双峰驼T细胞CD3ε和CD4重组蛋白的抗体制备

发布时间：2021-03-27 06:55

　　双峰驼是我国西北地区特有的动物,常年生活在自然环境较为恶劣的沙漠地带。已经公开的研究表明双峰驼有着独特的黏膜免疫系统,黏膜免疫系统在抵御外部病原入侵的过程中发挥着重要的作用,其中T细胞是参与保护反应的一类重要的效应细胞,但是关于双峰驼T细胞的研究未见报道。因此本文就双峰驼T细胞表面两类重要的分子CD3和CD4开展了生物信息学分析,重组蛋白的原核表达和多克隆抗体制备方面的研究。为获取CD3ε和CD4的重组蛋白和相应的多克隆抗体,首先在GenBank中查找收录的双峰驼CD3ε和CD4的核酸序列及氨基酸序列,利用生物信息学分析软件对CD3ε和CD4的跨膜区,信号肽及抗原指数和亲水性进行了预测,之后选取CD4和CD3ε膜外部分的氨基酸序列,并去除信号肽,人工合成这段氨基酸序列所对应的基因,经测序正确的基因片段被克隆至PET-28a（+）表达载体上,转入BL21（DE3）大肠杆菌中,然后诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE鉴定重组蛋白。将两种重组蛋白经过镍柱亲和层析纯化后分别免疫健康的雄兔以制备多克隆抗体,待四免后心脏采血并提取血清,ELISA检测CD3ε与CD4多抗的血清效价,WB检测抗体血清与... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CD3跨膜区预测

甘肃农业大学2020届硕士学位论文18图1-2CD3信号肽预测Fig.1-2CD3preditionofsignalpepited3.2.3抗原指数及亲水性预测预测结果如图1-3所示。在亲水性预测中如果数值大于0则为疏水性，小于0则为亲水性，结果表明该蛋白为疏水性蛋白。在抗原指数预测中如果数值大于0则表明抗原指数高，结果表明该蛋白抗原指数较高。图1-3亲水性与抗原指数预测Fig.1-3Predictionofhydrophilicityandantigenindex3.3CD3重组蛋白的诱导表达如图1-4所示，对CD3重组蛋白大小的预测结果是11Ku，聚丙烯酰胺凝胶电泳显示在蛋白分子质量标准10Ku15Ku条带之间出现了目的蛋白条带，最终的结果表明成功获得了重组蛋白。

甘肃农业大学2020届硕士学位论文18图1-2CD3信号肽预测Fig.1-2CD3preditionofsignalpepited3.2.3抗原指数及亲水性预测预测结果如图1-3所示。在亲水性预测中如果数值大于0则为疏水性，小于0则为亲水性，结果表明该蛋白为疏水性蛋白。在抗原指数预测中如果数值大于0则表明抗原指数高，结果表明该蛋白抗原指数较高。图1-3亲水性与抗原指数预测Fig.1-3Predictionofhydrophilicityandantigenindex3.3CD3重组蛋白的诱导表达如图1-4所示，对CD3重组蛋白大小的预测结果是11Ku，聚丙烯酰胺凝胶电泳显示在蛋白分子质量标准10Ku15Ku条带之间出现了目的蛋白条带，最终的结果表明成功获得了重组蛋白。


本文编号：3103108