犬细小病毒单克隆抗体的制备与应用

发布时间：2021-03-31 23:13

　　犬细小病毒病（canine parvovirus disease, CPVD）是一种由犬细小病毒（canine parvovirus,CPV）感染引起的以出血性肠炎或非化脓性心肌炎为主要特征的病毒性传染病,该病传播速度快,各种年龄和性别犬均可感染,幼犬的死亡率高达70%,成年犬隐形带毒并持续向外界排毒的现象普遍存在,现已成为危害我国养犬业健康发展的重要传染病之一,因此,建立快速、准确的诊断方法对CPVD的防治至关重要。本研究旨在制备抗CPV单克隆抗体,建立CPVD双抗体夹心ELISA和胶体金免疫层析试纸条检测方法,为CPVD的快速检测和诊断提供帮助。本文内容包括以下四个部分：试验一：犬细小病毒的分离及其VP2基因分子特征分析从犬细小病毒病免疫预防失败犬体内分离到一株犬细小病毒（CPV）,命名为Js12。该病毒可凝集猪的红细胞,对乙醚不敏感,pH3.0不能灭活病毒,pHH10.0可使病毒失去感染性,56℃作用60min病毒仍有活性,80℃作用30min可使病毒失活。序列分析,JS12属于CPV-2a亚型,VP2基因全长1755nt,共编码584aa,与国外CPV毒株VP2基因的核苷酸序列... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语
第一篇 文献综述 犬细小病毒病研究进展
    1 犬细小病毒病概况
        1.1 起源和发展
        1.2 感染宿主范围
        1.3 流行现状
        1.4 临床症状
    2 犬细小病毒病的病原特性
        2.1 形态特点和生物学特性
        2.2 培养特性
        2.3 基因组结构与编码蛋白
        2.4 抗原性
    3 犬细小病毒病的诊断
        3.1 临床诊断
        3.2 病毒分离
        3.3 电镜检查
        3.4 免疫学检测方法
        3.5 分子生物学检测方法
    4 犬细小病毒的防控
        4.1 弱毒疫苗
        4.2 灭活疫苗
        4.3 基因工程亚单位疫苗
        4.4 核酸疫苗
    5 犬细小病毒病的治疗
    参考文献
第二篇 试验研究
    第一章 犬细小病毒的分离及其VP2基因分子特征分析
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 细胞、毒株和动物
            1.2 主要试剂
            1.3 病料采集与处理
            1.4 病毒分离与培养
            1.5 病毒滴度的测定
            1.6 动物发病试验
            1.7 病毒生物学特性分析
            1.8 VP2基因的扩增
            1.9 VP2基因的克隆
            1.10 VP2基因的序列分析
            1.11 VP2蛋白的立体结构分析
            1.12 VP2蛋白的诱导表达
            1.13 重组VP2蛋白的抗原性分析
        2 结果
            2.1 病毒分离与培养
            2.2 病毒滴度的测定
            2.3 动物发病试验
            2.4 病毒生物学特性分析
            2.5 VP2基因的扩增与克隆
            2.6 VP2基因的序列分析
            2.7 VP2蛋白的立体结构分析
            2.8 VP2蛋白的诱导表达
            2.9 重组VP2蛋白的抗原性分析
        3 讨论
        参考文献
        Abstract
    第二章 分泌犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 细胞、病毒和动物
            1.2 主要试剂
            1.3 CPV抗原的纯化
            1.4 动物免疫
            1.5 细胞融合
            1.6 间接ELISA检测方法的建立
            1.7 杂交瘤细胞株的筛选
            1.8 阳性杂交瘤细胞株的亚克隆
            1.9 单克隆抗体腹水的制备
            1.10 单克隆抗体特异性鉴定
            1.11 单克隆抗体效价测定
            1.12 单克隆抗体亚类鉴定
            1.13 单克隆抗体抗原识别位点差异性分析
            1.14 单克隆抗体中和活性测定
            1.15 杂交瘤细胞株稳定性测定
        2 结果
            2.1 CPV抗原的纯化
            2.2 间接ELISA检测方法的建立
            2.3 单克隆抗体特异性鉴定
            2.4 单克隆抗体效价测定
            2.5 单克隆抗体亚类鉴定
            2.6 单克隆抗体抗原识别位点差异性分析
            2.7 单克隆抗体中和活性测定
            2.8 杂交瘤细胞株稳定性测定
        3 讨论
        参考文献
        Abstract
    第三章 犬细小病毒单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 病毒、抗体与动物
            1.2 主要试剂
            1.3 单克隆抗体腹水的制备
            1.4 腹水的纯化
            1.5 单克隆抗体的标记
            1.6 单克隆抗体配对试验
            1.7 捕获抗体和酶标抗体工作浓度的优化
            1.8 夹心ELISA试验条件的优化
            1.9 夹心ELISA判定标准的确定
            1.10 特异性检验
            1.11 敏感性检验
            1.12 重复性检验
            1.13 临床样品检测
        2 材料与方法
            2.1 单克隆抗体配对试验
            2.2 捕获抗体和酶标抗体工作浓度的优化
            2.3 夹心ELISA试验条件的优化
            2.4 夹心ELISA判定标准的确定
            2.5 特异性检验
            2.6 敏感性检验
            2.7 重复性检验
            2.8 临床样品检测
        3 讨论
        参考文献
        Abstract
    第四章 犬细小病毒单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的制备
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 单抗与病料
            1.2 主要试剂及耗材
            1.3 玻璃器皿的处理
            1.4 单克隆抗体纯化
            1.5 胶体金溶液的制备
            1.6 胶体金溶液的鉴定
            1.7 胶体金与抗体的标记
            1.8 试纸条的优化
            1.9 试纸条的组装
            1.10 试纸条特性鉴定
            1.11 临床样品检测
        2 结果
            2.1 胶体金溶液的鉴定
            2.2 胶体金与抗体的标记
            2.3 试纸条的优化
            2.4 试纸条特性鉴定
            2.5 临床样品检测
        3 讨论
        参考文献
        Abstact
全文总结
附录：常用试剂的配制
致谢
攻读学位期间发表的学术论文



本文编号：3112240