泰妙菌素完全抗原的制备及其多克隆抗体的研制
发布时间：2021-03-25 16:53
泰妙菌素（Tiamulin，TML）是一种截短侧耳素类动物专用抗生素，不仅对支原体有极强活性，而且对链球菌、金黄色葡萄球菌也有很强的抗菌活性，以较低剂量添加时能促进生长，因此作为兽药和饲料添加剂被广泛应用。但TML在动物性食品中的残留可能对人类的健康造成严重的潜在威胁。目前，用于检测泰妙菌素残留的方法主要是理化检测方法，存在样品处理过程繁琐，耗时较长，且需要昂贵的仪器等缺点。本研究根据TML的分子结构特点成功制备完全抗原并作鉴定；制备了TML多克隆抗体并初步建立了TML免疫学检测方法，为TML单克隆抗体的制备奠定了基础。1、完全抗原的制备与鉴定本研究用混合酸酐法（Mixed anhydride，MA）将半抗原泰妙菌素偶联至载体牛血清白蛋白（Bovine serum albumen，BSA）和卵清蛋白（Ovalbumin，OVA）制备了免疫抗原TML-BSA和包被抗原TML-OVA；对制备的免疫原做紫外扫描鉴定和SDS-PAGE凝胶电泳鉴定，根据SDS-PAGE凝胶电泳图估算出完全抗原的偶联比。结果显示，抗原偶联成功，估算出的偶联比约为1:23.6。用TML-BSA免疫3只BALB/c小...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 抗生素概述
1.1.1 抗生素简介
1.1.2 抗生素发现历史
1.1.3 抗生素作用机理
1.1.4 抗生素分类
1.2 抗生素残留对人体和环境的危害
1.2.1 造成肠道菌群平衡紊乱
1.2.2 产生过敏反应
1.2.3 对听力和肾脏的危害
1.2.4 其它毒害作用
1.2.5 抗生素对环境的危害
1.2.6 耐药性问题
1.3 兽药抗生素残留对我国动物产品出口的影响
1.4 兽药抗生素残留的原因
1.5 解决兽药抗生素残留问题的对策
1.5.1 严格执行休药期规定
1.5.2 建立并完善我国兽药残留检测系统
1.6 兽药抗生素残留的检测方法
1.6.1 理化检测方法
1.6.2 微生物学检测方法
1.6.3 免疫学检测方法
1.6.4 三类抗生素检测方法优缺点对比
1.7 泰妙菌素的介绍
1.7.1 理化性质
1.7.2 作用特点
1.7.3 作用机理
1.7.4 不良反应
1.7.5 最高残留限量
1.7.6 泰妙菌素残留检测的研究进展
1.8 完全抗原合成的基本原理
1.8.1 半抗原的概述
1.8.2 半抗原的要求
1.8.3 载体的选择
1.8.4 偶联方法的选择
1.8.5 人工抗原的纯化与鉴定
1.9 ELISA 概述
1.9.1 ELISA 原理
1.9.2 常用的 ELISA 方法
1.10 本研究的目的、意义及主要内容
2 泰妙菌素完全抗原的制备及鉴定
2.1 材料
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器和耗材
2.1.3 主要溶液配制
2.1.4 实验动物
2.2 方法
2.2.1 泰妙菌素完全抗原 TML‐BSA 的制备
2.2.2 包被原的制备
2.2.3 完全抗原的表征与鉴定
2.2.4 动物免疫
2.2.5 间接 ELISA 检测抗泰妙菌素抗体方法的建立
2.3 结果与分析
2.3.1 偶联物蛋白浓度
2.3.2 紫外扫描鉴定结果
2.3.3 SDS‐PAGE 凝胶电泳鉴定结果
2.3.4 小鼠抗血清效价测定结果
2.3.5 小鼠抗血清敏感性测定结果
2.4 讨论
2.4.1 关于偶联方法
2.4.2 关于完全抗原鉴定及偶联比
2.4.3 关于载体选择
2.4.4 关于佐剂
2.4.5 包被原的选择
2.4.6 偶联率对免疫效果的影响
2.5 小结
3 泰妙菌素兔多克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立
3.1 材料
3.1.1 主要试剂
3.1.2 主要仪器和耗材
3.1.3 主要溶液配制
3.1.4 实验动物
3.2 方法
3.2.1 动物免疫及多抗血清制备
3.2.2 多抗纯化
3.2.3 多克隆抗体免疫学特性鉴定
3.2.4 间接竞争 ELISA 检测方法的优化及鉴定
3.3 结果与分析
3.3.1 多克隆抗体效价及敏感性测定结果
3.3.2 多克隆抗体特异性鉴定结果
3.3.3 抗原包被浓度和抗体工作浓度的确定结果
3.3.4 间接竞争 ELISA 标准曲线及检测范围
3.4 讨论
3.4.1 关于实验动物及免疫
3.4.2 关于多抗和单抗
3.5 小结
4 结论
参考文献
附录：中英文缩略表
致谢
个人简历
学习经历
科研经历
所获奖励
发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]庆大霉素单克隆抗体的制备及试剂盒的配制[J]. 潘宪云,席仲兴,彭林峰,张甲菊,路东,张云涛. 微生物学免疫学进展. 2013(01)
[2]抗生素的分类及治疗原则[J]. 李秀银,王月兵,李明川. 临床合理用药杂志. 2012(28)
[3]超高压液相色谱-串联质谱法测定肉类中沃尼妙林和泰妙菌素的残留量[J]. 刘晓茂,李学民,葛娜,王飞,杨志伟,曹彦忠. 食品与发酵工业. 2012(08)
[4]高效液相-串联质谱法测定畜禽肌肉中泰妙菌素残留[J]. 耿士伟,朱志谦,曲斌,蒋天梅,陆桂萍. 畜牧与兽医. 2012(08)
[5]两种四环素类兽药抗生素对白菜种子发芽与根伸长抑制的毒性效应[J]. 葛成军,俞花美,焦鹏. 生态环境学报. 2012(06)
[6]截短侧耳素类抗生素的研究进展[J]. 汤有志,远立国,刘雅红. 中国兽医杂志. 2012(05)
[7]蜂蜜中残留抗生素的检测方法研究[J]. 李周敏,邵诚,方惠群. 安徽医药. 2012(05)
[8]动物性食品中兽药残留分析检测技术研究进展[J]. 李冰,李剑勇,周绪正,杨亚军,牛建荣,魏小娟,李金善,张继瑜. 畜牧与兽医. 2012(05)
[9]我国畜产品供需状况与产业发展预测[J]. 王舒婷,陈铁飞,钟真. 重庆社会科学. 2012(04)
[10]兽药残留对畜禽产品质量安全的危害与防控对策[J]. 刘勇军,姜艳彬. 北京工商大学学报(自然科学版). 2012(01)
硕士论文
[1]伊维菌素单克隆抗体的研制与应用[D]. 陆江.扬州大学 2007
本文编号：3099994
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 抗生素概述
1.1.1 抗生素简介
1.1.2 抗生素发现历史
1.1.3 抗生素作用机理
1.1.4 抗生素分类
1.2 抗生素残留对人体和环境的危害
1.2.1 造成肠道菌群平衡紊乱
1.2.2 产生过敏反应
1.2.3 对听力和肾脏的危害
1.2.4 其它毒害作用
1.2.5 抗生素对环境的危害
1.2.6 耐药性问题
1.3 兽药抗生素残留对我国动物产品出口的影响
1.4 兽药抗生素残留的原因
1.5 解决兽药抗生素残留问题的对策
1.5.1 严格执行休药期规定
1.5.2 建立并完善我国兽药残留检测系统
1.6 兽药抗生素残留的检测方法
1.6.1 理化检测方法
1.6.2 微生物学检测方法
1.6.3 免疫学检测方法
1.6.4 三类抗生素检测方法优缺点对比
1.7 泰妙菌素的介绍
1.7.1 理化性质
1.7.2 作用特点
1.7.3 作用机理
1.7.4 不良反应
1.7.5 最高残留限量
1.7.6 泰妙菌素残留检测的研究进展
1.8 完全抗原合成的基本原理
1.8.1 半抗原的概述
1.8.2 半抗原的要求
1.8.3 载体的选择
1.8.4 偶联方法的选择
1.8.5 人工抗原的纯化与鉴定
1.9 ELISA 概述
1.9.1 ELISA 原理
1.9.2 常用的 ELISA 方法
1.10 本研究的目的、意义及主要内容
2 泰妙菌素完全抗原的制备及鉴定
2.1 材料
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器和耗材
2.1.3 主要溶液配制
2.1.4 实验动物
2.2 方法
2.2.1 泰妙菌素完全抗原 TML‐BSA 的制备
2.2.2 包被原的制备
2.2.3 完全抗原的表征与鉴定
2.2.4 动物免疫
2.2.5 间接 ELISA 检测抗泰妙菌素抗体方法的建立
2.3 结果与分析
2.3.1 偶联物蛋白浓度
2.3.2 紫外扫描鉴定结果
2.3.3 SDS‐PAGE 凝胶电泳鉴定结果
2.3.4 小鼠抗血清效价测定结果
2.3.5 小鼠抗血清敏感性测定结果
2.4 讨论
2.4.1 关于偶联方法
2.4.2 关于完全抗原鉴定及偶联比
2.4.3 关于载体选择
2.4.4 关于佐剂
2.4.5 包被原的选择
2.4.6 偶联率对免疫效果的影响
2.5 小结
3 泰妙菌素兔多克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立
3.1 材料
3.1.1 主要试剂
3.1.2 主要仪器和耗材
3.1.3 主要溶液配制
3.1.4 实验动物
3.2 方法
3.2.1 动物免疫及多抗血清制备
3.2.2 多抗纯化
3.2.3 多克隆抗体免疫学特性鉴定
3.2.4 间接竞争 ELISA 检测方法的优化及鉴定
3.3 结果与分析
3.3.1 多克隆抗体效价及敏感性测定结果
3.3.2 多克隆抗体特异性鉴定结果
3.3.3 抗原包被浓度和抗体工作浓度的确定结果
3.3.4 间接竞争 ELISA 标准曲线及检测范围
3.4 讨论
3.4.1 关于实验动物及免疫
3.4.2 关于多抗和单抗
3.5 小结
4 结论
参考文献
附录：中英文缩略表
致谢
个人简历
学习经历
科研经历
所获奖励
发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]庆大霉素单克隆抗体的制备及试剂盒的配制[J]. 潘宪云,席仲兴,彭林峰,张甲菊,路东,张云涛. 微生物学免疫学进展. 2013(01)
[2]抗生素的分类及治疗原则[J]. 李秀银,王月兵,李明川. 临床合理用药杂志. 2012(28)
[3]超高压液相色谱-串联质谱法测定肉类中沃尼妙林和泰妙菌素的残留量[J]. 刘晓茂,李学民,葛娜,王飞,杨志伟,曹彦忠. 食品与发酵工业. 2012(08)
[4]高效液相-串联质谱法测定畜禽肌肉中泰妙菌素残留[J]. 耿士伟,朱志谦,曲斌,蒋天梅,陆桂萍. 畜牧与兽医. 2012(08)
[5]两种四环素类兽药抗生素对白菜种子发芽与根伸长抑制的毒性效应[J]. 葛成军,俞花美,焦鹏. 生态环境学报. 2012(06)
[6]截短侧耳素类抗生素的研究进展[J]. 汤有志,远立国,刘雅红. 中国兽医杂志. 2012(05)
[7]蜂蜜中残留抗生素的检测方法研究[J]. 李周敏,邵诚,方惠群. 安徽医药. 2012(05)
[8]动物性食品中兽药残留分析检测技术研究进展[J]. 李冰,李剑勇,周绪正,杨亚军,牛建荣,魏小娟,李金善,张继瑜. 畜牧与兽医. 2012(05)
[9]我国畜产品供需状况与产业发展预测[J]. 王舒婷,陈铁飞,钟真. 重庆社会科学. 2012(04)
[10]兽药残留对畜禽产品质量安全的危害与防控对策[J]. 刘勇军,姜艳彬. 北京工商大学学报(自然科学版). 2012(01)
硕士论文
[1]伊维菌素单克隆抗体的研制与应用[D]. 陆江.扬州大学 2007
本文编号：3099994
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