抗犬瘟热病毒VHH抗体噬菌体库的构建与筛选

发布时间：2021-04-01 01:23

　　为构建特异性犬瘟热病毒（CDV）的纳米抗体库,获得抗CDV的VHH抗体,本试验利用CDV免疫羊驼,四免后采集外周血淋巴细胞,提取总RNA反转录为cDNA,利用巢式PCR扩增纳米抗体序列。将目的片段连接至pComb3x噬菌体展示载体,并电转至TG1宿主菌,挑取40个克隆进行菌液PCR验证,随机挑选13个阳性单克隆进行测序,计算抗体库库容量,加入辅助噬菌粒拯救获得的噬菌体展示抗体库。经过3轮淘选,富集对CDV结合力高的噬菌体。利用毕赤酵母系统表达两株结合力高的噬菌体,经Ni柱纯化后,利用ELISA进行噬菌体结合力的鉴定。结果表明,四免后羊驼血清效价达1∶25 000,达到建库要求,构建的噬菌体展示文库库容量达3.41×10⁹ PFU。经过3轮淘选,特异性抗体库经稀释100倍后,ELISA检测仍为阳性,表明特异性结合CDV的噬菌体得到明显的富集。ELISA结果表明,两株纯化的纳米抗体与CDV的反应性显著高于对照组。以上结果提示,本研究成功筛选出2株特异性结合CDV的VHH抗体,为VHH抗体在犬瘟热的诊断和治疗方面的应用奠定了基础。 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(06)北大核心

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

VHH基因PCR扩增结果电泳图

菌液PCR结果图

氨基酸序列比对分析

【参考文献】：
期刊论文
[1]兰州地区犬瘟热流行病学调查及其治疗[J]. 祁珊珊,郑红星.  中国畜牧兽医. 2009(10)

博士论文
[1]黄曲霉毒素纳米抗体研制及其免疫分析技术研究[D]. 何婷.中国农业科学院 2016

硕士论文
[1]羊驼来源的天然未免疫及免疫后纳米抗体文库的构建[D]. 刘竞帆.中山大学 2017



本文编号：3112423