脑心肌炎病毒非结构蛋白参与病毒诱导细胞自噬和凋亡的分子机制

发布时间：2021-04-01 17:02

　　脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus, EMCV）是一种重要的人畜共患病的病原体,具有公共卫生意义。EMCV感染的宿主范围广泛,在某些哺乳动物、啮齿动物、灵长类动物乃至人类可引起脑炎、心肌炎或心肌周围炎。猪对EMCV最易感,可造成仔猪急性死亡和实质器官的广泛病理损伤,怀孕母猪的流产、产死胎、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍性疾病。已有的研究表明,EMCV感染可诱导宿主细胞自噬,但病毒蛋白在自噬中的作用以及调控病毒复制的分子机制尚不清楚。本论文研究病毒蛋白参与EMCV诱导的细胞自噬和凋亡及其分子机制,以期为阐明EMCV的致病机制提供科学依据。利用透射电镜、Western blotting和激光共聚焦免疫荧光等技术对EMCV病毒蛋白诱导BHK-21细胞的自噬活性进行分析。结果显示,EMCV的2C和3D蛋白能在其转染表达的细胞胞浆中产生大量的单层膜和双层膜的自噬体样囊泡,而且显著提高了LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ分子的转化及p62分子的降解；在转染的细胞中2C和3D蛋白能与LC3呈点状共定位分布,表明EMCV的2C和3D蛋白参与病毒诱导细胞自噬的过程。进一步研究结果表明,EM... 

【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：85 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

激光共聚焦免疫劳光分析转染PEGFP-LC3质粒的BHK-21细胞中GFP-U:3蛋白点状变化

图3-1 EMCV 2C与Beclini相互作用的验证K:293T细胞中共转染pCMV-HA-2C和pCMV-Myc-Beclinl质粒，转染后36 h,收取细胞蛋白，并用c抗体进行免疫共沉淀：B: BHK-21细胞中转染pCMV-HA-2C质粒，转染后36 h,收取细胞蛋白，和Beclini抗体进行免疫共沉淀。Fig. 3-1 Confirmation of the interaction of EMCV 2C with Beclini

和Myc抗体及相应的炎光一抗輕育，并进行DAW染色，最后利激光共聚焦显微镜观察蛋内在细胞内的分布情况。结果（图3-2A)表明，EMCV 2CLj Beclini共定位丁?细胞质中。进一步分析2C Beclini在EMCV感染BHK-21细胞中的共定位情况。EMCV(M01=0.005)感染BHK-21细胞，同时设立不接毐的对照组，12h后，/4J抗2C和BecHn丨的抗体及相应炎光一抗輕育，并进行DAPI染色，最后利用激光共聚焦显微镜观察蚩白在细胞内的分布情况。结果（图3-2B)表明，在EMCV感染BHK-21细胞中，2C能与内源性的Beclini共定位丁?细胞质中

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪脑心肌炎病毒分离株BJC3全长感染性克隆的构建与拯救病毒鉴定[J]. 张国庆,朱书,盖新娜,郭鑫,陈艳红,查振林,杨汉春.  畜牧兽医学报. 2009(09)
[2]猪脑心肌炎病毒中国分离株的致病性分析[J]. 马良,盖新娜,张家龙,赵婷,陈艳红,杨汉春,郭鑫.  中国兽医杂志. 2008(01)
[3]猪脑心肌炎病毒的分离与鉴定[J]. 盖新娜,杨汉春,郭鑫,吕艳丽,王芳,陈艳红,查振林.  畜牧兽医学报. 2007(01)
[4]规模化猪场脑心肌炎病毒感染的血清学调查[J]. 张家龙,盖新娜,马良,陈艳红,查振林,郭鑫,杨汉春.  中国兽医杂志. 2007(01)
[5]猪脑心肌炎病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 董昕欣,郭鑫,杨汉春,盖新娜,陈艳红,查振林.  中国兽医科学. 2007(01)
[6]猪脑心肌炎病毒结构蛋白VP1基因的克隆与原核表达[J]. 盖新娜,杨汉春,郭鑫,陈艳红,查振林.  中国兽医杂志. 2006(11)

博士论文
[1]猪脑心肌炎病毒VP1基因的原核表达、血清学调查及分离毒株的鉴定[D]. 盖新娜.中国农业大学 2005



本文编号：3113677