H9亚型禽流感病毒遗传演化分析及致病性研究与疫苗免疫效果评估

发布时间：2021-03-29 20:36

　　H9N2亚型禽流感病毒呈世界性分布，并可以传播到人类和低等哺乳类动物。我国于1994年首次从鸡体内分离出H9N2亚型禽流感病毒，近些年我国每年均可分离到大量的H9亚型禽流感病毒，临床上感染鸡常可见蛋鸡产蛋下降、肉鸡生长发育迟缓甚至死亡的现象，给养禽业造成较大的经济损失。1998年在广东省的韶关和汕头分别发现4例和5例H9N2禽流感病毒感染的病例，为全球首次发现人H9N2流感病毒感染病例，表明H9N2亚型流感还具有重要公共卫生意义。为了解我国近年来H9N2亚型禽流感病毒的遗传变异情况，本试验对2009²011年分离的30株H9N2亚型禽流感病毒的全基因组进行序列测定，并分析其遗传演化关系，且结合抗原性的分析，以揭示我国H9N2亚型禽流感病毒的流行规律。研究结果表明，2009²011年，中国大陆12个省份分离的30个H9N2亚型禽流感病毒分离株表面基因均具有流感病毒低致病性毒株的分子特性，且抗原性发生一些变化。外部基因HA和NA均未发生太大的变化。HA基因仍属于BJ/1/94亚群，且没有毒株呈现出典型的人流感受体结合特性。21株毒株的NA基因仍属... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：187 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 禽流感概述
        1.1.1 病原学
        1.1.2 流感病毒致病性的微观基础
        1.1.3 流行病学
    1.2 H9N2 亚型禽流感
        1.2.1 简介
        1.2.2 致病性
        1.2.3 检测和防治
    1.3 禽流感疫苗
        1.3.1 全病毒灭活苗
        1.3.2 亚单位疫苗
        1.3.3 重组活载体疫苗
        1.3.4 DNA 疫苗
        1.3.5 表位疫苗
        1.3.6 冷适应流感弱毒疫苗
    1.4 本研究的目的和意义
第二章 H9N2 亚型禽流感病毒遗传演化分析
    2.1 试验材料
        2.1.1 病毒
        2.1.2 SPF 鸡胚
        2.1.3 扩增测序引物
        2.1.4 主要试剂和仪器
    2.2 试验方法
        2.2.1 病毒克隆纯化
        2.2.2 病毒基因组 RNA 提取与反转录
        2.2.3 PCR 与目的片段的回收
        2.2.4 序列测定
        2.2.5 序列拼接
    2.3 试验结果
        2.3.1 HA 基因遗传分析
        2.3.2 NA 基因遗传分析
        2.3.3 PA、PB1 和 PB2 基因遗传分析
        2.3.4 NP 基因遗传分析
        2.3.5 NS 基因遗传分析
        2.3.6 M 基因遗传分析
    2.4 讨论
第三章 H9N2 亚型禽流感病毒抗原性分析
    3.1 试验材料
        3.1.1 病毒及标准血清
        3.1.2 SPF 鸡胚及 SPF 鸡
        3.1.3 主要试剂和仪器
    3.2 试验方法
        3.2.1 代表株灭活疫苗的制备
        3.2.2 代表株抗体血清的制备
        3.2.3 抗原性分析
    3.3 试验结果
    3.4 讨论
第四章 H9N2 亚型禽流感病毒与细菌单独或混合感染 SPF 鸡的研究
    4.1 试验材料
        4.1.1 病毒及菌株
        4.1.2 SPF 鸡胚及 SPF 鸡
        4.1.3 主要试剂和仪器
    4.2 试验方法
        4.2.1 试验动物分组和感染
        4.2.2 临床观察
        4.2.3 病毒和细菌分离
        4.2.4 感染鸡 HI 抗体检测
        4.2.5 淋巴细胞增殖刺激指数测定
        4.2.6 病毒序列鉴定
    4.3 试验结果
        4.3.1 临床观察结果
        4.3.2 感染鸡病毒及细菌的分离情况
        4.3.3 感染鸡血清抗体水平
        4.3.4 淋巴细胞增殖刺激指数
        4.3.5 病毒测序鉴定结果
    4.4 讨论
第五章 H9N2 亚型禽流感病毒与细菌单独或混合感染肉鸡的研究
    5.1 试验材料
        5.1.1 病毒及菌株
        5.1.2 SPF 鸡胚及非免疫肉鸡
        5.1.3 主要试剂和仪器
    5.2 试验方法
        5.2.1 试验动物分组
        5.2.2 临床观察
        5.2.3 病毒分离
        5.2.4 抗体检测
        5.2.5 感染对肉鸡重量的影响
        5.2.6 病理组织学观察
    5.3 试验结果
        5.3.1 临床观察结果
        5.3.2 病毒的分离情况
        5.3.3 血清抗体水平
        5.3.4 体重
        5.3.5 病理组织学观察
    5.4 讨论
第六章 H9N2 亚型禽流感灭活疫苗免疫效果研究
    6.1 试验材料
        6.1.1 病毒
        6.1.2 SPF 鸡胚及 SPF 鸡
        6.1.3 主要试剂和仪器
    6.2 试验方法
        6.2.1 HuN33/PR8 株禽流感灭活疫苗的制备
        6.2.2 HA 基因和 NA 基因同源性的分析
        6.2.3 测定攻毒株病毒的 EID50
        6.2.4 病毒株的抗原性分析
        6.2.5 灭活疫苗免疫效力试验
    6.3 试验结果
        6.3.1 HA 和 NA 基因的同源率比较
        6.3.2 病毒株 EID50测定
        6.3.3 病毒株抗原性分析
        6.3.4 灭活疫苗免疫效力试验
    6.4 讨论
第七章 结论
参考文献
附录
    附录1 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 HA 基因组序列
    附录2 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 NA 基因组序列
    附录3 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 PA 基因组序列
    附录4 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 PB1 基因组序列
    附录5 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 PB2 基因组序列
    附录6 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 NP 基因组序列
    附录7 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 NS 基因组序列
    附录8 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 M 基因组序列
    附录9 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 HA 基因的核苷酸和氨基酸的同源性（右上为核苷酸，左下为氨基酸）
    附录10 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 NA 基因的核苷酸和氨基酸的同源性（右上为核苷酸，左下为氨基酸）
    附录11 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 PA 基因的核苷酸和氨基酸的同源性（右上为核苷酸，左下为氨基酸）
    附录12 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 PB1 基因的核苷酸和氨基酸的同源性（右上为核苷酸，左下为氨基酸）
    附录13 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 PB2 基因的核苷酸和氨基酸的同源性（右上为核苷酸，左下为氨基酸）
    附录14 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 NP 基因的核苷酸和氨基酸的同源性（右上为核苷酸，左下为氨基酸）
    附录15 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 NS 基因的核苷酸和氨基酸的同源性（右上为核苷酸，左下为氨基酸）
    附录16 30 株 H9N2 亚型禽流感病毒 M 基因的核苷酸和氨基酸的同源性（右上为核苷酸，左下为氨基酸）
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
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本文编号：3108154