β-酪蛋白的 RT-PCR 产物测序结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]表达hTERT及SV40T永生化奶牛乳腺上皮细胞系的建立[J]. 上官陶,王洪梅,冯敏燕,仲跻峰,何洪彬. 山东农业科学. 2013(02)
[2]荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞的分离培养[J]. 厉世伟,谷静娟,赵璐,李龙,王雪涛,况玲. 中兽医医药杂志. 2013(01)
[3]胰岛素、催乳素和氢化可的松对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响[J]. 田青,王洪荣. 中国饲料. 2013(02)
[4]奶山羊乳腺上皮细胞系的建立[J]. 佟慧丽,尹德云,李庆章,高学军. 东北农业大学学报. 2008(08)
[5]小白鼠乳腺上皮细胞的体外培养及形态学变化[J]. 张以涛,李庆章. 黑龙江畜牧兽医. 2008(04)
[6]消化法培养山羊乳腺上皮细胞[J]. 富国文,武海军,靳亚平. 安徽农业科学. 2007(24)
[7]星形细胞胶质瘤中生存素、周期蛋白E和端粒酶相关蛋白的表达与意义[J]. 王东林,施公胜,王艳芬,邵伟伟,黄华. 江苏医药. 2007(07)
[8]催乳素及其受体对乳腺发育研究进展[J]. 苗培,杨国宇,惠永华. 畜牧兽医杂志. 2007(01)
[9]牛乳腺上皮细胞的分离培养及其生物学特性[J]. 多曙光,吴应积,罗奋华,旭日干. 动物学研究. 2006(03)
[10]体外培养的牛乳腺上皮细胞形态研究[J]. 彭新荣,郑月茂,张涌. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2005(01)
博士论文
[1]牛乳腺上皮细胞永生化及其多能性的研究[D]. 李吉霞.西北农林科技大学 2010
硕士论文
[1]奶牛乳腺上皮细胞的体外培养及应用[D]. 王治国.中国农业科学院 2007
[2]山羊乳腺上皮细胞的分离与体外培养[D]. 任芳丽.西北农林科技大学 2002
[3]山羊乳腺特异性表达载体的构建与表达特性的研究[D]. 陈刚.扬州大学 2002
本文编号：3096520
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
山羊乳腺上皮细胞角蛋白免疫荧光染色A:角蛋白染色；B：DAPI染色；C：合并图D：白光图
A BC D图 2-2 山羊乳腺上皮细胞角蛋白免疫荧光染色A: 角蛋白染色； B：DAPI 染色；C：合并图 D：白光图Fig.2-2 cytokeratin immunofluorescence of GMECsA: cytokeratin staining; B: DAPI staining; C: Merge Figure D: White Figure
R 产物回收送测序，并将测序结果在 GeneBank 上和山羊 的全基因序列进行比对，GeneBank 上登录号为 AF40909图 2-4 RT-PCR 检测 GMECs 的 β-酪蛋白的表达Fig.2-4 Detection of beta-casein expression in GMECs by RT-图 2-5 GMECs 的 β-酪蛋白的 RT-PCR 产物测序结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]表达hTERT及SV40T永生化奶牛乳腺上皮细胞系的建立[J]. 上官陶,王洪梅,冯敏燕,仲跻峰,何洪彬. 山东农业科学. 2013(02)
[2]荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞的分离培养[J]. 厉世伟,谷静娟,赵璐,李龙,王雪涛,况玲. 中兽医医药杂志. 2013(01)
[3]胰岛素、催乳素和氢化可的松对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响[J]. 田青,王洪荣. 中国饲料. 2013(02)
[4]奶山羊乳腺上皮细胞系的建立[J]. 佟慧丽,尹德云,李庆章,高学军. 东北农业大学学报. 2008(08)
[5]小白鼠乳腺上皮细胞的体外培养及形态学变化[J]. 张以涛,李庆章. 黑龙江畜牧兽医. 2008(04)
[6]消化法培养山羊乳腺上皮细胞[J]. 富国文,武海军,靳亚平. 安徽农业科学. 2007(24)
[7]星形细胞胶质瘤中生存素、周期蛋白E和端粒酶相关蛋白的表达与意义[J]. 王东林,施公胜,王艳芬,邵伟伟,黄华. 江苏医药. 2007(07)
[8]催乳素及其受体对乳腺发育研究进展[J]. 苗培,杨国宇,惠永华. 畜牧兽医杂志. 2007(01)
[9]牛乳腺上皮细胞的分离培养及其生物学特性[J]. 多曙光,吴应积,罗奋华,旭日干. 动物学研究. 2006(03)
[10]体外培养的牛乳腺上皮细胞形态研究[J]. 彭新荣,郑月茂,张涌. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2005(01)
博士论文
[1]牛乳腺上皮细胞永生化及其多能性的研究[D]. 李吉霞.西北农林科技大学 2010
硕士论文
[1]奶牛乳腺上皮细胞的体外培养及应用[D]. 王治国.中国农业科学院 2007
[2]山羊乳腺上皮细胞的分离与体外培养[D]. 任芳丽.西北农林科技大学 2002
[3]山羊乳腺特异性表达载体的构建与表达特性的研究[D]. 陈刚.扬州大学 2002
本文编号：3096520
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