线粒体移植对水牛卵母细胞发育潜能影响的初步研究

发布时间：2021-03-24 19:24

　　本研究以水牛卵泡颗粒细胞作为线粒体的来源细胞,初步探讨水牛卵母细胞进行线粒体移植（MIT）对其发育潜能的影响,以期提高水牛卵母细胞的质量和胚胎的发育能力。首先,探讨了水牛卵泡颗粒细胞的分离培养方法及线粒体活性的检测。结果显示：从卵泡液中分离得到的颗粒细胞活率为60%左右；采用DMEM培养基,颗粒细胞的生长速度和生长状态优于TCM-199和DMEM/F12培养基,细胞培养24h后开始零星增殖,3-5d增殖速度达到高峰；分别对第1、3、5、7代颗粒细胞的核型、凋亡率及其线粒体活性分析发现：第1、3、5、7代颗粒细胞正常核型比率差异不显著,均在85%以上；第1代颗粒细胞的凋亡率（7.67±0.23%）与第三代（7.62±0.36%）差异不显著,但与第5代（8.26±0.19%）和第7代（9.35±0.47%）相比,颗粒细胞的凋亡率显著上升（P<0.05）；而线粒体的活性会随着颗粒细胞体外培养代数的增加呈下降趋势。其次,研究了水牛卵母细胞质量及发育潜能与线粒体DNA （mtDNA）拷贝数的关系。通过实时荧光定量PCR （QRT-PCR）技术对体外成熟不同级别卵母细胞的mtDNA拷贝数进行... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文简写一中文对照表
第一部分 文献综述
    1 线粒体生物学性状
        1.1 线粒体的形态结构和分布
        1.2 线粒体的功能
        1.3 线粒体遗传特性
        1.4 线粒体与细胞凋亡
        1.5 线粒体与胚胎发育
    2 影响卵母细胞发育潜能的因素
        2.1 年龄
        2.2 卵胞质
        2.3 染色体异常
    3 提高卵母细胞发育潜能的方法
        3.1 卵胞质移植
        3.2 生发泡移植
        3.3 线粒体移植
第二部分 试验部分
    前言
    第一章 水牛卵泡颗粒细胞的体外分离培养及筛选
        摘要
        1. 材料与方法
            1.1 实验材料
            1.2 主要仪器及试剂
            1.3 方法
            1.4 统计分析
        2 结果与分析
            2.1 水牛颗粒细胞的活率及原代培养
            2.2 水牛颗粒细胞培养基的筛选
            2.3 水牛颗粒细胞的增殖检测
            2.4 水牛颗粒细胞的核型分析
            2.5 水牛颗粒细胞的凋亡检测
            2.6 线粒体的提取及活性检测
        3 讨论
        4 结论
    第二章 水牛卵母细胞质量及发育潜能与线粒体拷贝数的关系
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 试验材料
            1.2 主要仪器及试剂
            1.3 试验方法
            1.4 统计分析
        2 结果与分析
            2.1 标准品的制备
            2.2 不同质量水牛卵母细胞的mtDNA拷贝数
            2.3 不同级别水牛卵母细胞孤雌激活胚胎的发育
        3 讨论
        4 结论
    第三章 颗粒细胞线粒体移植对水牛卵母细胞的影响
        摘要
        1. 材料与方法
            1.1 实验材料
            1.2 主要仪器及试剂
            1.3 试验方法
            1.4 试验设计
            1.5 统计分析
        2 结果与分析
            2.1 线粒体移植后的追踪观察
            2.2 线粒体移植对水牛胚胎发育的影响
            2.3 线粒体移植对水牛胚胎线粒体膜电位的影响
        3 讨论
        4 结论
参考文献
图片说明
致谢
攻读硕士期间发表学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪卵巢颗粒细胞分离培养及鉴定[J]. 朱丽,郭成志,邓思君,鲁银,魏强,袁慧.  中国兽医杂志. 2011(04)
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[10]首例经自体颗粒细胞线粒体移植的双胞胎儿出生[J]. 孔令红,刘忠,李红,朱亮,陈士岭,邢福祺.  第一军医大学学报. 2003(09)

博士论文
[1]体细胞核移植及线粒体命运的研究[D]. 华松.西北农林科技大学 2007

硕士论文
[1]颗粒细胞线粒体移植对牛孤雌胚胎发育的影响[D]. 王晓磊.西北农林科技大学 2006



本文编号：3098259