猪戊型肝炎病毒血清抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

发布时间：2021-03-26 23:04

　　由于猪戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）可跨种属感染人,因此,猪群中猪HEV感染的监测对于该病的防控和公共卫生都具有重要的意义。本试验旨在建立一种检测猪HEV抗体的间接ELISA方法,以原核表达纯化截短的猪HEV衣壳蛋白为包被抗原,优化条件,确定最佳试验条件,并分析该方法的敏感性、特异性、重复性,以及与商品化试剂盒的符合率,评价其临床应用价值。SDS-PAGE和Western blot结果证明抗原蛋白获得正确表达与纯化,并且具有良好的反应原性,可以作为后续建立ELISA方法的包被抗原。通过优化ELISA条件,最终确定抗原最佳包被量为200ng·孔-1,血清最佳稀释度为1∶200,包被缓冲液为碳酸盐缓冲液（pH 9.6）,封闭液为2.5%的脱脂奶粉,阴阳性判定的临界值为OD450nm≥0.296。该间接ELISA方法的特异性和敏感性良好,板内和板间变异系数均小于10%,与北京万泰商品化试剂盒符合率为91.2%。临床应用表明,该方法可应用于猪HEV感染猪后抗体消长以及临床猪血清抗体的检测。因此,本研究建立的猪HEV抗体间接ELISA检测方法具有较好的敏感性和特异性,... 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2018,49(10)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒株和血清
    1.2 主要试剂
    1.3 包被抗原的制备
        1.3.1 猪HEV衣壳蛋白C端268个氨基酸在大肠杆菌中的原核表达
        1.3.2 表达蛋白的复性和纯化
        1.3.3 表达蛋白抗原性分析
    1.4 间接ELISA检测方法的建立
        1.4.1 间接ELISA方法操作步骤
        1.4.2最佳ELISA工作条件的确定
        1.4.3 临界值的确定
    1.5 特异性试验
    1.6 敏感性试验
    1.7 重复性试验
    1.8 对比试验
    1.9 临床应用
2 结果
    2.1 SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达和纯化
    2.2 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定
    2.3 最佳包被缓冲液和封闭液的确定
    2.4 酶标二抗最佳工作浓度的确定
    2.5 临界值的确定
    2.6 特异性试验
    2.7 敏感性试验
    2.8 重复性试验
    2.9 与商品化试剂盒符合率试验
    2.1 0 临床样品检测
3 讨论
4 结论



本文编号：3102396