马泰勒虫和驽巴贝斯虫半胱氨酸蛋白酶截短基因的克隆表达及其生物信息学分析
发布时间：2021-03-30 09:21
旨在克隆、表达马泰勒虫（Theileria equi）和驽巴贝斯虫（Babesia caballi）半胱氨酸蛋白酶（cystein protease,CP）基因,并对其进行生物信息学预测和分析。提取马泰勒虫和驽巴贝斯虫的DNA,以此为模板扩增目的基因。利用克隆技术和原核表达系统克隆表达CP,用尿素透析法进行纯化。通过Dot blot验证其与相应阳性血清特异性反应。应用MAGA软件和Prot Param、TMHMM、SignalP-5.0、Antibody Epitope Prediction、SYFPEITHII、ProPred及EzMol2.1等在线分析软件分析T.equi-CP和B.caballi-CP的基因及其蛋白序列。成功构建了重组质粒GST-T.equi-CP和GST-B.caballi-CP,经SDS-PAGE试验结果显示该基因表达的蛋白以包涵体形式高效表达,并能与相应阳性血清特异性反应。对T.equi-CP和B.caballi-CP基因编码蛋白进行系统发育分析发现,与其他原虫物种相比,系统发育分析结果与其原生动物学分类结果一致。经生物信息学分析预测显...
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(10)北大核心CSCD
【文章页数】：10 页
【部分图文】：
T.equi-CP和B.caballi-CP蛋白的3D模型构建
通过 T. equi-CP 基因同源物种氨基酸序列进化分析,结果如图6所示,本文所研究的T. equi-CP与马泰勒虫在同一分支上属于马泰勒虫半胱氨酸蛋白酶,与其遗传距离最近的为Theileria equi strain WA(XP_004832412.1);马泰勒虫半胱氨酸蛋白酶与牛环形泰勒虫进化关系最近,其次分别为尤氏泰勒虫、东方泰勒虫和小泰勒虫,而巴贝斯虫属自成一支。图3 诱导时间及IPTG浓度对GST-B. caballi-CP蛋白表达的影响
诱导时间及IPTG浓度对GST-B. caballi-CP蛋白表达的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]羊传染性脓疱病毒NZ2毒株CBP蛋白结构分析与表位预测[J]. 成伟伟,陈伯祥,常攀峰,杨明,赵子惠. 中国动物检疫. 2019(12)
[2]广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶AcCBL1和AcCBL2基因的克隆、表达及鉴定[J]. 白慧芳,柯琪文,陈韵秋,刘芷晴,张玲敏,吴春云,袁桂秀,詹希美,程梅. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(05)
[3]蜱半胱氨酸蛋白酶分子研究进展[J]. 于新茂,周金林. 中国动物传染病学报. 2015(05)
[4]寄生虫半胱氨酸蛋白酶研究进展[J]. 宋军科,才学鹏,骆学农,林青,窦永喜,于三科. 动物医学进展. 2011(12)
[5]华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶基因克隆表达和血清学诊断效果[J]. 江文才,金小林,沈明学,曹汉钧,徐祥珍,蒋岗,陶志勇,高琪. 中国血吸虫病防治杂志. 2011(06)
[6]捻转血矛线虫的肠道抗原研究进展[J]. 李卫华,汪明. 中国动物检疫. 2004(08)
[7]寄生虫的半胱氨酸蛋白酶[J]. 邱宗文. 国外医学(寄生虫病分册). 2003(04)
博士论文
[1]弓形虫半胱氨酸蛋白酶Metacaspases功能及作用机制[D]. 李木子.中国农业大学 2017
硕士论文
[1]华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶克隆表达、组织定位及免疫学特性研究[D]. 何勉.广西医科大学 2018
[2]旋毛虫半胱氨酸蛋白酶TsCP1的克隆、表达及鉴定[D]. 曲自刚.中国农业科学院 2012
[3]恶性疟原虫半胱氨酸蛋白酶FP2的抑制剂筛选及其活性机理研究[D]. 陈曈.华东理工大学 2010
[4]镰形扇头蜱半胱氨酸蛋白酶基因的克隆及免疫效果研究[D]. 陈灵芝.安徽农业大学 2004
本文编号：3109281
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(10)北大核心CSCD
【文章页数】：10 页
【部分图文】：
T.equi-CP和B.caballi-CP蛋白的3D模型构建
通过 T. equi-CP 基因同源物种氨基酸序列进化分析,结果如图6所示,本文所研究的T. equi-CP与马泰勒虫在同一分支上属于马泰勒虫半胱氨酸蛋白酶,与其遗传距离最近的为Theileria equi strain WA(XP_004832412.1);马泰勒虫半胱氨酸蛋白酶与牛环形泰勒虫进化关系最近,其次分别为尤氏泰勒虫、东方泰勒虫和小泰勒虫,而巴贝斯虫属自成一支。图3 诱导时间及IPTG浓度对GST-B. caballi-CP蛋白表达的影响
诱导时间及IPTG浓度对GST-B. caballi-CP蛋白表达的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]羊传染性脓疱病毒NZ2毒株CBP蛋白结构分析与表位预测[J]. 成伟伟,陈伯祥,常攀峰,杨明,赵子惠. 中国动物检疫. 2019(12)
[2]广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶AcCBL1和AcCBL2基因的克隆、表达及鉴定[J]. 白慧芳,柯琪文,陈韵秋,刘芷晴,张玲敏,吴春云,袁桂秀,詹希美,程梅. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2018(05)
[3]蜱半胱氨酸蛋白酶分子研究进展[J]. 于新茂,周金林. 中国动物传染病学报. 2015(05)
[4]寄生虫半胱氨酸蛋白酶研究进展[J]. 宋军科,才学鹏,骆学农,林青,窦永喜,于三科. 动物医学进展. 2011(12)
[5]华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶基因克隆表达和血清学诊断效果[J]. 江文才,金小林,沈明学,曹汉钧,徐祥珍,蒋岗,陶志勇,高琪. 中国血吸虫病防治杂志. 2011(06)
[6]捻转血矛线虫的肠道抗原研究进展[J]. 李卫华,汪明. 中国动物检疫. 2004(08)
[7]寄生虫的半胱氨酸蛋白酶[J]. 邱宗文. 国外医学(寄生虫病分册). 2003(04)
博士论文
[1]弓形虫半胱氨酸蛋白酶Metacaspases功能及作用机制[D]. 李木子.中国农业大学 2017
硕士论文
[1]华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶克隆表达、组织定位及免疫学特性研究[D]. 何勉.广西医科大学 2018
[2]旋毛虫半胱氨酸蛋白酶TsCP1的克隆、表达及鉴定[D]. 曲自刚.中国农业科学院 2012
[3]恶性疟原虫半胱氨酸蛋白酶FP2的抑制剂筛选及其活性机理研究[D]. 陈曈.华东理工大学 2010
[4]镰形扇头蜱半胱氨酸蛋白酶基因的克隆及免疫效果研究[D]. 陈灵芝.安徽农业大学 2004
本文编号：3109281
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